高效液相色谱法测定扶正合剂中补骨脂素和异补骨脂素含量

李 昂

(湖南省湘潭市药品检验所，湖南 湘潭 411100)

扶正合剂是湘潭红十字建春医院的中药复方制剂，根据中医验方研制而成，由补骨脂、黄芪、女贞子、鸡血藤等药材组方，具有扶正固本、提高人体免疫力的作用，用于久病阴虚，配合化学治疗、可促进疾病康复。为了有效地控制药品质量，本试验中采用高效液相色谱法对补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量进行测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪;AUW-20型岛津电子天平;UV2501型紫外可见分光光度计(日本岛津)。补骨脂素对照品(批号为110739-200814)、异补骨脂素对照品(批号为110738-201012)，均购自中国药品生物制品检定所;扶正合剂(医院自制，批号为110510，111226，120603);甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(35∶65);流速:1．0 mL/min;检测波长:246 nm。柱温:35℃;进样量:10 μL。理论板数按补骨脂素峰计算不低于3 000，色谱峰分离度大于1．5。

2．2 溶液制备

分别精密称取补骨脂素对照品14．78 mg和异补骨脂素对照品14．35 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用，作为贮备液。分别精密量取贮备液2 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(补骨脂素0．011 82 g/L，异补骨脂素 0．011 48 g/L)。精密量取 20 mL 样品，用醋酸乙酯提取4次，每次20 mL，合并提取液，置水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，并转移到25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验:按样品工艺配比制备缺补骨脂的阴性样品，照供试品溶液制备方法，制备阴性样品溶液，进样10 μL，测定。结果阴性样品对测定无干扰见图1。

线性关系考察:分精密量取对照品溶液 2，4，6，8，10 μL，注入高效液相色谱仪进行分析，测定峰面积。以对照品进样量(X，μg)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，补骨脂素回归方程为 Y=7．839 5 X+6．110 0(r=0．999 9);异补骨脂素为 Y=7．365 9+3．685 4 X(r=0．999 8)。结果表明，补骨脂素进样量在23．65 ～118．24 ng范围内，异补骨脂素进样量在 22．96～114．80 ng范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密量取同一对照品溶液(质量浓度为32．6 μg/mL)20 μL，连续进样 6 次。记录峰面积，结果的 RSD 为0．7%，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批(批号为111226)样品，依法制备6份供试品溶液并测定含量。结果补骨脂素的平均含量为0．031 g/L(RSD=1．3%)，异补骨脂素的平均含量为 0．045 g/L(RSD=0．9%)，表明方法重复性好。

稳定性试验:取同一供试品溶液10 μL，分别于溶液配制后0，2，4，6，8，10，12，14，16 h 时进样测定。结果补骨脂素和异补骨脂素峰面积的 RSD分别为1．2%和0．8%(n=9)，表明供试品溶液在16 h内稳定。

图1 高效液相色谱图

加样回收试验:称取已测定含量样品(批号为110501)10 mL和15 mL，各取3份，精密量取，各加入补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样，计算加样加收率。结果见表1。

表1 补骨脂素和补骨脂素加样回收试验结果(n=6)

2．4 样品含量测定

取3批样品各2份，分别制备供试品溶液，进行测定并计算。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

取补骨脂素和异补骨脂素对照品贮备液适量，以流动相精密配成含对照品0．4 g/L的溶液，在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，结果在246 nm波长处有最大吸收。参照文献[1-2]，采用醋酸乙酯和正丁醇作为提取溶剂，结果显示醋酸乙酯提取效果最佳。选用甲醇-水(35∶65)作为流动相，补骨脂素和异补骨脂素峰形良好，保留时间适宜，样品中补骨脂素和异补骨脂素能达到基线分离。该方法简便、准确、重复性好，可作为扶正合剂质量控制的有效方法。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:174．

[2]田永华，钱 叶，俞 圆．HPLC测定腰痛片中补骨脂素和异补骨脂素的含量[J]．中成药，2007，29(8):12-13．