血液对中药金银花抑菌作用的影响

蔡宏亚，李红赞，廖少玲，苟占平

（广东医学院，广东东莞523808）

血液对中药金银花抑菌作用的影响

蔡宏亚，李红赞，廖少玲，苟占平

（广东医学院，广东东莞523808）

目的测定金银花水煎剂在营养琼脂培养基和血琼脂培养基中对临床常见致病菌的抗菌活性，以评价其抗菌能力及血液对其抗菌能力的影响。方法采用琼脂连续二倍稀释法分别测定金银花水煎液在营养琼脂培养基和血琼脂培养基上的最低抑菌浓度。结果在营养琼脂培养基上，金银花水煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、卡他球菌、表皮葡萄球菌等6种致病菌的抑制作用均较强，其中对金黄色葡萄球菌、卡他球菌和表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度仅有3.125 mg/mL；在血琼脂培养基上，金银花水煎剂对同一种致病菌的抑制作用显著降低。结论血液对中药金银花的抑菌作用有显著影响，在金银花的使用和相关药物开发时应给予关注。

金银花； 微生物敏感性试验； 葡萄球菌，金黄色； 葡萄球菌，表皮； 血液

金银花为常用中药[1]，约1/3的中药制剂含有金银花[2]，比如双黄连口服液、清开灵注射液均以其为主要成分[3]。研究表明金银花中富含多种化学成分[4]，具有抗菌、抗病毒、抗炎、解热、增强机体免疫力、止血、利尿、降血脂、兴奋中枢和抗生育等药理作用[5]。虽然1995年和2000年版《药典》均规定其来源为忍冬的干燥花蕾或待初开的花[4-5]，但关于其品种质量的争论从未停止[6]。现对其质量控制的研究多集中在测定化学成分的含量[7]。因素有“中药中的抗生素”之称[8]，所以研究其抑菌活性也是很有必要的[9]。但影响药材抑菌活性的因素较多，关于血液对金银花抑菌作用影响的研究尚鲜见报道。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验菌株 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、福氏志贺菌由四川卫生管理干部学院微生物教研室提供；表皮葡萄球菌、卡他球菌由成都中医药大学微生物教研室提供。

1.1.2 原药材 实验材料由河南中医学院曹继华教授收集，并鉴定为忍冬科忍冬属植物忍冬的干燥花蕾，且为地道正品金银花“密银花”。

1.1.3 试剂 琼脂粉和蛋白胨（广州海洋生物有限公司）、牛肉浸出粉（灵武市泰运生化制品有限公司）、脱纤维兔血（自制）、分析纯氯化钠等。

1.2 方法

1.2.1 营养肉汤培养基[10]取蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、蒸馏水，按照《中国药典》规定比例混合，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节灭菌后pH值为7.2±0.2，在115℃灭菌30 min。

1.2.2 营养琼脂培养基[10]依照上述营养肉汤培养基的处方及制法，按照《中国药典》规定比例加入适量琼脂，调节灭菌后pH值为7.2±0.2，在115℃灭菌30 min。

1.2.3 血琼脂培养基[11]将营养琼脂培养基加热溶化，待冷却至50℃左右，以无菌操作加入10%无菌脱纤维兔血，摇匀，置冰箱备用。

1.2.4 供试液的制备 称取“密银花”药材5 g，加蒸馏水适量，煎煮3次，第1次40 min，后2次各30 min，合并水煎液，浓缩至6 mL，定容于消过毒的10 mL容量瓶中，得500 mg/mL的供试液，冰箱中保存备用。

1.2.5 琼脂二倍连续稀释法抑菌试验 将上述菌种接种在营养琼脂平板上，于37℃恒温箱内培养48 h活化，用白金环挑起典型菌落接种营养肉汤管中，于37℃恒温箱内培养24 h，进行活菌计数，用生理盐水将菌液稀释为1×107cfu/mL，供实验备用。将供试药物原液用加热融化后的营养琼脂培养基从第1管进行倍比稀释至第8管，稀释倍数分别为1∶5、1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640，药物浓度依次为100.000、50.000、25.000、12.500、6.250、3.125、1.562、0.781 mg/mL共 8种浓度，倾注于平板上。用接种环取上述菌液1环，接种在含不同浓度药物的营养琼脂平板上，置于37℃恒温箱内培养24 h，观察结果。将血琼脂培养基同法操作，观察结果。

2 结 果

2.1 营养琼脂培养基中抑菌作用 金银花水煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、卡他球菌、表皮葡萄球菌等6种致病菌的抑制作用都较强，其中对金黄色葡萄球菌、卡他球菌和表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度仅有3.125 mg/mL，见表1。

2.2 血琼脂培养基中抑菌作用 金银花水煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、卡他球菌、表皮葡萄球菌等6种致病菌的抑制作用均较弱，其中对金黄色葡萄球菌、卡他球菌和表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度高达100 mg/mL，见表2。

表1 普通营养琼脂培养基中抑菌作用

表2 血琼脂培养基中抑菌作用

3 讨 论

金银花为临床常用的清热解毒的重要中药，素有“中药中的抗生素”之称，所以金银花的抑菌试验效果是检验其药材质量的重要手段。本研究结果显示，在普通营养琼脂培养基中，正品金银花“密银花”水煎剂对黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、卡他球菌、表皮葡萄球菌等6种致病菌的抑制作用都较强，其中对金黄色葡萄球菌、卡他球菌和表皮葡萄球菌的抑制作用最强，其最低抑菌浓度仅有3.125 mg/mL，对肠道杆菌大肠杆菌、福氏志贺菌和鼠伤寒沙门菌的抑制作用也较强，前二者最低抑菌浓度为6.250 mg/mL，后者为12.500 mg/mL。说明金银花对肠道中存在的上述病原球菌和肠道杆菌抑制作用是很明显的。中药发挥临床疗效是由于其具有的生物活性物质，而传统中药大多以水煎剂形式口服，其活性物质多经口服后被小肠等吸收入血液而发生药效，所以培养基中加入血液后更加与药物吸收入血的环境类似。本研究结果表明，相同的金银花水煎剂对同一种致病菌由于有血液存在而使其抑制作用显著降低。

综上所述，血液对中药金银花的抑菌作用有显著影响，在金银花的使用和相关药物开发时应给予关注。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.12.041

:B

:1009-5519（2015）12-1857-02

2015-01-06）

广东省科技计划项目（2009B030801336）；2013年广东医学院临床实验改革项目（JY1267）。

蔡宏亚（1972-），女，甘肃天水人，实验师，主要从事实验教学和实验室管理工作；E-mail：gdzpgou@gdmc.edu.cn。

苟占平（E-mail：534346501@qq.com）。