赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白及mTOR信号通路相关基因表达的影响

高海娜，韩荣伟，郑楠，胡菡，，李发弟，王加启，，5

(1.甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃 兰州　730070；2.青岛农业大学食品科学与工程学院，山东 青岛　266109；

3.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，农业部奶产品质量安全风险评估实验室(北京)，北京　100193；

4.农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心(北京)，北京　100193；5.中国农业科学院北京

畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京　100193)

赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白及mTOR信号通路相关基因表达的影响

高海娜1,3,4,5，韩荣伟2，郑楠3，4，胡菡1，3，4，李发弟1，王加启1，3，4，5

(1.甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃 兰州730070；2.青岛农业大学食品科学与工程学院，山东 青岛266109；

3.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，农业部奶产品质量安全风险评估实验室(北京)，北京100193；

4.农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心(北京)，北京100193；5.中国农业科学院北京

畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京100193)

摘要：为了在探究单一添加不同浓度的赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖，以及mTOR信号通路介导的酪蛋白合成相关基因的影响.试验用厄尔平衡溶液(EBSS)代替正常培养基来处理原代奶牛乳腺上皮细胞，在此基础上依次添加不同浓度的赖氨酸，采用MTT法检测细胞12 h和24 h的增殖和利用qRT-PCR技术检测4个编码酪蛋白基因和8个mTOR信号通路中与乳蛋白合成翻译相关基因的相对表达量.结果表明：添加赖氨酸12 h，浓度为0.5～24 mmol/L时，原代奶牛乳腺上皮细胞增殖数量增加(P=0.05)；添加赖氨酸24 h，浓度为0.5～8 mmol/L时，细胞增殖数量增加(P <0.01).当赖氨酸的添加浓度为0.5～16 mmol/L时，CSN1S1、CSN1S2、CSN2 和 CSN3 基因表达均显著上调(P<0.01).当赖氨酸添加量为0.5～16 mmol/L时，mTOR和raptor基因的表达量显著上调(P<0.05).在添加不同浓度的赖氨酸时，下游通路信号因子S6K1、4EBP1和eEF2基因表达均显著上调(P<0.01)；rps6基因表达上调，eIF4E基因表达下调，但差异均不显著.以上结果表明，补充赖氨酸能显著促进乳腺上皮细胞中酪蛋白的合成，这一过程与mTOR信号通路介导蛋白质合成相关.

关键词：赖氨酸；酪蛋白；mTOR；细胞增殖；基因表达

第一作者：高海娜(1987-)，女，硕士，研究方向为动物营养与饲料科学.E-mail:gaohaina103@126.com

Effect of lysine on milk protein synthesis mediated by the

mTOR signaling pathway in the primary

mammary epithelial cell

GAO Hai-na1,3,4,5,HAN Rong-wei2,ZHENG Nan3,4,HU Han1,3,4,LI Fa-di1,WANG Jia-qi1,3,4,5

(1.College of Animal Science and Technology,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2.College of

Food Science and Engineering,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China;3.Ministry of Agriculture-

Milk and Dairy Product Inspection Center,Beijing 100193,China;4.Ministry of Agriculture-Milk Risk

Assessment Laboratory,Institute of Animal Sciences,Chinese Academy of Agricultural Sciences,

Beijing 100193,China;5.State Key Laboratory of Animal Nutrition,Institute of Animal

Sciences,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100193,China)

Abstract：The objective of this study was to use the primary bovine mammary epithelial cells as the model,understanding the regulatory effects of single supplement with different concentrations of lysine on cells proliferation by MTT and milk protein synthesis molecular mechanism by qRT-PCR.Treatment groups based on the Earle's balanced salts were added with lysine of different concentrations.The primary bovine mammary epithelial cell proliferation in 12 h and 24 h and the gene on milk protein synthesis were detected.The results showed that adding 0.5～24 mmol/L lysine for 12 h improved the proliferation of primary bovine mammary epithelial cell (P=0.05);adding 0.5～8 mmol/L lysine for 24 h,the rate of primary bovine mammary epithelial cell proliferation significantly increased (P<0.01).The expression of genes CSN1S1,CSN1S2,CSN2 and CSN3 significantly increased (P<0.01)when the concentration of lysine was 0.5～8 mmol.At the concentration of lysine was 0.5～16 mM,the expression of genes mTOR and raptor related to mTORC1 both increased (P<0.05).The expression of genes S6K1,4EBP1,eEF2 related to mTOR signaling pathway increased (P<0.01),but the increasing of rps6 was not significantly (P>0.05).Expression of gene eIF4E decreased,but not significant (P>0.05).These results demonstrated that lysine supplements could significantly promote the synthesis of casein,which the process might be a potential control point in the regulation of milk protein synthesis in the primary mammary epithelial cell.

Key words：lysine;casein;mTOR;cell proliferation;gene expression

随着人们营养观念的改变，乳品中的高蛋白、低脂肪已经成为衡量乳品质的重要指标[1].乳蛋白是乳中重要的营养组成成分，具有较高的营养价值.已有的研究证明，只有深入了解反刍动物乳腺组织对氨基酸的吸收代谢模式和乳腺组织乳蛋白合成时的可吸收氨基酸比例才能提高乳腺乳蛋白的产量，改善乳品质[2-3].作为奶牛营养物质的氨基酸，它们除了作为蛋白质合成的底物以外，也可以通过刺激哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin ，mTOR)信号通路中mTORC1复合物，进而影响其下游因子的基因表达和蛋白磷酸化级联反应[4-6]，进而调节乳蛋白合成率[5-7].

赖氨酸作为乳蛋白合成的第一限制性必需氨基酸，必然与乳腺的生长发育及泌乳密切相关[8].关于泌乳奶牛乳腺氨基酸代谢，以往的研究主要侧重于赖氨酸对奶牛生产性能的影响[9-11]，试验表明，补充过瘤胃赖氨酸可以促进奶牛尤其是产奶高峰期奶牛的乳蛋白合成[12].乳蛋白的合成是从乳腺上皮细胞中粗面内质网的核糖体上开始的，然后由信号肽引导进入内质网腔，并在内质网和高尔基体内进行磷酸化和糖基化等化学修饰过程，再由分泌泡转送到上皮细胞顶膜，通过胞吐的方式释放到腺泡腔中[13].因此，乳腺上皮细胞的数量和功能很大程度上决定着泌乳奶牛的生产性能(乳产量和乳蛋白的合成量)[14].还有研究表明添加一定量的游离赖氨酸能够提高αs1-酪蛋白(CSN1S1)基因的表达丰度[10-12,15].

本研究以体外培养的原代奶牛乳腺上皮细胞为模型，利用噻唑蓝(MTT)法来探讨添加不同浓度梯度水平的赖氨酸及培养时间对体外培养的原代奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响及其对酪蛋白和mTOR下游信号基因表达的影响.旨在探讨体外培养条件下，通过酪蛋白基因及影响酪蛋白合成的mTOR信号中多个基因的表达，乳蛋白合成时赖氨酸需要的最佳浓度范围，以期为提高乳蛋白合成，改善牛奶质量提供科学依据.

1试验材料

1.1主要仪器

冷冻离心机(德国索福Legend)、恒温CO2培养箱(美国Thermo)、倒置显微镜(日本olympus)、细胞计数仪(Bio-Rad TC10)、RNA浓度测定仪(美国Thermo)、凝胶成像系统(美国Thermo)、IQ5荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad)、酶标仪(美国Thermo)等.

1.2主要试剂

DMEM/F12培养基(Gibco，美国)、厄尔平衡溶液(EBSS，北京雷根生物技术有限公司)、胎牛血清(Gibco，美国)、青链霉素(碧云天生物技术研究所)、胰酶(碧云天生物技术研究所)、L-赖氨酸(Sigma，上海)、RNA 提取试剂盒(TIANGEN)、反转录试剂盒(TaKaRa)、荧光定量试剂盒(TaKaRa)、噻唑蓝(MTT，Sigma，美国)、二甲基亚砜(Sigma，美国)等.

原代奶牛乳腺上皮细胞：来自一头健康的3岁中国荷斯坦奶牛.采取组织块接种法和纯化得到的健康奶牛乳腺上皮细胞.

2试验方法

2.1原代奶牛乳腺上皮细胞培养

实验室前期已建立原代奶牛乳腺上皮细胞体外培养体系[16].将原代奶牛乳腺上皮细胞置于含有10%胎牛血清的 DMEM/F12 生长培养基中，在38 ℃、5% CO2培养箱中培养.当细胞长满培养皿(Corning，430165)的90%时，用胰酶溶液于38 ℃、5% CO2的恒温培养箱中消化，待细胞质回缩，细胞间隙增大缩成圆形时，用培养基终止消化反应；用移液器反复吹打后收集细胞悬液于离心管，900 r/min室温离心5 min；弃上清液，加入新鲜的含有10%胎牛血清的 DMEM/F12 生长培养基，制成细胞悬浮液.

2.2MTT法检测细胞增殖试验

将细胞密度调整到大约1×105个/mL接种到96 孔培养板(Corning，3599)，每孔100 μL，用含有10%胎牛血清的 DMEM/F12生长培养基贴壁处理24 h，用不含胎牛血清的DMEM/F12生长培养基饥饿培养过夜，细胞处理时用厄尔平衡溶液(配方见表1)代替正常培养基.阴性对照组是厄尔平衡溶液，阳性对照组是厄尔平衡溶液+10%胎牛血清，处理组是在阴性对照组的基础上分别补充(Lys：0.5、1、2、4、6、8、16、24、48 mmol/L)9个浓度的赖氨酸，分别培养12 h和24 h后进行MTT检测.每种处理设6个重复，每组试验重复3次.最后用全自动酶标仪检测各孔450 nm波长下的吸光值(D450) 来判定细胞增殖状况.细胞相对增殖率(relative growth rate，RGE)计算公式:

RGR=试验组OD450/对照组OD450

2.3q RT-RCR检测试验

将原代奶牛乳腺上皮细胞接种到含有10%胎牛血清的 DMEM/F12生长培养基的培养皿中(Thermo 172958)中贴壁处理24 h，用不含胎牛血清的 DMEM/F12生长培养基饥饿培养过夜，然后对细胞进行6 h的以下处理：阴性对照组(厄尔平衡溶液)，阳性对照组(厄尔平衡溶液+10%胎牛血清)，处理组分别是在阴性对照组(厄尔平衡溶液)基础上添加(Lys：0.5、2、8、16 mmol/L)赖氨酸.每种处理3个重复，每组试验重复3次.

2.4样品RNA提取

处理结束后提取原代奶牛乳腺上皮细胞总RNA(TIANGEN)，采用NanoDrop1000检测RNA 纯度及OD260nm/OD280nm，样品质量浓度保持在200 ng/μL左右，OD测定值在1.8

2.5反转录

采用500 ng RNA/10 μL体系，参照TaKaRa 的Prime Script RT reagent Kit With gDNA Eraser(货号DRR037A)试剂盒说明书进行反转录操作.取2 μL 5×Prime Script Buffer 2(for Real Time)，0.5 μL Prime Script RT Enzyme Mix Ⅰ，0.5 μL Oligo dT Primer，配制成混合液并混匀后置于冰上，加入2 μg 模板RNA，再加入RNase-free 水补足到10 μL，最后将反应体系置于PCR仪上，37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，4 ℃保存.这样就得到了cDNA第一链，样品长期保存可放-20 ℃.

以cDNA为模板，参照TaKaRa的SYBR Green说明书(货号：DRR820A) 进行q RT-RCR方法检测mRNA 的表达，选用r9基因为内参.试验中所用的13个基因的引物均由上海生工基因有限公司合成(引物见表2)，其定量反应体系为20 μL：10 μL SYBR®Premix ExTaqTMⅡ(2×)，0.8 μL PCR forward primer，0.8 μL PCR forward reverse，2 μL cDNA，6.4 μL 无酶水.反应程序为第1阶段95 ℃ 30 s，1个循环；第2阶段退火延伸95 ℃ 5 s，60 ℃：34 s，40个循环.熔解曲线程序为55 ℃ 30 s，共41个循环.合成的cDNA贮存于-20 ℃冰箱中，备用.利用IQ5实时定量序列检测软件(Bio-Rad versa Doc，USA) 自动读取Ct值.

表2　引物序列

2.7统计分析荧光定量数据

采用2-ΔΔCt法分析奶牛乳腺上皮细胞中目的基因mRNA的相对表达量，所有结果用SAS 9.2软件ANOVA程序进行方差分析，均值多重比较采用邓肯氏法(Duncan法)，结果均以平均值±标准误表示.q RT-RCR数据统计参见Livak等[21]的方法进行.

3结果与分析

3.1赖氨酸对乳腺上皮细胞增殖的影响

检测赖氨酸对体外培养的原代奶牛乳腺上皮细胞增殖作用的吸光度值(OD)列于表3，OD值可间接地反映出细胞的增殖能力，OD值越大表明增殖能力越强.试验结果如表3和图1所示，同一浓度不同培养时间对原代奶牛乳腺细胞的增殖影响差异不显著；而同一时间不同浓度对原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖有不同程度的影响.其中，当在厄尔平衡溶液添加浓度为0.5～24 mmol/L的赖氨酸，培养12 h，对奶牛乳腺上皮细胞增殖有作用，但差异不显著；而随着赖氨酸的浓度增大(48 mmol/L)对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞的增殖有抑制作用.当在厄尔平衡溶液添加浓度为0.5～8 mmol/L的赖氨酸，培养24 h，对原代奶牛乳腺上皮细胞增殖有促进作用(P<0.01)；而随着赖氨酸浓度的增大(16～48 mmol/L)对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞的增殖有抑制作用.培养时间的作用结果如图1所示，在最适浓度范围内12 h的增殖作用最强.

表3　赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞的相对生长率(n=3)

同列数据肩标不同小写字母表示浓度差异显著(P<0.05)、同行数据肩标不同大写字母表示时间差异显著(P<0.05).

图1　赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞相对

3.2赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白相关基因表达的影响

以体外培养的原代奶牛乳腺上皮细胞为模型，研究在厄尔平衡溶液中添加不同浓度的赖氨酸对酪蛋白合成的影响.试验结果如表4和图2所示，在厄尔平衡溶液添加浓度为 0.5～16 mmol/L的赖氨酸，与未添加赖氨酸的阴性对照组相比，αs1-酪蛋白(αs1-casein,CSN1S1)、αs2-酪蛋白(αs2-casein,CSN1S2)、β-酪蛋白(β-casein,CSN2)和 κ-酪蛋白(κ-casein,CSN3)基因表达均显著上调(P<0.01).这说明赖氨酸能促进乳腺上皮细胞CSN1S、CSN1S2、CSN2和CSN3基因的表达.但是不同水平赖氨酸处理对相同酪蛋白的基因促进效果不同，随着赖氨酸浓度的升高则其基因表达量下降；当赖氨酸的添加浓度为0.5 mmol/L时，CSN1S1、CSN1S2和CSN2基因表达量最高.而当赖氨酸的添加浓度为2 mmol/L时，CSN3基因的表达量最高.

实验教学仪器设备的维修是设备管理的重要工作，随着设备的使用，难免会出现设备损坏的情况，这就需要我们对实验设备进行维修和保养，做好仪器设备的维修能够提高设备的使用年限，也能够保证实验教学的顺利开展。实验设备的维修应有维修记录表，每次维修详细记录，方便今后查阅。

3.3赖氨酸对mTOR信号通路相关基因表达的影响

以体外培养的原代奶牛乳腺上皮细胞为模型，研究在厄尔平衡溶液中添加不同浓度的赖氨酸对mTOR信号通路相关的基因的影响.结果由表5和图3可见.与阴性对照组相比，添加赖氨酸使mTOR复合物1中的mTOR、raptor(regulatory-associated protein of mTOR)和mTORC1复合物中的绑定蛋白(Binds to the kinase domain of mTOR,stabilizes protein of raptor ，GβL)基因的表达上调，但是不同水平赖氨酸处理对mTORC1组件中不同基因促进效果不同；当赖氨酸浓度的添加范围为0.5～16mmol/L，mTOR基因的表达显著升高(P<0.01)，而raptor基因是在赖氨酸浓度为0.5～2 mmol/L的范围内显著升高(P<0.01).而GβL基因是在赖氨酸浓度为0.5～8 mmol/L的范围内显著升高(P<0.01).但是随着赖氨酸浓度的增加，这3个基因的相对表达量减少.

表4　赖氨酸对乳蛋白相关基因表达的影响(n=3)

同列数据肩标不同小写字母表示浓度差异显著(P<0.05)；E为The Earle’s balanced salt solution (EBSS)的缩写.

图2　赖氨酸对乳蛋白相关基因表达的影响(n=3)

当添加赖氨酸后，mTOR信号通路下游基因：核糖体S6蛋白激酶(Ribosomal protein S6 kinase，S6K1)、真核翻译起始因子4E 结合蛋白1 ( Eukaryotic translation initiation factor 4 e binding protein 1，4EBP1)、真核细胞翻译延伸因子(eukaryotic elongation factor，eEF2)和核糖体蛋白S6 (Ribosomal protein S6，rps6)也上调，但是不同水平赖氨酸处理对mTOR通路中不同下游基因促进效果不同(如表5/图4、5)；当赖氨酸的添加浓度为0.5～2 mmol/L时， 显著增加S6K1基因的表达.当赖氨酸的添加浓度为0.5～8 mmol/L，显著增加4EBP1基因的表达.当赖氨酸的添加浓度为0.5～16 mmol/L时，均显著增加eEF2基因的表达作用.但是S6K1和4EBP1基因随着赖氨酸添加量的增加，其基因的相对表达量减少.但当在厄尔平衡溶液中添加赖氨酸，会使真核翻译起始因子 4E结合蛋白1(eukaryotic translation initiation factor 4E binding protein 1,EIF4E)基因的表达量下调，但差异不显著.

表5　赖氨酸对mTOR信号通路相关基因表达的影响(n=3)

同列数据肩标不同小写字母表示浓度差异显著(P<0.05)；E： The Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS)的缩写.

图3　赖氨酸对mTOR信号通路相关基因

图4　赖氨酸对mTOR信号通路相关基因

图5　赖氨酸对mTOR信号通路相关基因

4讨论

4.1赖氨酸对乳腺上皮细胞增殖的影响

乳腺组织在动物体内的增殖和分化受许多因素的影响如激素、维生素、氨基酸、生长因子等，这些因素同样也影响体外培养的乳腺上皮细胞的增殖、分化、泌乳等功能[22].

本试验在不含胎牛血清的厄尔平衡溶液中单一添加不同浓度的赖氨酸，体外培养不同时间的原代奶牛乳腺上皮细胞.试验结果表明，在培养原代奶牛乳腺上皮时，单一添加不同浓度的赖氨酸，不同时间点作用的效果趋势相同.这说明赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖具有一定程度的调节作用.当在厄尔平衡溶液添加浓度为0.5～24 mmol/L的赖氨酸，培养12 h，对奶牛乳腺上皮细胞增殖有作用(P=0.05)，但差异不显著；而随着赖氨酸的浓度增大(48 mmol/L)对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞的增殖有抑制作用.当赖氨酸的添加浓度为0.5～8 mmol/L，培养24 h，对原代奶牛乳腺上皮细胞增殖有促进作用；而随着赖氨酸浓度的增大(16～48 mmol/L)对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞的增殖有抑制作用.因此，我们可以得出这样的结论，厄尔平衡溶液中添加外源的赖氨酸能够促进细胞的增殖.这可能是因为，赖氨酸作为其生长的营养素对其生长具有调节的作用，氨基酸过量供应时的利用效率降低有关[25].从培养时间的作用结果如图1所示，在最适浓度范围内12 h处理后的原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖作用最强，这可能的原因是12 h内作为原代奶牛乳腺上皮细胞对外源添加营养素的适应阶段，而随着时间的延长及细胞生长代谢使得培养基的营养素浓度降低，对原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖作用减弱.这与前人报道结果一致.Finil等[23]研究结果表明，赖氨酸作为外源添加的营养素对细胞增殖具有一定的作用.在小鼠骨细胞培养体系中添加赖氨酸0.587 mg/mL，结果表明与对照组(不添加赖氨酸)相比显著增加了I型胶原质、骨钙蛋白的合成.同时Mercier等[24]指出，乳腺上皮细胞的数量很大程度上决定着乳蛋白的合成量.这都为我们进一步研究赖氨酸对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的机制提供了依据，这同时也可以说明赖氨酸能够通过增加奶牛乳腺上皮细胞的数量来对乳蛋白合成及分泌进行调控.

4.2赖氨酸对mTOR信号通路介导酪蛋白合成相关基因表达的影响

Toerien C A通过体内法研究了泌乳奶牛饥饿22 h后静脉内灌注氨基酸通过mTOR路径调控乳蛋白合成，结果表明，乳腺组织中灌注必需氨基酸(EAA)增强了 mTOR靶点S6K的磷酸化，同时也促进了乳蛋白的合成，EAA提高(P<0.05)或趋向于提高(P<0.1)乳腺内 mTOR的活性，这表明mTOR途径能够调控乳蛋白产量[4].杨金勇和来金良[1，26]利用qRT-PCR检测体外培养乳腺组织中CSN1S1表达水平时也发现，当在必需氨基酸的最适浓度范围内培养奶牛乳腺上皮细胞，其赖氨酸的最佳浓度分别为197、57 μg/mL.这与Wu等[27]报道结果相一致.这为我们进一步研究赖氨酸对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的机制提供了依据.

本试验使用q RT-PCR方法分别检测单一添加不同浓度赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白基因表达.结果表明，赖氨酸的浓度为0.5～16 mmol/L时，与未添加赖氨酸的阴性对照组(厄尔平衡溶液)相比，均显著促进乳腺上皮细胞CSN1S1、CSN1S2、CSN2和CSN3基因表达表达(P<0.01).但是不同水平赖氨酸处理对相同酪蛋白的基因促进效果不同，当赖氨酸浓度为0.5 mmol/L时，CSN1S1、CSN1S2和CSN2基因表达量最高；随着赖氨酸浓度的增加则其基因表达量下降.这说明当厄尔平衡溶液中赖氨酸的添加浓度为0.5～2 mmol/L时，酪蛋白基因的表达作用较强.这和其他研究者文章中所述的“适宜浓度的氨基酸能够促进泌乳相关基因的表达”的结果一致.但从结果我们可以看出，无论添加多大浓度的赖氨酸，在影响乳蛋白合成的相关基因或与mTOR信号通路相关基因时，始终是阳性对照(厄尔平衡溶液+10%的胎牛血清)的作用最强.这可能是因为胎牛血清中还有细胞生长过程中所需的较全面的蛋白因子及其他一些生物活性物质和营养物质，这也可以说明氨基酸之间的互作作用或是氨基酸与其他营养素之间的互作作用使与泌乳相关基因的表达强于单个氨基酸的作用.

5结论

当赖氨酸的添加浓度为0.5～2 mmol/L，对原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖效果最佳.但随着浓度的增加，会减少原代奶牛乳腺上皮细胞增殖的数量，达高浓度时甚至会抑制，这说明赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响具有剂量依赖性.不同的作用时间对原代奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响不同，这说明赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响具有时效性，同样赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞乳中酪蛋白的合成具有剂量依赖性，当赖氨酸的添加浓度为0.5～2 mmol/L时，可以显著地上调酪蛋白基因的表达并能调控与乳蛋白翻译相关基因的表达，潜在影响乳蛋白的合成.

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(责任编辑赵晓倩)

收稿日期：2014-07-15；修回日期：2014-10-29

基金项目：公益性行业(农业)科研专项项目“生鲜乳质量安全评价技术与生产规程”(201403071)；国家重点基础研究发展计划(2011CB100805)；现代农业产业技术体系专项资金(nycytx-04-01)；中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS12).

通信作者：王加启，男，博士，研究员，博士生导师，主要从事反刍动物营养与牛奶质量安全的研究.E-mail:wangjiaqinmqc@126.com

中图分类号：S 823.9+1

文献标志码：A

文章编号：1003-4315(2015)03-0007-09