不同工艺柴葛疏表颗粒主要药效学筛选

吕晓君,杨雅婷,周素文,潘望平,何开勇,孙代华

(1.湖北省食品药品监督检验研究院,武汉 430064;2.湖北省医药工业研究院有限公司,武汉 430061)

不同工艺柴葛疏表颗粒主要药效学筛选

吕晓君1,杨雅婷1,周素文1,潘望平1,何开勇1,孙代华2

(1.湖北省食品药品监督检验研究院,武汉 430064;2.湖北省医药工业研究院有限公司,武汉 430061)

目的 比较5种工艺条件下所得柴葛疏表颗粒的抗炎、镇痛效果,以筛选最佳工艺方法。方法通过腹腔给予0.6%醋酸溶液制备小鼠急性腹膜炎模型,统计给药后小鼠扭体次数,观察镇痛作用。通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型观察抗炎作用。结果柴葛疏表颗粒不同工艺提取物均有镇痛效果,与阴性组小鼠比较,扭体次数减少;工艺1,2, 5所得提取物及挥发油均能降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度。结论在相同实验条件下,柴葛疏表颗粒不同工艺提取物均有镇痛作用,工艺1,2,5所得提取物及挥发油的抗炎效果较好。

柴葛疏表颗粒;抗炎作用;镇痛作用;醋酸;二甲苯

柴葛疏表颗粒由柴胡、连翘、葛根、黄芩等中药组成,具有疏风解表、清热解毒功效,临床可用于风热感冒,症见发热、头痛、身痛、咳嗽、咽痛、黄痰、口干、舌苔薄黄、脉浮数等。笔者在本实验中以抗炎、镇痛主要药效学实验对其不同工艺进行了筛选,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物 昆明种小鼠192只,雌雄各半,体质量20～22 g,SPF级,由武汉生物制品研究所有限责任公司动物中心提供,生产合格证号:SCXK(鄂)2008-0003。湖北省食品药品监督检验研究院动物实验设施使用合格证号:SYXK(鄂)2008-0009。饲养条件:昼夜明暗交替12 h,室温20～26℃,相对湿度40%～70%,笼具及垫料定期更换,饲料为全价纯鼠颗粒,饮水为纯化水。

1.2 试药 受试物柴葛疏表颗粒,工艺1批号: 20121129,规格:每克浸膏相当于生药1.41 g;工艺2批号:2012120301,规格:每克浸膏相当于生药2.29 g;工艺3批号:2012120302,规格:每克浸膏相当于生药1.70 g;工艺4批号:20121206,规格:每克浸膏相当于生药2.10 g;工艺5批号:20121207,规格:每克浸膏约相当于生药1.45 g。挥发油批号:20130122,规格(生药)100.09 g·mL-1。以上均由武汉双龙药业有限公司提供。人拟临床最大用量为生药52 g·(60 kg)-1,筛选实验按人临床使用量15倍设计,不同的工艺提取物临用前均以纯化水配制成相当生药0.52 g·mL-1浓度的溶液,挥发油加聚山梨酯-80配制成每毫升含0. 11 mL的混悬液。阳性对照药物:吲哚美辛片(临汾奇林药业有限公司生产,批号:1102071,规格:每片25 mg,临用前研钵研细,用纯化水配制成0.375 mg·mL-1混悬液,用于对二甲苯小鼠耳廓肿胀的影响实验和醋酸扭体实验)。二甲苯(批号: 20120208)、冰醋酸(批号:20121116)均由国药集团化学试剂有限公司生产。

1.3 仪器 ML303型电子分析天平,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司制造;动物秤JM5102电子秤,余姚纪铭称重校验设备有限公司制造;DS-671型电子秤,上海寺冈电子有限公司制造。

1.4 不同提取工艺对相关有效成分的影响 取处方中各味药材,按表1提取方法进行有效成分提取,其中黄芩苷、葛根素及连翘苷转移率见表1。结果显示,工艺5成分转移率较高。

表1 不同提取工艺主要有效成分转移率实验结果 %

1.5 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 取小鼠96只,按体质量随机分为8组,每组12只,分别为阴性对照组、阳性对照组、工艺1～5组受试物及挥发油组。各组灌胃给药,0.5 mL·(20 g)-1,每天1次,连续7 d,阳性对照组最后1 d给药。阴性对照组(纯化水25 mL·kg-1)、阳性对照组(吲哚美辛, 9.37 mg·kg-1)、各工艺1～5受试物组(生药13.00 g·kg-1),挥发油组(2.75 mL·kg-1)。末次给药后1 h,取二甲苯0.05 mL涂在各组小鼠右耳前后两面致炎,致炎后30 min将小鼠脱颈椎处死,用直径9 mm打孔器在小鼠左右耳相同部位打下耳片,用电子天平称质量。记录左右耳片质量,计算肿胀度。肿胀度(mg)=右耳片质量-左耳片质量。耳廓肿胀抑制率(%)=(阴性对照组耳廓肿胀度均值-给药组耳廓肿胀度均值)/阴性对照组耳廓肿胀度均值×100%[1-2]。

分别分析阴性对照组与阳性对照组、受试物各组肿胀度差异的统计学意义,采用ONE-WAY ANOVA统计方法,方差齐性采用LSD多重分析,方差不齐采用Dunnett's T3多重分析。

1.6 对醋酸致小鼠扭体的影响 取小鼠96只,按体质量随机分为8组,每组12只,分别为阴性对照组、阳性对照组、工艺1～5受试物及挥发油组。各组每天灌胃给药1次,体积0.5 mL·(20 g)-1,连续7 d,阳性对照组最后1 d给药。阴性对照组(纯化水25 mL·kg-1)、阳性对照组(吲哚美辛,9.37 mg·kg-1)、各工艺1～5受试物组(生药13.00g·kg-1),挥发油组(2.75 mL·kg-1)。末次给药后1 h,各组动物均腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL,注射后立即观察各组动物15 min内扭体次数[3]。分别分析各组扭体次数的差异,采用ONE-WAY ANOVA统计方法,方差齐性采用LSD多重分析,方差不齐采用Dunnett's T3多重分析。

2 结果

2.1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 各组剔除反应最高值及最低值后计算P值,结果阳性对照组耳廓肿胀度低于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。工艺1,2,5受试物组及挥发油组耳廓肿胀度低于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);工艺3,4受试物组与阴性对照组比较,差异无统计学意义,结果见表2。

2.2 柴葛疏表颗粒对醋酸致小鼠扭体的影响 见表3。各组剔除反应最高值及最低值后计算P值,结果阳性对照组扭体次数明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);所有工艺受试物组与阴性对照组比较,均差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),其中工艺3, 5受试物组及挥发油组效果最佳。

3 讨论

从有效成分的转移率及抗炎、镇痛作用分析,工艺5为最优工艺。可知,稀乙醇提取黄芩苷转移率优于水煎煮;水煮乙醇沉淀或澄清剂除杂对黄芩苷的损失较大,故黄芩的提取纯化优选稀乙醇。水煎煮和稀乙醇提取对葛根素转移率的影响较小,但以稀乙醇提取为优。实验表明,柴葛疏表颗粒工艺1,2,5对二甲苯致小鼠耳廓肿胀抑制作用较好;工艺1与工艺2比较,工艺1未醇沉,工艺2醇沉,则抗炎镇痛作用以未醇沉为优。工艺4与工艺5比较,部分药材均单独醇提,只是在水煮后工艺4醇沉,工艺5未醇沉,但抗炎镇痛作用以未醇沉的工艺5为优。工艺3与工艺1比较,工艺3用澄清剂沉淀除杂质,工艺1未加澄清剂除杂质,但工艺1的抗炎作用显著优于工艺3。抗炎镇痛作用比较,柴葛疏表颗粒的纯化工艺不论是醇沉还是澄清剂纯化均不能选用,说明为了制剂的需要在提取纯化工艺中一味纯化将影响产品的疗效。

表2 8组小鼠耳廓肿胀度与肿胀抑制率实验结果 n=10

表3 8组小鼠扭体实验结果 n=10

[1] 彭成.中医药动物实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2008:831.

[2] 初正云,翟延君,张慧.解毒胶囊的解热、抗炎、止痛和止咳作用[J].中成药,2008,30(2):181-184.

[3] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社, 2006:814-815,818-820,830-831.

DOI 10.3870/yydb.2014.07.012

R286;R965

A

1004-0781(2014)07-0885-02

2013-07-04

2013-08-15

吕晓君(1983-),女,湖北钟祥人,主管药师,硕士,主要研究方向:药理毒理。电话:027-87271327,E-mail 1012814506@qq.com。

杨雅婷(1979-),女,湖北武汉人,主管药师,学士,主要研究方向:药理毒理。电话:027-87271327,E-mail:yangtan3814@ 2008.sina.com.cn。

周素文(1957-),女,湖北孝感人,主任药师,学士,主要研究方向:药理毒理。电话:027-87271327,E-mail: sw6660@163.com。