气相色谱法测定甘氨酰胺盐酸盐中氯乙酸甲酯的含量

李才岛，韦 华

(海南正瑞医药科技开发有限公司，海南 海口570311)

·药物与临床·

气相色谱法测定甘氨酰胺盐酸盐中氯乙酸甲酯的含量

李才岛，韦 华

(海南正瑞医药科技开发有限公司，海南 海口570311)

目的建立测定甘氨酰胺盐酸盐中氯乙酸甲酯含量的气相色谱法。方法采用气相色谱法。色谱柱为DB-WAX毛细管柱(固定液：聚乙二醇；规格：30.0 m×0.25mm×0.25 μm)，柱温为110℃，FID检测器温度为250℃，进样口温度为200℃，分流比为10:1，顶空瓶平衡温度为85℃，顶空瓶平衡时间为30min。结果氯乙酸甲酯检测浓度的线性范围为0.00800～0.12833mg/ml(r=0.9995)；平均回收率为100.0%(RSD=1.79%)。结论本方法操作简便快捷，结果准确可靠，可用于甘氨酰胺盐酸盐中氯乙酸甲酯的质量控制。

甘氨酰胺盐酸盐；氯乙酸甲酯；气相色谱法

甘氨酰胺盐酸盐是制备新型中枢神经系统药物奥拉西坦的重要原料，奥拉西坦具有激活、保护和促进受损神经细胞功能恢复的特性，临床用于治疗轻中度血管性痴呆、老年性痴呆以及脑外伤等症引起的记忆与智能障碍[1]。甘氨酰胺盐酸盐主要以氯乙酸甲酯为原料，与氨水进行胺化反应制得[2]。氯乙酸甲酯别名为氯醋酸甲酯，是一种外观透明易燃的液体，相对分子质量108.53，熔点-33℃，密度1.236 g/m3(20/20℃)。氯乙酸甲酯是一类具有中等毒性的化学物质，有很强的眼刺激性和中等的皮肤刺激性。急性毒性和亚慢性毒性实验结果显示氯乙酸甲酯对肝脏和肾脏均有毒性作用。2001年新泽西州健康服务部门指出氯乙酸甲酯的慢性毒性作用可能主要表现在致癌性和生殖毒性以及其他的长期慢性疾病如慢性支气管炎等[3-4]。

目前文献报道氯乙酸甲酯的测定方法均是以填充柱为色谱柱的气相色谱法，而以毛细管柱为色谱柱的气相色谱法未见文献报道[5-6]。为了满足实验室检测的需要，我们通过对不同极性的毛细管柱及分离条件进行优选，建立了以聚乙二醇为固定液的毛细管柱为色谱柱，采用顶空进样方式的气相色谱法来测定甘氨酰胺盐酸盐中的氯乙酸甲酯，并对该方法进行了方法学验证研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津GC-2014C型气相色谱仪；氢火焰离子化检测器；DK-3001A型顶空进样器；LC-Solution色谱工作站；赛多利斯CPA225D型电子天平。

1.2 试药 甘氨酰胺盐酸盐(济南富创医药科技有限公司提供；批号：20110301)；氯乙酸甲酯(上海晶纯试剂有限公司提供；批号：5489；含量：100.0%)；水为双重蒸馏水。

2 色谱条件

色谱柱：DB-WAX毛细管柱(固定液：聚乙二醇；规格：30.0 m×0.25mm×0.25 μm)；柱温：110℃；检测器温度：250℃；进样口温度：200℃；分流比：10:1；顶空瓶平衡温度：85℃，顶空瓶平衡时间：30min。

3 试验溶液的制备

对照品溶液的制备：取氯乙酸甲酯适量，精密称定，加水定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液；精密量取5ml，置顶空瓶中，加盖密封，作为对照品溶液。供试品溶液的制备：取甘氨酰胺盐酸盐1.0 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加入5ml水溶解，加盖密封，作为供试品溶液。

4 方法学研究

4.1 色谱柱的选择 通过对不同极性的毛细管进行对比研究，从而选出最佳毛细管色谱柱。取对照品溶液，依照上述色谱条件进行测定。结果，DB-WAX毛细管柱具有保留时间较短，峰形对称性好，拖尾因子小于1.5，理论板数高，色谱峰的响应值适中等特点，故最终选择用DB-WAX毛细管柱来测定氯乙酸甲酯，见表1。

表1 色谱柱的选择试验结果

4.2 空白溶剂干扰试验 取空白溶剂(水)，依照上述色谱条件进行测定，记录色谱图。结果，在空白溶剂色谱图中未有色谱峰出现，说明空白溶剂对测定无干扰。

4.3 系统适用性试验 取氯乙酸甲酯适量，精密称定，加水定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液；精密量取5ml，置顶空瓶中，加盖密封，作为对照品溶液。依照上述色谱条件进行测定，连续测定5份。结果，取对照品溶液连续测定5次，所测得峰面积的RSD为0.95%，保留时间的RSD为0.03%，拖尾因子小于1.5，理论板数大于5000，说明该色谱条件符合系统适用性试验要求。

4.4 线性与范围试验 取氯乙酸甲酯适量，精密称定，加水定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品贮备液；精密量取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得相对浓度为20%、40%、60%、80%、100%、120%的线性溶液，依照上述色谱条件进行测定。结果以线性溶液的浓度C为横坐标(X)，峰面积A为纵坐标(Y)，进行线性回归，得回归方程y=837619x-2649.4(r=0.9995)。结果，氯乙酸甲酯测定浓度在0.00800～0.12833mg/ml(定量限～120%)范围内与峰面积的线性关系良好，线性关系曲线图见图1。

4.5 定量限 取4.4项下20%线性溶液，采用稀释法，逐级稀释，依照上述色谱条件进行测定，当记录的色谱图中主峰与基线噪音峰信号的强度比约为10:1时注入仪器的量，即为氯乙酸甲酯的定量限。结果，氯乙酸甲酯的定量限为8 μg。

图1 氯乙酸甲酯的线性关系曲线图

4.6 重复性试验 取甘氨酰胺盐酸盐约1.0 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加入水5ml溶解，摇匀，加盖密封，作为供试品溶液，平行操作6份；另取氯乙酸甲酯适量，精密称定，加水定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液，精密量取5ml，置顶空瓶，加盖密封，作为对照品溶液。依照上述色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算供试品中氯乙酸甲酯的含量。结果，重复测定本品6份，均未检测到氯乙酸甲酯，说明该方法的测定重复性良好。

4.7 加样回收率试验 取氯乙酸甲酯50mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得相对浓度为80%、100%、120%的回收率对照品溶液。取甘氨酰胺盐酸盐约1.0 g，精密称定，置顶空瓶中，共九份，将其分成三组；往第一组样品中加入80%回收率对照品溶液5ml，往第二组样品中加入100%回收率对照品溶液5ml，往第三组样品中加入120%回收率对照品溶液5ml，振摇使溶解后，加盖密封，即得相对浓度为80%、100%、120%的回收率溶液；另取氯乙酸甲酯适量，精密称定，加水定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液，精密量取5ml，置顶空瓶，加盖密封，作为对照品溶液，依照上述色谱条件进行测定，求出回收率。结果，氯乙酸甲酯的平均回收率为100.0%，RSD为1.79%，说明该方法的测定准确度较高，见表2。

表2 回收率试验结果

4.8 样品测定 取本品约1.0 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加入水5ml溶解，加盖密封，作为供试品溶液；另取氯乙酸甲酯适量，精密称定，加水定量稀释制成每1ml中含0.1mg溶液，精密量取5ml，置顶空瓶中，加盖密封，作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典2010年版二部附录VE)测定。以DB-WAX为色谱柱，柱温为110℃；检测器温度为250℃；进样口温度为200℃；分流比为10:1；顶空瓶平衡温度为85℃，平衡时间为30min。取供试品溶液和对照品溶液分别顶空进样，记录色谱图；按外标法以峰面积计算即得。结果，在该批次甘氨酰胺盐酸盐样品中均未检测到氯乙酸甲酯。

5 讨 论

5.1 溶剂的选择 毛细管顶空进样法通常以水作为溶剂，根据甘氨酰胺盐酸盐的理化性质可知本品在水中易溶，另外经查阅相关文献资料可知氯乙酸甲酯在水中的溶解度为：28 g/L(20℃)，可采用水作为本品测定的溶剂；另由空白溶剂干扰试验结果可知水对本品的测定无干扰，因此采用水作为溶剂来配制试验溶液。

5.2 色谱柱的选择 氯乙酸甲酯为极性溶剂，根据相似相容的原理适宜采用极性或中极性的毛细管色谱柱进行测定，同时通过对不同极性的毛细管柱进行筛选，最终确定以聚乙二醇(或极性相近)为固定液的毛细管柱作为本品测定的色谱柱。

5.3 顶空条件的选择 顶空平衡温度一般应低于溶解供试品所用溶剂的沸点10℃以下，能满足检测灵敏度即可；本品测定所用的溶剂为水，当顶空平衡温度设定为85℃时，所测得氯乙酸甲酯的峰面积符合测定要求，该方法的检测灵敏度较高；顶空平衡时间一般为30～45min，以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达到平衡，同时顶空平衡时间通常不宜过长，如超过60min，可能引起顶空瓶的气密性变差，导致定量准确性的降低，当顶空平衡时间设定为30min时，系统适用性及定量准确性均符合要求。

综上所述，本方法操作简便、快捷，结果准确、可靠、可用于甘氨酰胺盐酸盐中氯乙酸甲酯的质量控制。

[1]郑 辉,刘 娟,施巧月,等.奥拉西坦中间体的合成研究[J].化工中间体,2012,1:31-33.

[2]张 玮.甘氨酰胺盐酸盐的合成工艺研究[J].河北化工,2010,33 (4):22-23.

[3]罗 红,刘家发,张啟嫒,等.氯乙酸甲酯的急性和亚慢性毒性实验研究[J].中国职业医学,2007,34(2):162-163.

[4]Eriksong S,Pettersson H.Toxicological evaluation of trichothecenes in animal feed[J].Anim Feed Sci Technol,2004,114(1-4):205-239.

[5]陆 宽.气相色谱面积归一法测定氯乙酸甲酯[J].杭州化工,2002,32(2):36-38.

[6]邵生文,梁 禄.作业场所空气中氯乙酸甲酯的气相色谱测定法[J].中华劳动卫生职业病杂志,1999,17(1):56.

Content determination of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride by gas chromatography.

LI Cai-dao,WEI Hua.Hainan Zhengrui Medical Technology Development Co.,Ltd.,Haikou570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo establish a gas chromatographic method for determining the content of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride.MethodsGas chromatography(GC)was adopted with DB-WAX capillary column(Stationary liquid:polyethylene glycol;Specification:30.0 m×0.25mm×0.25 μm),column chromatography of110℃,FID detector temperature of250℃,injection port temperature of200℃,split ratio of10:1,equilibrium temperature of empty bottles of85℃,and equilibrium time of empty bottles of30minutes.ResultsThe linear range of methyl chloroacetate detected was0.00800～0.12833mg/ml(r=0.9995).The average recovery rate was100.0% (RSD=1.79%).ConclusionThis method is fast,easy to operate,accurate and reliable,which can be used in the quality control of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride.

Glycinamide hydrochloride;Methyl chloroacetate;Gas chromatography(GC)

R971

C

1003—6350（2015）22—3394—03

2014-12-28)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.22.1230

李才岛。E-mail：licaidao2005@163.com