气相色谱法测定食用调和油中α-亚麻酸及亚油酸的含量

韩 荣， 田 兰， 吴 迪， 吴桂荣

(新疆医科大学， 乌鲁木齐 830011)

亚油酸和α-亚麻酸都是营养学明确确定的人体必需脂肪酸，其对人体的健康都有着极其重要的意义。α-亚麻酸具有增强免疫力、抗凝血、抗炎、降血脂、延缓脑细胞衰老等药理作用[1-4]。亚油酸具有降低血脂、预防心脑血管疾病、抗肿瘤、抗氧化、降低动物和人体胆固醇与甘油三酯、抗动脉粥样硬化、提高骨骼密度、防治糖尿病等多种重要生理功能的活性[5-7]。随着生活水平提高，人们开始注重食用油的营养，而亚油酸和α-亚麻酸是食用油中的重要营养成分，是评价食用油营养价值的关键指标。本研究以α-亚麻酸甲酯和亚油酸甲酯为指标性成分，采用气相色谱法[8]测定食用调和油中亚油酸及α-亚麻酸含量,为食用调和油质量控制和评价提供参考和依据。

1 仪器与试药

1.1仪器氮氢空一体机(NHA-500)(北京中惠普技术分析研究所)，气相色谱仪(GC2010，日本岛津)，磁力搅拌油浴锅(PS-1000，Tokyo，Japan)。

1.2试剂食用植物调和油(新疆乌鲁木齐札郎孜生物科技有限公司)，α-亚麻酸甲酯(111624-200602)及亚油酸甲酯(111625-200301)(中国药品生物制品检定所)，BF3-CH3OH购自上海阿拉丁公司，氢氧化钠(西安化学试剂厂)，甲醇(天津市康科德科技有限公司)，正己烷(长沙唐华化工贸易有限公司)，以上试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件[1-2]色谱柱：岛津RTX-WAX弹性石英毛细管柱(聚乙二醇涂层)，长度30.0 m，膜厚0.25 μm，内径0.25 mm。进样口温度250℃，检测器温度250℃，柱温控制采用程序升温，以200℃为起始柱温，保持4 min，以4℃/min升温至230℃，保持3 min；控制方法为：线速率，载气为N2，尾吹流量30 mL/min，氢气流量40 mL/min，空气流量400 L/min。采用手动分流进样，进样量为1 μL，分流比为90∶1。

2.2溶液的配制

2.2.1 标准储备液的配制 亚油酸甲酯标准溶液的制备：精密称量亚油酸甲酯标准品184.5 mg，定容至10 mL，配制成浓度为18.45 mg/mL亚油酸甲酯标准品储备液。α-亚麻酸甲酯溶液的制备：精密称量α-亚麻酸甲酯标准品183.8 mg，定容至10 mL，得浓度为18.38 mg/mL的标准品储备液。

2.2.2 供试品溶液的配制 精密称量样品400 mg，加入0.5 mol/L氢氧化钠甲醇溶液6 mL, 置入65℃水浴锅中皂化，同时充入氮气，8 min后加入15%的BF3-CH3OH溶液7 mL，在65℃水浴中2 min，使其进行甲酯化，再加入正己烷3 mL，煮沸1 min，然后冷却至室温，转移至试管中，加入的饱和NaCl溶液，静置并定容上层有机层至5 mL，加入无水Na2SO4干燥，取干燥后样品200 μL，定容至10 mL，进样1 μL进行气相色谱分析[7]。

2.3标准曲线的绘制分别准确吸取0.10、0.20、0.40、0.50、1.00、2.00 mL的α-亚麻酸甲酯和亚油酸甲酯储备液,置于10 mL容量瓶中，以正己烷定容，得到浓度分别为0.183 8、0.367 6、0.735 0、0.919 0、1.838 0、3.676 0 mg/mL的α-亚麻酸甲酯标准工作液。分别准确吸取0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL的亚油酸甲酯储备液置于10 mL容量瓶中，以正己烷定容，得到浓度分别为0.199 7、0.359 8、0.899 5、1.799 0、3.589 0 mg/mL的亚油酸甲酯标准工作液，在“2.1”项下分析条件下，各浓度进样1 μL，以各组分保留时间定性，峰面积定量，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，见图1、2。

图1 α-亚麻酸甲酯对照品气相色谱图

图2 亚油酸甲酯对照品气相色谱图

2.4线性关系考察α-亚麻酸甲酯标准品浓度在0.183 8～3.676 0 mg/mL范围内，峰面积(Y)与浓度(X)线性关系良好，Y=1.183 7×105X+6.885 0×104(r=0.999 9，n=6)；亚油酸甲酯标准品浓度在0.199 7～3.598 0 mg/mL范围内，峰面积(Y)与浓度(X)线性关系良好，Y=1.462 7×105X-2.524 5×103(r=0.999 8，n=6)。

2.5检测限和定量限α-亚麻酸甲酯的检测限为0.017 1 mg/mL，定量限为0.063 6 mg/mL。亚油酸甲酯检测限为0.033 3 mg/mL，定量限为0.101 6 mg/mL。

2.6精密度试验将1份样品按供试品溶液配制方法处理后连续进样5次，每次进样1 μL, 并计算峰面积的相对标准偏差 , α-亚麻酸甲酯及亚油酸甲酯的计算结果分别为1.85%和1.75%，说明仪器精密度良好。

2.7稳定性试验将1份样品按供试品溶液配制方法处理后，于常温下密封储存，按以上色谱条件连续测定7 d，并计算峰面积的相对标准偏差 ,α-亚麻酸甲酯及亚油酸甲酯的计算结果分别为1.84%和1.98%，说明方法稳定性良好。

2.8重现性试验取同一批号的食用调和油样品5份，按供试品溶液配制方法制备成供试品溶液，再按 以上色谱条件测定，并计算5份样品峰面积的相对标准偏差，α-亚麻酸甲酯及亚油酸甲酯的计算结果为分别为3.97%和3.81%，说明本品重现性良好。

2.9加样回收率试验将亚油酸甲酯标准储备液和α-亚麻酸甲酯标准储备液混合，制成亚油酸含量为12.030 1 mg/mL、α-亚麻酸含量为8.882 7 mg/mL的混合标准品溶液。精密称取同一批次样品 9份，分别加入一定量的α-亚麻酸甲酯和亚油酸甲酯混合标准溶液，按供试品溶液配制方法处理，再按以上色谱条件进样测定，计算回收率，结果亚油酸平均回收率为99.59%，RSD为2.66%；α-亚麻酸平均回收率为100.73%，RSD为1.29%,见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.10样品测定结果分别准确称取不同调和比例的食用调和油400 mg，制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液1 μL，注入气相色谱仪进行测定。红花油与胡麻油的比例为1∶1时，亚油酸和α-亚麻酸的含量分别是39.28%和43.48%；红花油与胡麻油比例为1∶3时，亚油酸和α-亚麻酸的含量分别是17.76%和71.55%；红花油与胡麻油比例为7∶1时，亚油酸和α-亚麻酸的含量分别是76.55%和8.93%。从测定结果看出，气相色谱法的测定结果与实际油料配比相符,见图3、表2。

图3 调和油样品气相色谱图

配比(体积比)亚油酸含量/%RSD/%α-亚麻酸含量/%RSD/%红花油∶胡麻油(1∶1)39.282.2043.814.40 红花油∶胡麻油(1∶3)17.760.9571.551.43 红花油∶胡麻油(7∶1)76.551.378.931.44

3 讨论

本实验研究的食用调和油是由红花籽油和胡麻油按一定配比组成。红花籽油的主要成分是亚油酸，胡麻油的主要成分是α-亚麻酸，亚油酸和α-亚麻酸具有调节心血管系统的作用[3-8]，其为该食用油中的重要营养成分，所以将亚油酸和α-亚麻酸作为调和油质量控制的指标。

在酯化过程中,比较了通入氮气和不通氮气2种情况，通入氮气生成的甲酯化产物产量有所提高。

本实验建立了用气相色谱法同时测定食用调和油中亚油酸甲酯及α-亚麻酸甲酯的方法 ,进而计算其中亚油酸和α-亚麻酸的含量。实验结果说明气相色谱法方法快速、准确 ,重复性好 ,可以有效控制食用调和油的质量。该方法也可以作为生产原料红花油及胡麻油质量控制的方法或是其他类型食用调和油中亚油酸和α-亚麻酸含量的测定方法。该方法的建立对于食用调和油的生产全程质量控制具有积极的意义。

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