瑶药天钻的水分及马兜铃酸A含量测定＊

张亚洲 ，唐 其，陈 兵，唐春风，覃山丁 ，樊兰兰

(1．广西壮族自治区药用植物园天然药物化学中心，广西 南宁 530023;2．广西中医药大学，广西 南宁 530001)

瑶药天钻是中国特有植物马兜铃科马兜铃属植物广西马兜铃 Aristolochia kwangsiensis Chun et How ex C．F．Liang 的块根[1]。现已从天钻中分离得到了尿囊素、马兜铃酸、β－谷甾醇、6－甲氧基去硝基马兜铃酸甲酯、6－甲氧基马兜铃酸A甲酯及木兰花碱[2－3]。药理研究发现，天钻总生物碱具有解痉、镇痛作用[4－5];马兜铃酸主要有抗肿瘤、致突变、肾脏毒性作用[3－6];天钻提取物对临床各种疾患所致平滑肌痉挛性腹痛的止痛效果较好[7－10]。天钻在民间现仍作为抗肿瘤、止痛药物使用，而其有效成分至今尚未明确。马兜铃酸A是否在天钻药材中普遍存在，其含量如何，值得探讨。为此，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定了天钻药材中马兜铃酸A的含量，旨在为药材的安全使用提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪;DAD检测器;色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱(250 mm ×4．60 mm，5 μm)。乙腈、甲醇(色谱纯，成都科龙试剂有限公司);水为自制纯净水;马兜铃酸A对照品(自制，含量98．327%);天钻药材采集情况见表1。

2 方法与结果

2．1 药材水分测定

参照2010年版《中国药典(一部)》附录ⅨG干燥失重测定法，对11批药材样品的水分进行测定。结果见表2。

2．2 马兜铃酸A含量测定(HPLC法)[11－13]

2．2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:Phenomenex Gemini C18柱(250 mm ×4．60 mm，5 μm);流动相:乙腈－含0．34%三乙胺和0．94%乙酸的水溶液，梯度洗脱(见表 3);流速:0．8 mL/min;检测波长:260 nm;进样量:20 μL。在此条件下，色谱分离良好，色谱图见图1。

表1 药材样品采集情况表

表2 天钻药材水分测定结果(%)

表3 流动相梯度洗脱表

图1 马兜铃酸A高效液相色谱图

2．2．2 样品超声提取方法选择

马兜铃酸A溶于甲醇，故样品超声提取所用溶剂选用甲醇。称取药材样品4份，分别加入甲醇，超声15，30，45，60 min后，再用甲醇稀释到刻度，摇匀后用微孔滤膜过滤，进样20 μL。结果甲醇超声提取15，30，45，60 min时，马兜铃酸 A提取率分别为95.03%，98.66%，98.92%，100．00%。可见，超声提取30 min时已提取较完全，从节约时间方面考虑，样品用超声提取30 min效果较理想。

2．2．3 方法学考察

线性关系考察:称取马兜铃酸A对照品21．8 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，用甲醇超声溶解后，放至室温，用甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液。取贮备液5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液A。再取贮备液25 mL，置100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液B。再取溶液B 5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液C。再取溶液C 5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液D。再取溶液D 5 mL，置10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液E。再取溶液E 5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得溶液F。取贮备液及溶液A－F，各进样20 μL，记录色谱图。以进样质量浓度(X)对峰面积(A)进行线性回归，得回归方程 X=0．009 8 A+0．050 7，r=0．999 99(n=7)。结果表明，马兜铃酸A质量浓度在1．703～109 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，符合检测要求。

精密度试验:取同一对照品溶液，摇匀后进样20 μL，连续进样 6 次。结果平均峰面积值为 118．42，RSD=0．71%(n=6)，表明仪器精密度较好。

稳定性试验:精密称取药材样品(编号8)0．503 3 g，用甲醇超声30 min，放冷后用甲醇稀释至刻度，摇匀后，用微孔滤膜过滤，分别于 0，2，4，6，8，12 h 时进样测定。结果的 RSD 为 0．26%(n=6)，表明样品溶液在12 h内测定较稳定。

重复性试验:精密称取同一药材样品(编号8)6份，依法制备样品溶液并测定含量。结果的 RSD=0．55%(n=6)，表明方法重复性较好。

加样回收试验:精密称取已知含量的药材样品(编号6)0．23 g，平行9份，分别加入已知样品中马兜铃酸A含量的125%，100%，75%的对照品，按样品溶液制备方法处理，依法进样测定含量，计算回收率。结果见表4。

表4 马兜铃酸A加样回收试验结果(n=9)

2．3 样品水分及含量测定

按照2．1及2．2项下方法，依法测定11批药材样品水分及马兜铃酸A含量，结果见表5。

表5 药材样品中水分及马兜铃酸A含量测定结果

3 讨论

天钻药材在民间常用于抗肿瘤、镇痛，其活性成分尚不明确，是否有潜在的肾毒性危害，也还未引起足够重视。因此，对天钻药材中含有的马兜铃酸A进行测定非常必要。

本研究结果显示，11批样品中马兜铃酸A含量为0．0174% ～0．206 4%，含量差异较大，最高者是最低者的12倍。另外，自购药材中马兜铃酸A含量均较低，可能与采集后放置时间较长有关，值得进一步探讨。

天钻为少数民族用药，含有马兜铃酸A，但含量为多少，使用中是否会造成危害，一直尚未明确。马兜铃酸A具有肾毒性已较为明确，天钻药材中均含马兜铃酸A，使用过程中是否会产生毒性作用，值得重视。无论如何，应避免大量、超量使用，或是不用。

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