百瑞口服液对阿霉素肾病大鼠综合征的治疗作用＊

宣伟东，唐大海，范正平

(中国人民解放军第四一一医院药学科，上海 200081)

百瑞口服液为以中药百蕊草 Thesium chinense Turcz为有效药物的单方制剂。百蕊草为檀香科百蕊草属植物，具有清热解毒、补肾涩精之功效[1]，多用于治疗急性乳腺炎、上呼吸道感染、淋巴结结核等疾病。近年来，江浙民间常用百蕊草治疗慢性肾炎，效果良好[2]。初步药理试验发现，百蕊草的水提取物具有利尿、消肿，降低尿蛋白、调血脂、提高血清蛋白水平等作用，对肾病综合征大鼠有良好治疗效果[3]。本研究在药理试验基础上，采用阿霉素(通用名注射用盐酸多柔比星，ADR)肾病模型[4]，考察经水提、醇沉等工艺步骤制成的成型制剂对阿霉素肾病综合征大鼠的治疗作用，为该制剂的临床应用提供依据。

1 材料与方法

1．1 动物与药物

SD大鼠，CL级，雄性，体重(180±10)g，由海军医学研究所动物房提供，实验动物合格证号为SCXK(沪)2011－0005。分笼饲养，室温为15～20℃，自由摄食、饮水。

百瑞口服液(中国人民解放军第四一一医院制剂室，批号为20110203，规格为每支10 mL，每支含5．0 g生药)，为棕红色澄清液体，气微，味苦、微涩，依照该制剂的申报质量标准检验，该批制剂各项指标均合格;阿霉素(深圳万乐药业有限公司，批号为1011E1，规格为每支10 mg)，临用前用生理盐水配制;醋酸泼尼松片(上海信谊制药集团，批号为100702，规格为每片5 mg)，临用前用生理盐水配制成混悬液。

1．2 方法

百瑞口服液制备:取中药百蕊草500 g，切成2～3 cm长的小段，洗净，加纯化水煎煮3次，第1次2 h，第2次1．5 h，第3次1 h。合并煎液，滤过，浓缩至约400 mL，冷却，加适量乙醇，搅匀，静置24 h，过滤，滤液减压回收乙醇，加纯化水稀释至900 mL，冷藏24 h，滤过，加纯化水至1 000 mL，搅匀，分装，100℃灭菌30 min，即得百瑞口服液。

阿霉素肾病模型建立与动物分组:健康雄性SD大鼠60只，饲养7 d后，随机抽取10只作为空白对照组(A组)，余下50只大鼠于试验开始当天在非麻醉条件下一次性尾静脉注射阿霉素6．0 mg/kg，并按体重随机平均分为模型对照组(B组)，阳性对照组(C 组)，百瑞口服液低剂量组[D1组，0．5 mL/(kg·d)，相当于0．25 g 生药 /(kg·d)]、中剂量组[D2组，2 mL/(kg·d)，相当于1．0 g 生药 /(kg·d)]、高剂量组[D3组，10 mL/(kg·d)，相当于5．0 g生药/(kg·d)]。各组于造模次日起，每日灌胃，A组和B组给予生理盐水，C组给予醋酸泼尼松混悬液(5．0 mg/kg)，百瑞口服液各剂量组给予相当剂量的百瑞口服液，连续6周。

观察指标及检测方法:各组每周称重1次，记录四肢、阴囊的浮肿情况及腹腔积液状况，同时观察毛色、浮肿与精神状态。各组每周置代谢笼1次，收集24 h尿液，记录尿量，采用考马斯亮蓝法测定尿蛋白浓度，计算24 h尿蛋白。试验结束时，腹主动脉取血，用全自动生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、总胆固醇(TCH)、三酰甘油(TG)等血液生化指标。另摘取肾脏，用10%福尔马林液固定，石蜡包埋切片，苏木素－伊红(HE)染色，进行病理组织学检查。本试验血液生化指标由我院检验科测定，病理切片由我院病理科完成。

1．3 统计学处理

2 结果

2．1 一般状态

在整个试验过程中，A组大鼠毛色有光泽，饮食活动、精神状态良好。模型组大鼠则精神萎靡，怠倦少动，消瘦，毛发无光泽，并有掉毛竖毛现象。大鼠在造模2周后，造模大鼠均出现饮水减少，四肢浮肿明显及烂尾现象。与B组相比，给药各组上述表现有所改善，在药物干预4周后，C组、D2组、D3组大鼠的浮肿症状明显轻于模型组，烂尾症状均痊愈。在试验过程中，B组有1只大鼠死亡。

2．2 检测指标

结果见表1及表2。可见，造模大鼠体内出现蛋白流失，脂质代谢紊乱。百瑞口服液有助于阿霉素肾病综合征大鼠各项生理指标的恢复，中剂量给药可提高阿霉素肾病综合征大鼠血液蛋白浓度，而高剂量给药可降低血脂水平。

表1 百瑞口服液对ADR大鼠24 h尿量的影响(，n=10)

表1 百瑞口服液对ADR大鼠24 h尿量的影响(，n=10)

注:与 A 组比较，△P＜0．05，▲P＜0．01;与 B组比较，□P＜0．05，■P＜0．01。下表同。

组别 24 h尿量(mL)24 h尿蛋白量(mg/kg)A组B组C组D1组D2组D3组造模前28．8 ±8．9 31．8 ±9．1 34．1 ±1．0 44．8 ±11．1 32．2 ±15．2 29．2 ±13．8造模第1周32．2 ±1．2 21．3 ±6．3▲29．6 ±11．1 22．1 ±6．8 23．2 ±7．7 27．6 ±11．9造模第2周34．7 ±6．6 19．6 ±9．6▲23．3 ±8．2 25．2 ±3．9 25．2 ±3．1 30．0 ±11．1造模第3周36．5 ±7．6 18．2 ±3．8▲28．1 ±6．7□26．8 ±10．9 25．8 ±6．2 28．1 ±3．8造模第4周37．5 ±5．4 20．4 ±4．1▲25．1 ±6．7□25．8 ±12．9□28．6 ±3．2□28．6 ±9．2＊造模第5周43．7 ±5．2 20．9 ±2．9▲25．2 ±7．9□28．0 ±8．9□31．1 ±4．9■33．7 ±3．9■造模第6周42．2 ± 12．2 20．8 ± 5．1▲24．8 ± 4．5□27．7 ± 6．6□35．7 ± 3．3■34．5 ± 7．2■造模前4．2 ±1．1 4．6 ±1．3 4．1 ±1．0 4．3 ±0．7 3．8 ±0．8 3．9 ±0．6造模第1周4．5 ±0．3 27．4 ±10．7▲29．6 ±11．1 28．5 ±7．9 30．4 ±13．8 29．8 ±12．0造模第2周2．8 ±0．7 31．7 ±7．5▲43．3 ±8．8□44．4 ±6．6□42．5 ±7．9□43．3 ±8．8■造模第3周2．5 ±0．6 36．2 ±10．3△38．1 ±6．7 45．2 ±13．2 41．5 ±7．8 36．0 ±9．3造模第4周3．0 ± 0．2 55．3 ± 4．8▲45．1 ± 6．7□52．4 ± 27．2 47．4 ± 5．1□53．9 ± 12．8造模第5周4．2 ±1．2 58．4 ±12．4▲45．2 ±5．9■58．1 ±20．1 46．2 ±5．7■48．8 ±5．2□造模第6周3．2 ±1．2 43．6 ±9．4▲24．8 ±4．5■44．1 ±9．4 27．9 ±7．1■39．2 ±8．7□

表2 百瑞口服液对阿霉素肾病综合征大鼠血液生化指标的影响(，n=10)

表2 百瑞口服液对阿霉素肾病综合征大鼠血液生化指标的影响(，n=10)

TG(mmol/L)2．35 ± 0．94 3．06 ± 0．12△2．72 ± 1．52□3．25 ± 1．27 2．85 ± 0．13 2．64 ± 0．72□组别A组B组C组D1组D2组D3组TP(g/L)66．22 ± 4．18 45．86 ± 3．54▲48．14 ± 6．13 40．02 ± 3．71 52．77 ± 4．2□49．58 ± 3．37 ALB(g/L)37．28 ± 3．11 23．45 ± 4．16▲28．33 ± 2．58□26．95 ± 4．26 28．09 ± 5．82□22．95 ± 4．66 TCH(mmol/L)3．21 ± 0．48 4．74 ± 1．15△3．85 ± 1．25□3．56 ± 0．84□4．16 ± 2．88 3．61 ± 0．75□

2．3 肾脏病理组织学

A组大鼠肾小球及肾小管形态与结构无明显病理变化，见图1 A。B组大鼠可见肾小管扩张、炎细胞浸润及间质纤维化，肾小球内皮细胞减少、球囊腔显著扩张、囊壁增厚，有的可见肾小球萎缩，肾小管管型，见图1 B。D3组大鼠可见肾小球囊腔不同程度扩张，肾小管上皮细胞有轻度变性，管腔略有变窄，个别有管型生成，见图1 C。D2组大鼠肾小球囊腔扩张，肾小管上皮细胞变性，管腔变窄，有管型，见图1 D。D1组大鼠肾小球囊腔扩张，肾小管上皮变性，管腔扩张，周围间质细胞增生，见图1 E。C组大鼠肾小球囊腔轻度扩张，肾小管上皮肿胀、管腔轻度狭窄，见图1 F。病理学检查结果提示，百瑞口服液及阳性药对阿霉素肾病综合征的发生与发展均有一定减轻作用，主要表现在各药物组肾小球及肾小管上皮的病变程度较模型对照组轻。其中，高剂量百瑞口服液有与阳性药有相似的作用效果，中、低剂量百瑞口服液作用相似。

3 讨论

阿霉素肾病综合征属中医“水肿”病范畴，其发生与水液代谢及肺、脾、肾三脏器功能失调有关，临床以大量蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症及不同程度水肿为特征。阿霉素诱导的大鼠肾病综合征模型，基本类似人类微小病变型肾病，已被广泛应用于中药及中草药成分对肾脏保护作用的药物筛选与药效学评价[5]。本试验中对大鼠1次尾静脉注射阿霉素6．0 mg/kg，大鼠均出现不同程度的浮肿症状，24 h尿量显著减少，尿蛋白显著增加，血液中TP与ALB水平显著下降，TCH与TG水平升高。结果表明，本次试验成功地建立了阿霉素大鼠肾病模型。

百蕊草作为一种广谱抗菌中草药，有良好的消炎镇痛、镇咳及抗肿瘤作用。本试验结果显示，治疗组大鼠的一般状态均好于模型对照组，表明百蕊草可有效防治阿霉素肾病综合征大鼠的感染，改善其生存状态。本试验依据百蕊草提取物在1．0 g/(kg·d)剂量下，可对肾病综合征大鼠产生较好的治疗作用[3]，将受试药物的给药剂量设置为低剂量[0．25 g/(kg·d)生药]、中剂量[1．0 g/(kg·d)生药]、高剂量[5．0 g/(kg·d)生药]3 组。试验结果显示，百瑞口服液治疗4周以上，中、高剂量组阿霉素肾病综合征大鼠24 h尿量显著增加，水肿症状消除，24 h尿蛋白降低，血液中总蛋白、血清蛋白含量水平提升，血脂代谢紊乱改善，病理组织分析也证实百瑞口服液对阿霉素肾病综合征大鼠的肾脏具有明显的保护作用。由此表明，百蕊草经过加工制成成品制剂，仍保持了其对肾病综合征大鼠良好的治疗效果，并在剂量为1．0 g/(kg·d)生药时，即显示出较好的疗效。该剂量与民间治疗慢性肾病的常用剂量相似(每日20 g)。

图1 各组大鼠肾脏组织HE染色病理切片图(×400)

本研究结果可为该制剂在慢性肾病临床治疗提供一定的药效学依据和剂量参考。基于慢性肾炎临床治疗的复杂性，该制剂对慢性肾病的适应证、作用机制及肾毒性等还有待进一步研究。

[1]国家中医药管理局，中华本草编委会．中华本草[M]．上海:上海科技出版社，1999:595．

[2]王 峥，刘近明，李绍顺．百蕊草的研究进展[J]．中国药师，2006，9(11):1 059．

[3]宣伟东，唐大海，卞 俊，等．百蕊草对阿霉素肾病大鼠治疗作用的实验研究[J]．药学实践杂志，2012，30(6):443．

[4]李保春，崔若兰，张晓英．大鼠阿霉素肾病模型的建立[J]．第二军医大学学报，1992，13(5):485．

[5]Bertani T，Poggi A，Pozzoni R，et al．Adriamycin －induced nephritic syndrome in rats[J]．Lab Invest，1982，46(1):16．