新生儿细菌性肺炎和轮状病毒感染T淋巴细胞亚群及细胞因子的变化分析

董　焱

(上海交通大学医学院附属第三人民医院 儿科, 上海, 201999)

新生儿细菌性肺炎和轮状病毒感染T淋巴细胞亚群及细胞因子的变化分析

董焱

(上海交通大学医学院附属第三人民医院 儿科, 上海, 201999)

摘要:目的分析新生儿感染细菌性肺炎与感染轮状病毒后机体T淋巴细胞亚群以及细胞因子的变化。方法感染细菌性肺炎新生儿25例作为细菌组，感染轮状病毒新生儿25例作为感染组，单纯高胆红素血症新生儿25例作为对照组。检测外周血CD4+淋巴因子及相关淋巴细胞亚群水平。结果与对照组相比，细菌组与病毒组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较低(P<0.05), CD9+水平细菌组与病毒组显著高于对照组(P<0.01); IL-4水平细菌组最高，对照组最低，差异有统计学意义(P<0.05); 3组IFN-水平比较基本无差异(P>0.05); 3组IL-17水平比较无显著差异(P>0.05); NK细胞水平进行比较，病毒组明显低于细菌组(P<0.05)。结论新生儿被不同病原体感染后，其机体T淋巴细胞亚群水平降低,细胞因子水平也出现变化。

关键词:感染性疾病; 新生儿; T淋巴细胞亚群; 细胞因子; 临床观察

新生儿感染性疾病是除新生儿黄疸、新生儿窒息外临床最常见新生儿疾病之一，虽然今年来其发病率有所下降，但仍是引起新生儿死亡的重要原因[1]。胃肠道感染及呼吸道感染是新生儿感染最常见部位，程度较轻时难以观察症状，随着病情加重通常患儿会表现出全身性症状，例如败血症、脓毒血症以及感染性休克等，严重威胁新生儿生命健康，有时还会引起致畸致残等后遗症。细菌性肺炎是新生儿感染性疾病中最常见的一种，其临床症状多样且无典型性，临床多表现为呼吸困难、体温不升、进奶量减少等特点，病情发展较为迅速；轮状病毒感染常会引起新生儿腹泻，且临床症状较为隐匿不易发现[2]。由于新生儿各组织器官尚未发育完全，机体抵抗力与防御机制不成熟，更易受到疾病侵袭，不利于其健康成长，因此做好新生儿疾病防御及治疗工作十分重要[3]。本文观察新生儿感染细菌性肺炎与感染轮状病毒后机体T淋巴细胞亚群以及细胞因子的变化,现报告如下。

1资料与方法

1.1　一般资料

本次75例观察对象全部选自2012年1月—2014年1月本院儿科住院部新生儿，均为足月儿，患儿按照各自情况分成3组。细菌性肺炎患儿25例即为细菌组，其中男16例，女9例，平均出生日龄为(14.7±0.6) d, 平均体质量(3.71±0.32) kg; 轮状病毒感染患儿25例为病毒组，其中男14例，女11例，平均出生日龄为(14.6±0.5) d, 平均体质量(3.67±0.28) kg; 单纯高胆红素血症患儿25例为对照组，其中男15例，女10例，平均出生日龄(14.8±0.7) d, 平均体质量(3.58±0.26) kg。细菌性肺炎诊断标准为：临床具有呼吸道感染表征且胸片结果显示有肺炎影响特征；存在呼吸道感染接触病史；临床表现出鼻塞、呛奶或吸气性三凹征等；通过对本组患儿进行吸痰细菌培养，其结果表明17例为金黄色葡萄球菌感染，3例为肺炎链球菌感染，3例为铜绿假单胞菌感染，2例为大肠杆菌感染。细菌组患儿中不包含具有先天性疾病患儿，除肺炎诊断标准外其他细菌检查结果为阴性。轮状病毒感染诊断标准：采集25例患儿粪便进行胶体金试剂检查结果全部显示为阳性，患儿临床伴有不同程度呕吐及稀水便；病毒组患儿排除细菌性感染腹泻疾病患儿以及由于食物不耐受引起腹泻的患儿。单纯高胆红素血症诊断标准：以间接胆红素水平升高为主，总胆红素值小于300 μmol/L，患儿未出现窒息、感染亦或是肝功能异常情况；父母均为非过敏体质，且无药物过敏史。对照组、细菌组以及病毒组在性别、出生平均日龄、出生体质量等一般资料比较无显著差异(P>0.05)。

1.2　方法

全部患儿入院48 h内采集空腹静脉血2 mL备用，及时(4 h内)对标本进行处理。

1.2.1T淋巴细胞亚群检测:取200 μL溶血素加入1 800 μL无菌注射用水中配置1份标本所需的溶血素(2 000 μL)备用，取1、2两个流式细胞仪专用试管，分别取100 mL全血加入试管，并相应加入1试剂与2试剂，低速混匀并置于室温中避光保存20 min; 向各管中加入1 000 μL所配置的溶血素，同样采用漩涡器进行低速混匀后与室温下避光保存约10 min; 随后进行室温离心，转速为1 500 r/min，时间为5 min，留下层残留液约50 μL，再加入2 mL洗涤液；再次进行离心分离操作，留用50 μL下层液并加入400 μL鞘液，上机检测。

1.2.2特征性细胞因子检测: 取流式细胞仪专用试管依次加入500 μL、RPMI 1640; 5 μL、1 μg/mL PMA; 1 μL、1 μg/mL离子霉素; 1 μL、10 μg/mL BFA; 500 μL外周全血；试剂加入完毕后使用涡旋混匀器混匀后置于37 ℃, 5% CO2培养箱中培养5 h, 中间取出重新混匀1次。对试管进行标记，分别为IFN-/IL-4抗体管与对照管; IL-17抗体管及对照组管，孵育5 h后于4个试管中分别加入200 μL全血、1 mL洗涤液，低速混匀后于4 ℃中避光静置半小时，室温离心5 min, 取底层留取液50 μL; 再次加入1 mL洗涤液室温离心5 min后，取用下层100 mL残留液备用；分别于4试管中加入CD4-APC 5 μL, 并加入相应的10 μL小鼠抗人IFN-/IL-4、单克隆抗体小鼠抗人IL-17A-PE, 低速混匀后于4 ℃中避光静置半小时，再次进行洗涤，离心后取用下层50 μL残留液；加入400 μL PBS混匀后即可上机检测。

1.3　统计学方法

全部数据使用SPSS 16.0软件进行处理，计量资料由均数标准差表示，采用单因素方差分析方法对数据进行处理，其中P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1　3组特征性细胞因子检测结果比较表

IL-4水平比较可以看出，细菌组最高，与对照组及病毒组比较具有显著差异(P<0.05), 其次为病毒组，但其水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05); 3组间IFN-水平比较无差异(P>0.05); 3组间IL-17水平比较相接近，细菌组低于病毒组(P>0.05); NK细胞水平进行比较，病毒组明显低于细菌组(P<0.05), 但2组水平与对照组比较无显著差异(P>0.05)。见表1。

表1　特征性细胞因子检测结果比较

2.2　3组T淋巴细胞亚群比较结果

与对照组相比，细菌组与病毒组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较低(P<0.05); CD9+水平细菌组与病毒组显著高于对照组(P<0.01); 三组新生儿机体CD8+水平相接近，比较无显著差异(P>0.05)。见表2。

表2　T淋巴细胞亚群比较

与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.3　3组NK细胞亚群表达比较

细菌组外周血CD3-CD56negCD16bright亚群百分率比对照组低(P<0.01), 总NK及其亚群比较无显著差异(P>0.05); 病毒组外周血CD3-CD56negCD16bright亚群百分率比对照组低(P<0.01), 总NK及其亚群与细菌组比较差异有统计学意义。见表3。

表3　3组NK细胞亚群表达比较

与对照组比较，*P<0.05; 与细菌组比较，#P<0.05。

3讨论

新生儿各项机能尚处于不断生长过程中，其中枢调节能力较弱，免疫防御机制不成熟，已被细菌、病菌感染引发感染性疾病，其中以肺部感染以及消化系统感染最为常见[4-5]。为保证机体各功能正常运行，必须形成完整的防御系统。机体免疫细胞主要分成两大类，固有免疫细胞以及适应性免疫细胞，固有细胞的免疫功能具有遗传性，是天生固有的；适应性免疫细胞是在此基础上还对某些致病原具有特异针对性[6-8]。机体可以通过T细胞与B细胞间相互作用形成记忆性应答，提供保护防止感染[9]。

3.1　T淋巴细胞亚群的免疫学作用

T淋巴细胞亚群主要包含CD3+、CD4+、CD8+、CD19+等，其在人体免疫调节中具有重要作用[10]。CD3+是外周血成熟T细胞水平代表，其水平与T细胞免疫功能间存在正相关性; CD4+可刺激B细胞产生抗体，其水平与各种淋巴因子的水平具有紧密联系; CD8+具有抑制B细胞产生抗体的作用，其水平减少代表免疫抑制更能降低；T淋巴细胞各亚群之间相互作用，其中CD4+、CD8+起到相互制约相互调节的作用，两者处于动态平衡状态，保证机体免疫功能异常，其实机体免疫系统的核心，其比值与机体免疫功能抑制状态有很强联系，一般比值降低代表免疫功能抑制[11-13]。

3.2　特征性细胞因子免疫作用

CD4+中主要包括Th1、Th2、Th17等细胞亚群，其中Th1为炎症性T细胞，主要分泌IFN-等; Th2主要与机体体液免疫有关，其过度应答会使机体保护性防御机制降低，其分泌的IL-4、IL-6等特定细胞因子与机体免疫状态有关，机体Th1与Th2维持平衡十分重要[14-15]。Th17是最早参与抗感染应答的效应T细胞，IL-17是其特征细胞因子，在机体许多组织中同时存在。IFN-为前炎症因子，由活化T细胞与NK细胞产生，可增强机体抗感染能力，同时还具有重要的免疫调节作用[16]。IL-4是唯一能够诱导B细胞IgE低亲和力受体细胞因子，可活化B细胞介导体液免疫应答，其在Th2分化中具有重要意义，还可以减少IFN-生成。IL-17是促炎因子的一种，对上皮细胞、内皮细胞等进行诱导，促进炎症因子及趋化因子的释放，动物实验研究显示，其在肠道炎症中起到重要作用，可使小鼠肠道炎症明显减轻[17]。

本次观察结果显示，与对照组相比，细菌组与病毒组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较低(P<0.05); CD9+水平细菌组与病毒组显著高于对照组(P<0.01); 3组新生儿机体CD8+水平相接近，比较无显著差异(P>0.05); IL-4水平比较可以看出，细菌组最高，与对照组及病毒组比较具有统计学差异(P<0.05), 其次为病毒组，但其水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05); 3组间IFN-水平比较无显著差异(P>0.05); 3组间IL-17水平比较相接近，细菌组低于病毒组(P>0.05); NK细胞水平进行比较，病毒组明显低于细菌组(P<0.05), 但2组水平与对照组比较无显著差异(P>0.05)，这与国内多位学者研究结果一致。

新生儿被不同病原体感染后，其机体T淋巴细胞亚群以及细胞因子变化不同，机体免疫功能被破坏，出现TH1/TH2失衡情况；机体被感染后显示出T淋巴细胞亚群水平降低，免疫功能受限情况，其与新生儿已遭受感染以及病程较长且病情隐匿有很大联系；对患有感染性疾病的新生儿严密监测其相关细胞因子水平对确定病情以及治疗方案，早日助其恢复健康至关重要。

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Analysis in changes of T lymphocyte subsets and

cytokines in neonates with neonatal bacterial

pneumonia and neonates with rotavirus infection

DONG Yan

(DepartmentofPediatrics,TheThirdPeople′sHospitalAffiliatedtoMedicalCollege

ofShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai, 201999)

ABSTRACT:ObjectiveTo analyze the changes of the T lymphocyte subsets and cytokines in neonates with neonatal bacterial pneumonia and neonates with rotavirus infection. MethodsA total of 25 neonates with neonatal bacterial pneumonia were selected as bacteria group, 25 neonates with neonatal rotavirus infection were selected as infection group and 25 neonates with hyperbilirubinemia were selected as control group. Peripheral blood CD4+ lymphocyte and lymphocyte subpopulations were detected and analyzed. ResultsCompared with the control group, the levels of CD3+, CD4+, CD4+/CD8+ were significantly lower in the bacteria group and the infection group (P<0.05). CD9+ level in the bacteria group and the infection group was significantly higher than that in the control group (P<0.01). The level of IL-4 was the highest in the bacteria group and the lowest in the control group, and there were significant differences among three groups (P<0.05). There was no significant difference of level of IFN-among three groups (P>0.05). There was no significant difference of IL-17 level among three groups (P>0.05). NK levels in cells in the infection group was significantly lower than that in the bacteria group (P<0.05). ConclusionIn the neonates infected by different pathogens, the levels of the T lymphocyte subsets reduce and levels of cytokines change.

KEYWORDS:infectious disease; newborn; T lymphocyte subsets; cytokines; clinical observation

收稿日期:2015-03-11

中图分类号:R 722.13

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)11-074-04

DOI:10.7619/jcmp.201511022