血府逐瘀汤颗粒质量标准研究

狄永良，徐海波

(1．江苏省溧阳市中医院，江苏 常州 213300;2．江阴天江药业有限公司，江苏 无锡 214434)

血府逐瘀汤颗粒由桃仁、红花、当归、生地、川芎等12味药组方，具有活血祛瘀、行气止痛的功效。为保证制剂质量，本研究中采用薄层色谱(TLC)法对方中赤芍进行了定性鉴别，采用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中桃仁的主要活性成分苦杏仁苷进行了含量测定。试验结果表明，方法专属性强，重现性好，可作为本制剂的质量控制方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200 series型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);超声清洗机(无锡超声电子设备厂);电子天平(瑞士Mettler公司);KQ－250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器公司)。血府逐瘀汤颗粒(江阴天江药业有限公司，批号为 200902，200903，201001);按处方，根据鉴别的药味，去除该药味，按制备工艺提取，制得阴性对照品;芍药苷(批号为111700－200501)、苦杏仁苷(批号为 110820－200403)、赤芍(批号为 110713－200609)对照品，均由中国药品生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 赤芍鉴别

取本品粉末2 g，加乙醇10 mL，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取赤药对照药材及芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，即为对照药材和对照品溶液。再取不含赤芍的阴性对照提取物1 g，照供试品溶液制备方法制备，制得阴性对照品溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述4种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(40 ∶5 ∶10 ∶0．2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液则无此斑点，本鉴别方法具有专属性，见图1。

图1 薄层色谱图

2．2 苦杏仁苷含量测定[1－4]

2．2．1 色谱条件

色谱柱:Lichrospher C18柱(200 mm × 4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇－0．1%磷酸溶液(20∶80);检测波长:283 nm;柱温:35℃;流速:1．0 mL/min;理论板数:2 253;进样量:10 μL。

2．2．2 溶液制备

精密称取苦杏仁苷对照品1．95 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0．195 g/L的对照品溶液。取血府逐瘀汤颗粒(批号为200902)约0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声提取30 min，放冷，精密称定质量，加甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，过微孔滤膜，即得供试品溶液。另按处方去除桃仁，制得不含桃仁的阴性对照品，同法制得不含桃仁的阴性对照品溶液。

2．2．3 方法学考察

阴性干扰试验:分别精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液和供试品溶液各10 μL，按拟订色谱条件测定，记录色谱图和峰面积，见图2。可见，在供试品溶液色谱中，与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照品溶液无此色谱峰，表明在此试验条件下，其他成分对测定无干扰，方法具有专属性。

线性关系考察:分别精密吸取苦杏仁苷对照品溶液(质量浓度为 0．195 g/L)2，4，6，8 mL，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成质量浓度分别为 0．039，0．078，0．117，0．156 g/L的系列对照品溶液，分别精密吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值(Y)为纵坐标、苦杏仁苷质量浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=9 137．85 X+4．23，r=0．999 89。结果表明，苦杏仁苷进样量在0．39～1．95 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取 2．2．2项下对照品溶液 10 μL，连续进样6次，依法测定。结果的 RSD为0．13%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取供试品溶液10 μL，按拟订色谱条件测定，分别于 0，1，2，4，8 h时进样，测定苦杏仁苷峰面积积分值。结果的 RSD为0．49%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

图2 高效液相色谱图

重复性试验:取血府逐瘀汤颗粒约0．5 g，精密称定，平行6份，依法制备供试品溶液，分别进样10 μL，测定峰面积积分值并计算含量。结果含量为(10．21 ±0．05)mg/g，RSD 为 0．46%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品0．25 g，精密称定，分别加入苦杏仁苷对照品适量，依法制备供试品溶液，分别进样10 μL，测定。结果见表1。

表1 苦杏仁苷加样回收试验结果(n=6)

2．2．4 样品含量测定

取样品约0．5 g，精密称定，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定。结果批号为200902，200903，201001的3批血府逐瘀汤颗粒中苦杏仁苷的平均含量分别为 10．16，10．48，10．31 mg/g。考虑到不同批次含量的差异，在最低含量的基础上下浮20%，暂订本品每1 g含桃仁以苦杏仁苷(C20H27O11)计，不得少于8．0 mg。

3 讨论

超声提取时间考察:超声提取 10，20，30，40 min，苦杏仁苷的含量分别为 9．99，10．18，10．18，10．17 mg/g。结果表明，处理20 min，苦杏仁苷含量基本不再增加，为保证提取完全，故确定超声处理时间为30 min。

流动相选择:通过查阅文献和现行药典标准，选择了3种流动相系统进行了预试验，分别为1号[乙腈－冰醋酸－水(16∶1∶84)]、2 号[甲醇 －0．1%磷酸溶液(20 ∶80)]、3 号[甲醇 － 水(20 ∶80)]。经试验发现，2号流动相出峰较快且峰型好，适合本试验要求，故选择2号流动相。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:附录34－35．

[2]钱 平，刘志辉，钱 芳，等．桃仁定性鉴别与含量测定研究[J]．中国药事，2008，24(4):351．

[3]颜永刚．桃仁质量研究[D]．成都:成都中医药大学，2008．

[4]颜永刚，裴 瑾，万德光．HPLC法测定不同产地和品种桃仁中苦杏仁苷[J]．中草药，2008，39(9):1 415．