甜茶皂甙对变形链球菌抑龋性的研究*

李 莉 王玉波 陈岱韻 李俊福

(1.青岛市口腔医院，山东 青岛 266001；2.泰山医学院附属医院口腔科，山东 泰安 271000)

变形链球菌致龋是在牙面的粘附和集聚[1]，利用碳水化合物代谢产酸，酸性产物作用于牙体硬组织造成脱矿，导致龋病的发生[2]。因此,控制致龋细菌粘附在牙面,是预防龋病的有效的措施之一。甜茶含氨基酸、维生素C 以及矿物质等,对阴虚燥咳、咽干口燥、咽喉炎症，糖尿病、肥胖症、高血压等，均有辅助治疗作用[3]，甜茶素有高甜度，可以作为糖替代品。

1 材料和方法

1.1变形链球菌(Streptococcus Mutans)国际标准株ATCC25175(由上海交通大学医学院中心实验室购买)。

1.2甜茶提取物—甜茶皂甙(本课题组提供)。

1.3厌氧培养箱BACTRON 1.5(美国SHELLAB公司)、紫外可见分光光度计(LAMBE DA BIO 20(美国PE公司)、台式离心机5415D(德国EPPENDOR公司)。

1.4MSB 选择培养基(Mitis-Salivaris-Bacitracin Agar)(轻唾琼脂培养基)：胰蛋白胨10 g，示蛋白胨10 g，蔗糖200 g，葡萄糖1 g，无水磷酸氢二钾4 g，琼脂粉20 g，加入1000 ml 蒸馏水中溶解，调pH 至7.6，再加入 0.2%曲利苯蓝 3.5 ml，0.1%结晶紫 0.8 ml, 于15 Ib/in2、110 ℃ 下高压灭菌15 min，冷却至55 ℃ 左右，加入0.1% 亚碲酸钾2.8 ml，200 unit/ml杆菌肽1ml。

1.5基础培养液配制[4]：胰蛋白胨20 g，氯化钠2 g，蔗糖50 g，三水磷酸氢二钾3.92 g，无水磷酸二氢钾2 g，碳酸钾1 g ,硫酸镁0.12 g，硫酸锰0.15 g, 适量酵母浸汁、半胱氨酸，加蒸馏水1000ml，调pH=7.4， 121 ℃，8磅15 min高压灭菌。

1.6变形链球菌ATCC25175活化后接种于 MSB固体培养基上，厌氧培养48 h，涂片检查为纯培养后，取典型菌落，于无菌生理盐水内制成混悬液，紫外可见光比浊仪调麦氏值=0.5，此时细菌浓度为108CFU/ml(参照仪器使用说明)。

1.7实验组：配制浓度为5 g/100 ml的过饱和甜茶皂甙混悬液，用基础培养液进行液体二倍稀释法稀释[5]，得到浓度依次为5 g/100 ml、2.5 g/100 ml、1.25 g/100 ml、 0.625 g/100 ml、0.313 g/100 ml、0.156 g/100 ml的10 ml溶液。对照组为10 ml基础培养液。分别加入0.1 ml菌悬液，即菌浓度为106CFU/ml。将玻棒分别插入各支试管(插入培养液的长度为10 cm)，厌氧培养48小时，取出玻棒，生理盐水冲洗10秒，用0.1mol/L氢氧化钠溶液于震荡器将玻棒上黏附的菌细胞洗脱下来，3000转/min、4℃离心15分钟，洗涤2次，混悬于 10ml 生理盐水中，紫外可见光分光光度计测OD540 nm值，以OD值来表示变形链球菌对玻棒的粘附能力。

2 结 果

表1 甜茶皂甙对变形链球菌的玻棒黏附的成组间单因素方差分析

从表1可见，甜茶皂甙的浓度≥0.625 g/100 ml时，变形链球菌对玻璃棒的黏附低于无甜茶皂甙的对照组，P<0.01，差异非常显著，结果有统计学意义；当甜茶皂甙浓度再减低，变形链球菌的黏附性与对照组相比差异无显著性，P>0.05，差异无统计学意义。这个结果表明，当甜茶皂甙在浓度高于或等于0.625 g/100 ml 时对变形链球菌的黏附有抑制性，黏附力随甜茶皂甙浓度升高而降低；当甜茶皂甙浓度低于0.625g/100ml 时，对变形链球菌的黏附无抑制性。

3 讨 论

近年来许多学者都致力于寻找一种天然的非致龋性甜味剂，甜茶是一种价廉、无毒副作用的糖代物，本实验表明，甜茶皂甙的浓度≥6.25 g/l时，对变形链球菌的黏附有抑制性，黏附力随甜茶皂甙浓度升高而降低。

2003年楚金普曾研究同一药物浓度(5%)甜茶提取物、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖、木糖醇对变形链球菌的生长、粘附、产酸的影响，探讨甜茶的防龋作用。本实验在这一实验的基础上，单独对不同浓度的更精炼提取的甜茶皂甙对变形链球菌粘附的作用。甜茶皂甙与各种天然甜味植物的提取物相比，其甜度、不同浓度下的抑菌能力、在健康保健方面及提取量等方面的差别的综合评估，还需试验进一步研究。

综上所述，当甜茶皂甙在浓度高于或等于0.6.25 mg/ml 时，对变形链球菌的黏附有抑制性。对于龋病的防治，甜茶具有极大的研究价值和应用前景。

[1] Tsumori H ,Kuramitsu H. The role of the Streptococcus mutans glucosyltransferases in the sucrose-dependent attachment to smooth surfaces : essential role of the GtfC enzyme[J].Oral Microbiol Immun , 1997 , 12(5) :274-278.

[2] Leosch WJ. Role of Streptococcus Matans in human dental decay[J]. Microbiol Rev，1986，50(4):353-380.

[3] 黄汉强. 甜茶应用研究[J].时珍国医研究，1996，7(2)：118.

[4] 刘天佳，桂和明，肖晓蓉，等. 甜菊糖对变形链球菌的生长、产酸和黏附影响的体外实验[J]. 华西口腔医学杂志，1986，4(3)：165-168.

[5] 朱秀丽，陈强，唐荣银，等. 五倍子对5种常见牙周细菌抑制作用的体外研究[J].牙体牙髓牙周病学杂志，2002，12(5)：255-257.