CD133在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义＊

陕西省第二人民医院胸外科 （西安710005） 王勇文 张 晋 冯 钢

近年来肿瘤干细胞理论的提出，为肿瘤的研究提供了一个全新的方向。这类细胞具有自我更新及多向分化的潜能和特性，影响和促进了肿瘤的侵袭转移，而其数量可能与肿瘤的分化程度及疾病预后具有一定的相关性。CD133作为肿瘤干细胞的标志物，已在多种恶性肿瘤组织中得到证实，但其与食管癌的侵袭、转移及预后的关系国内外却少有报道。本研究通过免疫组化方法，检测CD133在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况，比较分析其与临床病理参数之间的关系，探讨CD133在食管鳞状细胞癌中的临床意义。

材料和方法

1 材料选择 选择食管鳞状细胞癌石蜡切片40例（均来自西安交大医学院第二医院），患者术前未接受放化疗治疗，术后病理检查为鳞状细胞癌，男26例，女14例，年龄35～71岁，术后随访满3年。患者均知情同意。兔抗人CD133多克隆抗体（产品编号bs-0395R）购于北京博奥森生物技术有限公司、兔抗人Ki67单克隆抗体购于丹麦Dako公司，生物素标记羊抗兔二抗、DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术公司。

2 实验方法

2．1 HE染色：石蜡切片常规HE染色。

2．2 石蜡切片的CD133、Ki67免疫组化染色：石蜡切片常规脱蜡水化，置于0．01mol／L柠檬酸盐缓冲液中，微波修复抗原20min，3%H2O2阻断内源性过氧化酶，山羊血清封闭后滴加抗CD133、Ki67抗体（1∶100）4℃过夜，第2天取出，滴加生物素标记的二抗，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。

2．3 结果判断：DAB阳性染色为棕黄色，计数4个高倍视野下200个癌细胞中阳性细胞数量。由两位病理医生独立观察判断。

3 统计学方法 使用SPSS 10．0统计学软件进行两两比较的χ2检验，P＜0．05为有统计学差异。

结 果

1 CD133蛋白与食管鳞状细胞癌、癌旁组织的关系 CD133阳性颗粒主要定位在细胞膜，呈散在簇状分布；Ki67阳性颗粒定位于细胞核，40例食管鳞状细胞癌组织中，CD133、Ki67阳性例数，见表1。

表1 CD133在食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织中的表达阳性例数（n）

2 CD133和临床病理参数 结果显示，不同年龄、性别患者间CD133阳性细胞表达比较有显著性差异（P＜0．05）；不同肿瘤组织浸润深度、淋巴结转移、细胞分化程度患者间CD133阳性细胞表达率比较有显著性差异（P＜0．05）。提示低分化食管鳞状细胞癌中CD133的阳性表达高于高分化食管鳞状细胞癌组织；肿瘤侵润越深，CD133的表达也随之升高；淋巴结有转移的肿瘤病例其CD133的表达高于无淋巴结转移的病例，见表2。

3 CD133阳性表达与Ki67表达比率的关系可见，食管癌肿瘤细胞中CD133阳性表达与Ki67阳性表达无统计学差异，见表3。

表2 CD133与临床病理参数的关系

表3 CD133与ki67表达的相关性

4 CD133阳性的患者生存曲线 见图7。

图7 CD133阳性患者生存曲线

讨 论

肿瘤干细胞（Cancer stem cells，CSC）是恶性肿瘤组织中能够自我更新并产生异质性的细胞，其具有的干细胞特性是肿瘤生长、转移的根源。人类急性粒细胞白血病、肺癌［1］、结肠癌［2］等多种肿瘤组织中也相继发现存在有CSC，其具有的自我更新、分化的潜能，在肿瘤的复发和转移中起着重要作用。研究证明，肿瘤干细胞对放化疗不敏感，若能建立针对肿瘤干细胞的治疗手段，可能提高恶性肿瘤的远期治疗效果。

CD133是在血液系统干细胞、前体细胞中发现的穿膜糖蛋白，后被认为也是肿瘤组织的干细胞标志物［3］。随着对CD133的研究深入，已在多种恶性肿瘤组织中发现CD133分子的存在。Singh等［4］在脑肿瘤组织进行研究时，将100个CD133阳性细胞接种NOD／SCID小鼠即可形成肿瘤，且肿瘤表型与原发肿瘤相同，证明CD133＋细胞具有显著增殖能力。在肝癌［5］、黑色素瘤［6］、及胰腺癌［7］的研究中发现 CD133阳性细胞的存在与肿瘤的转移、复发相关；同时COX多因素分析提示，CD133的蛋白表达水平为影响患者生存率的独立因素［9］。Ki67是近年来研究较多的一种与增殖细胞相关的核抗原，其与肿瘤的侵袭、浸润、复发转移倾向及预后均有密切的相关性。

本研究采用免疫组化法对食管癌及癌旁组织中CD133及Ki67的表达进行检测发现，肿瘤组织中CD133的阳性表达例数（26例）明显多于癌旁组织（2例），具有统计学意义（P＜0．01）；Ki67在肿瘤组织中的表达也明显高于癌旁组织（P＜0．05），并且二者在食管鳞状细胞癌组织中的的表达情况不具有明显差异（P＞0．05）。对不同分化程度的食管鳞状细胞癌组织中CD133的表达进行检测，结果显示低分化食管鳞状细胞癌组织中CD133阳性表达率高于高分化组织（P＜0．05），而肿瘤侵润程度及样本淋巴结转移情况也与CD133的表达呈正相关（P＝0．03，P＝0．025）。同时，生存曲线的结果也提示，CD133表达阳性的患者较阴性患者术后生存期短。

食管癌鳞状细胞癌患者的长期生存率至今未得到明显提高，肿瘤的侵袭和转移是影响患者预后的不良因素。目前国内外有关CD133与食管癌临床病理特征及预后关系的报道较少。本次研究结果提示，CD133阳性表达水平越高的食管癌组织，含有的肿瘤干细胞样细胞越多，这种细胞通过自我更新及分化，可能使肿瘤细胞更易出现复发和转移。因此，CD133可作为评价食管癌鳞状细胞癌肿瘤生物学特性及判断预后的一个指标，CD133阳性细胞可作为提高患者生存率的治疗靶点。

［1］ Eramo A，Lotti F，Sette G，etal．Identification and expansion of the tumorigenic lung cancer stem cell population［J］．Cell Death Differ，2008，15：504–514．

［2］ O’Brien CA，Pollett A，Gallinger S，etal．A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficient mice［J］．Nature，2007，445：106–110．

［3］ Mizrak D，Brittan M，Alison MR．CD133：molecule of the moment［J］．J Pathol，2008，214：3–9．

［4］ Singh SK，Clarke ID，Terasaki M，etal．Identification of a cancer stem cell in human brain tumors［J］．Cancer Res，2003，63：5821–5828．

［5］ Yin S，Li J，Hu C，etal．CD133positive hepatocellular carcinoma cells possess highcapacity for tumorigenicity［J］．Int J Cancer，2007，120：1444–1450．

［6］ Monzani E，Facchetti F，Galmozzi E，etal．Melanoma contains CD133 and ABCG2positive cells with enhanced tumourigenic potential［J］．Eur J Cancer，2007，43：935–946．

［7］ Maeda S，Shinchi H，Kurahara H，etal．CD133 expression is correlated with lymph node metastasis and vascular endothelial growth factor-C expression in pancreatic cancer［J］．Br J Cancer，2008，98：1389–1397．

［8］ Horst D，Kriegl L．CD133 expression is an independent prognostic marker for low survival in colorectal cancer［J］．Br J Cancer，2008，99：1285–1289．