高效液相色谱法测定丹毒宁胶囊中的绿原酸

杨晓东

【摘要】目的：建立丹毒宁胶囊中绿原酸的测定方法。方法：本次研究采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent TG-C18（250mm×4.6mm，5μm）；检测波长324nm；流动相：甲醇-水-冰醋酸，比例为12:88:1；柱温30℃；体积流量为1.0mL/min。结果：在0。1267-0.760μg上绿原酸线性关系良好，RSD为0.6%，回收率为98.6%。结论：在对丹毒宁胶囊绿原酸进行测定时，选择高效液相色谱法测定具有重现性好，准确、简便等多种优点，适用于丹毒宁胶囊的绿原酸测定。

【关键词】高效液相色谱法、丹毒宁、绿原酸

【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2014)06-0188-01

丹毒宁胶囊中的主要成分为连翘、重楼、玄参、金银花、黄柏、地黄、蒲公英以及紫花地丁，是医院中常用的一种制剂，丹毒宁胶囊具有消肿止痛、清热解毒等功效，在临床上通常用来治疗恶寒发热、复发性丹毒静脉炎、丹毒、红肿热痛等症状［1］。由于在医疗机构制剂标准中并没有丹毒宁胶囊的测定项，所以并不利于对质量的控制［2］。绿原酸则被认为是所有药材以及中成药中消炎利胆、抗菌解毒的有效成分，被人们用作定量、定性的重要指标。本次研究将选择丹毒宁胶囊中绿原酸为定量测定指标，并且通过高效液相色谱法测定丹毒宁中绿原酸的含量，现将报道如下。

1仪器与方法

1.1选用仪器与样品

本次研究中所选用的仪器为SHIMADZULC-2010A高效液相色谱仪，工作站CLASS-VP；色谱柱：Agilent TC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。所用试剂为：(由天津市康科德科技有限公司生产)甲醇;冰醋酸（天津化学试剂一厂），纯净水。本次研究中样品为丹毒宁胶囊（批号200801、200802、200803）对照品为绿原酸（中国药品生物制品检定所，批号：110753）

1.2方法

本次研究色谱柱为：AgilentTC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸，比例为12:88:1；检测波长为324nm；柱温：30℃；体积流量：1.0mL/min。根据绿原酸峰计算理论板数，在4000以上。选取适量绿原酸做对照品，精密称定，加入40μg/ml甲醇制成溶液，并将其摇匀。取装量差异项下的本品内容物，研细，取1g，并精密称定，放置于锥形瓶中，同时加入50%甲醇50ml，称定质量，并行超声处理，功率为250W，频率为33kHz，45min，将其放冷，对质量进行称定，其中减失的质量用50%甲醇补足，并且将其摇匀，滤过，取续滤液获得。根据丹毒宁胶囊中处方配比，将绿原酸外的其他药味去除，制成阴性对照胶囊，以上述方法制作成阴性对照溶液。

分别精密吸取10μg供试品溶液、10μg对照品溶液以及10μg阴性对照溶液，注入色谱仪，根据上述色谱条件进行测定，同时准确记录色谱图。经结果表明，在綠原酸对照品色谱峰相应位置，阴性对照溶液并未出现干扰峰。

1.2.1线性关系

在对照品溶液中，分别精密吸取3、6、9、12、15、18μL，注入色谱仪，根据色谱条件对各自峰面积进行测定，横坐标x以进样量（μg）表示，峰面积积分值以纵坐标（Y）行线性回归，其方程为：Y=2.731×106X+4.54×102。通过试验发现在0.127-0.76μg绿原酸线性关系良好。

1.2.2精密度试验

选取丹毒宁胶囊样品1分，批号为200801，取装量差异项下的本品内容物，研细，取1g，并精密称定，放置于锥形瓶中，同时加入50%甲醇50ml，称定质量，并行超声处理，功率为250W，频率为33kHz，45min，将其放冷，对质量进行称定，其中减失的质量用50%甲醇补足，并且将其摇匀，滤过，取续滤液获得。连续6次对绿原酸峰面积进行测定，试验结果得出RSD为0.12%。

1.2.3重现性试验

选择同一批丹毒宁胶囊样品，批号为200801共6份，根据“1.2.2”中方法制作成试品溶液，再根据色谱柱为：AgilentTC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸，比例为12:88:1；检测波长为324nm；柱温：30℃；体积流量：1.0mL/min。根据绿原酸峰计算理论板数，在4000以上。对每份样品中绿原酸的量进行测定。测试结果得RSD为0.75%。

1.2.4稳定性试验

选择丹毒宁胶囊样品根据上述方法制成试品溶液，再根据色谱条件分别在0.4.8.11h测定样品中绿原酸峰面积，其结果测得 RSD为0.55%，由此说明样品溶液在12h内较为稳定。

1.2.5回收率试验

选取丹毒宁胶囊，将其混匀，样本共6份，每份0.5g，精密称定，将样品置于锥形瓶中，往其中加入绿原酸对照品溶液（0.03752mg/mL）25mL，50%甲醇溶液25ml，对质量进行称定，行超声处理，其功率为250W，频率33kHz，时间为45min，将其放冷后再称定质量，减失的质量用50%甲醇补足，取续滤液［3］。同时吸取10μL注入色谱仪，测定绿原酸的质量，同时对绿原酸的回收率进行计算。最终得出RSD为0.5%，回收率高达97%。

2结果

选择3批丹毒宁胶囊样品，根据1.2.2中方法调制试品溶液，进样10μL，采用外标法对绿原酸的量进行测定，结果见表1.

表1丹毒宁胶囊绿原酸的测定结果

批号 绿原酸/（mg•g-1）200801 1.82200802 1.78200803 1.833讨论

在本次研究中，分别对丹毒宁样品进行了50%乙醇加热回流处理、50%甲醇超声处理、50%甲醇加热回流处理以及50%乙醇超声处理，经过研究发现50%甲醇提取方法效果最佳。同时从本次试验中发现，与甲醇加热回流处理方法相比，超声处理结果更好，所以本次研究试验样品试用50%甲醇超声提取法［4］。同时还对不同超声提取时间进行了比较分析，最后发现在45min和60min时绿原酸的量均相同，所以确定提取时间为45min，以此种方法来制备供试品溶液［5］。

在对丹毒宁胶囊绿原酸进行测定时，选择高效液相色谱法测定具有重现性好，准确、简便等多种优点，适用于丹毒宁胶囊的绿原酸测定。

参考文献

［1］姚辉,贺星. 高效液相色谱法测定丹毒宁胶囊中的绿原酸［J］. 现代药物与临床,2013,05:296-297.

［2］田兆红,陈凤,曾春美. 高效液相色谱法测定速感宁胶囊中绿原酸含量［J］. 中国药业,2012,19:233-234.

［3］王炎焱,黄烽,孙永慧. 高效液相色谱法测定脊痛宁胶囊中绿原酸的含量［J］. 中国中医药信息杂志,2013,09:145-146.

［4］费扬,王慧,凌水花,张国庆,张祖艳. 反相高效液相色谱法测定乌金胶囊中绿原酸的含量［J］. 药学实践杂志,2011,06:460-461.

［5］赵永成. 高效液相色谱法测定杜仲叶中的绿原酸［J］. 色谱,2012,03:263-264.