CCN1和Mel-18在结肠癌中的表达及其临床病理意义

庄粤蕾

(湛江中心人民医院病理科，广东 湛江 524037)

CCN1和Mel-18在结肠癌中的表达及其临床病理意义

庄粤蕾

(湛江中心人民医院病理科，广东 湛江 524037)

目的 探讨CCN1和Mel-18在结肠癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组化法观察56例手术切除的结肠癌组织及相应的癌旁组织中CCN1和Mel-18的表达情况，分析两种蛋白与结肠癌临床病理特征的关系及预后意义。结果CCN1蛋白在结肠癌组织中的表达阳性率为76.79%，明显高于相应癌旁组织的14.29%，差异有统计学意义(P＜0.05)，且在不同临床分期及有无淋巴结转移结肠癌组织中表达的阳性率比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)；Mel-18蛋白在结肠癌组织中的表达阳性率为39.29%，明显低于相应癌旁组织的66.07%，差异有统计学意义(P＜0.05)，且在不同临床分期及有无淋巴结转移结肠癌组织中表达的阳性率比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)；相关性分析显示，CCN1和Mel-18蛋白在结肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.472，P＜0.05)。结论CCN1在结肠癌中的表达上调和Mel-18在结肠癌中的表达下调可能与结肠癌的发生有关，有可能成为新的预测结肠癌恶性程度及是否发生远处转移的有效分子标志物。

结肠癌；CCN1；Mel-18；

CCN1是一种生长因子诱导产生的富含半胱氨酸的分泌性肝素连接蛋白，Mel-18属于多梳基因家族的重要成员，已有多项研究发现CCN1和Mel-18蛋白在肿瘤的发生、发展中起重要作用，但两种蛋白在不同肿瘤中的研究结果并不一致[1-2]。本研究分别检测了CCN1和Mel-18蛋白在结肠癌组织及相应的癌旁正常组织中的表达情况，并分析两种蛋白蛋白的表达与结肠癌的临床病理特征的相关性，以初步探讨CCN1和Mel-18蛋白与结肠癌发生和发展的关系，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院病理科2011年6月至2013年4月手术切除的结肠癌及相应癌旁结肠黏膜组织(距癌灶边缘≥5 cm[3])标本各56例，均经术后病理组织学确诊。所有病例术前均未行放化疗治疗，临床资料齐全，均签署知情同意书。其中男性32例，女性24例；年龄38～79岁，平均(55.82±7.73)岁。

1.2 方法 采用免疫组化二步法检测结肠癌及相应癌旁正常组织中CCN1、Mel-18的表达情况。鼠抗人多克隆抗体CCN1、兔抗人多克隆抗体Mel-18和免疫组织化学试剂盒均购自北京博奥森生物有限公司。使用时CCN1抗体按1:200稀释，Mel-18抗体按1:100稀释，DAB显色，苏木素轻度复染，盐酸酒精固定，梯度酒精脱水，透明封片，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，光镜下观察并摄片。采用已知阳性标本切片作阳性对照，并采用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定[4]所有标本切片均在双盲条件下观察，并根据阳性细胞计数及着色强弱判定表达结果。选取5个高倍镜视野，根据阳性细胞率和着色强弱综合判断。阳性细胞率：0%为0分，1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～70%为3分，71%～100%为4分。着色强弱：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分。两项得分相乘：0～4分为阴性(-)表达，≥5分为阳性(+)表达。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0统计学软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，计量资料比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，结肠癌组织中CCN1、Mel-18蛋白表达间的相关性检验采用Spearman相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结肠癌及相应癌旁组织中CCN1和Mel-18的表达 CCN1阳性染色呈棕黄色或棕褐色颗粒状，定位于细胞浆，Mel-18阳性染色呈黄色颗粒状，定位于细胞核，见图1。CCN1蛋白在结肠癌组织中的阳性表达率明显高于相应癌旁正常组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)；Mel-18蛋白在结肠癌组织中的阳性表达率明显低于相应癌旁正常组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

图1 CCN1和Mel-18在结肠癌组织及相应癌旁组织中的表达

表1 CCN1和Mel-18蛋白在结肠癌及相应癌旁正常组织中阳性表达率的比较[例(%)]

2.2 CCN1和Mel-18蛋白与结肠癌临床病理特征的关系 CCN1和Mel-18蛋白在结肠癌组织中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无关(P＞0.05)。CCN1蛋白在不同临床分期结肠癌组织中的阳性表达率比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，以Ⅲ、Ⅳ期最高，其次为Ⅱ期，最低为Ⅰ期；CCN1蛋白在有淋巴结转移结肠癌组织中的阳性表达率明显高于无淋巴结转移结肠癌组织(P＜0.05)；Mel-18蛋白在不同临床分期结肠癌组织中的阳性表达率比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，以I期最高，其次为Ⅱ期，最低为Ⅲ、IV期；CCN1蛋白在有淋巴结转移结肠癌组织中的阳性表达率明显低于无淋巴结转移结肠癌组织(P＜0.05)，见表2。

表2 CCN1和Mel-18蛋白的表达与结肠癌临床病理特征的关系

2.3 CCN1和Mel-18蛋白在结肠癌组织中表达的相关性 结肠癌组织中CCN1和Mel-18蛋白双阳性表达率为17.86%(10/56)，双阴性率为1.79%(1/56)，可见CCN1和Mel-18蛋白在结肠癌组织中的表达水平呈负相关(r=-0.472，P=0.008)，见表3。

表3 CCN1和Mel-18蛋白在结肠癌组织中表达的相关性(例)

3 讨论

结肠癌是我国常见恶性肿瘤之一，近年来由于人们饮食习惯、生活方式发生变化，以及环境、基因突变等因素，结肠癌的发病率呈逐年上升趋势，且具有年轻化趋势[5]。结肠癌的发生、发展是一个复杂的多阶段过程，癌基因激活、抑癌基因失活及肿瘤血管生成是其发生、发展的基础。

CCN1是结缔组织生长因子(CCN)家族成员之一[6]，近年来多项研究发现CCN1在肿瘤微血管形成及肿瘤细胞增殖、粘附、扩散转移、耐药性产生等过程中起重要作用[7]。国内外大量研究[8-10]显示，CCN1的功能具有显著的组织特异性，其在不同组织来源的肿瘤中的表达水平及功能差异较大。在乳腺癌、胃癌、食管癌、前列腺癌等肿瘤组织中CCN1表达水平明显升高，在功能上可增强肿瘤细胞增殖、迁徙能力；而在非小细胞癌、子宫内膜癌、宫颈癌等组织中CCN1表达水平明显下降，在功能上起抑癌基因的作用，低表达可引发肿瘤形成和发展。本研究结果显示，CCN1在结肠癌组织中的阳性表达率明显高于相应的癌旁组织，且随着结肠癌临床分期进展和淋巴结转移，CCN1阳性表达率明显升高，提示CCN1参与了结肠癌的发生，且在结肠癌的发展中起促进肿瘤细胞增殖、迁徙作用。

Mel-18属于多梳基因家族成员[11]，有研究报道[12]Mel-18在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等肿瘤组织中表达强度降低，外源性Mel-18过表达可导致肿瘤细胞生长和增殖速度减慢，提示Mel-18在肿瘤进展过程中起抑制作用。Mel-18抑制肿瘤进展的机制可能是：抑制cyclin D2活性，导致其与CDK复合物结合受阻，阻滞肿瘤细胞由G1期转化至S期；抑制c-myc/cdc25通路，进而抑制cyclin-CDK复合物的活性；通过与具有癌基因作用的Hox基因结合，从而抑制其活性[13-14]。本研究显示Mel-18在结肠癌组织中的阳性表达率明显低于相应的癌旁组织，且随着结肠癌临床分期进展和淋巴结转移，Mel-18阳性表达率明显降低，提示Mel-18的异常表达与结肠癌的发生发生有关，其在结肠癌中可能起抑癌基因的作用，在结肠癌的发生和发展过程中起抑制作用。

本研究发现CCN1和Mel-18在结肠癌组织中的表达呈显著负相关，CCN1在结肠癌中的表达上调，而Mel-18表达下调，进一步提示CCN1在结肠癌发生发展过程中起癌基因的作用，促进结肠癌的发生发展，而Mel-18起抑癌基因的作用，抑制结肠癌的发生发展。本研究结果证实CCN1在结肠癌中的表达上调和Mel-18在结肠癌中的表达下调可能与结肠癌的发生有关，有可能成为新的预测结肠癌恶性程度及是否发生远处转移的有效分子标志物，其作用机制有待进一步深入研究。

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Expression and clinical significance of CCN1 and Mel-18 in colon cancer.

ZHUANG Yue-lei.Department of Pathology,Zhanjiang People's Central Hospital,Zhanjiang 524037,Guangdong,CHINA

Objective To discuss the expression and clinical significance of CCN1 and Mel-18 in colon cancer.MethodsFifty-six cases of colon cancer tissues and their matched pericarcinous tissues were respectively detected by immunohistochemical technique,to analyze the relationship of the expression of CCN1 and Mel-18 protein with the clinical pathological features.ResultsThe positive rate of CCN1 expression in colon cancer tissues (76.76%)was significantly higher than that of pericarcinous tissue(14.29%,P＜0.05),and there were no significant difference of CCN1 positive expression between different clinical stages and lymph node metastasis(P＜0.05).The positive rate of Mel-18 expression in colon cancer tissues(39.29%)was significantly lower than that of pericarcinous tissue(66.07%,P＜0.05),and there were no significant difference of Mel-18 positive expression between different clinical stages and lymph node metastasis(P＜0.05).There was a negative correlation between the expression of CCN1 and Mel-18 in colon cancer tissues(r=-0.472,P＜0.05).ConclusionThe up-regulated CCN1 expression and down-regulated Mel-18 expresson may be closely related with the occurrence of colon cancer,as a possible effective molecular markers to forecast the malignant degree and distant metastasis of colon cancer.

Colon cancer;CCN1;Mel-18

R735.3+5

A

1003—6350（2015）14—2153—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.14.0777

2014-12-08)

庄粤蕾。E-mail：785553163@qq.com