丹桔合剂的质量控制

庞鹏，李文

南京市中医院，南京 210001

丹桔合剂的质量控制

庞鹏，李文*

南京市中医院，南京 210001

目的：建立丹桔合剂的质量控制指标。方法：采用薄层色谱法对制剂中丹参、陈皮进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中丹酚酸B、橙皮苷进行含量测定。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰；含量测定丹酚酸B和橙皮苷分别在进样量0.19～3.01 μg、0.16～2.51 μg的范围内呈良好的线性关系；丹酚酸B和橙皮苷的加样回收率分别为98.28%和97.91%。结论：本方法简便、专属性强，可作为该制剂的质量控制指标。

丹桔合剂；薄层色谱法；高效液相色谱法；丹酚酸B；橙皮苷

丹桔合剂为临床使用多年的经验方，由丹参、山楂、何首乌、决明子、陈皮等5味药材组成。其具有滋补肝肾、活血化瘀、化痰祛浊的功效；主治眩晕、肢麻等中风先兆症状。本实验采用薄层色谱法对制剂中的丹参、陈皮等进行定性鉴别；用高效液相色谱法对制剂中丹参与陈皮的有效成分丹酚酸B和橙皮苷进行含量测定。在此基础上建立丹桔合剂的质量控制方法，似可作为质量评价主要手段之一[1]。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪（UV/Visible Detector 2489；Seperations Module e2695）；Sartorius电子天平（型号：BT25S）；

丹酚酸B对照品（批号：111562-201111），橙皮苷对照品（批号：110721-201115）均由中国药品生物制品检定所提供；丹桔合剂（自制，每毫升合剂含0.8 g生药，批号：20121218、20121219、20121220）；乙腈为色谱纯；其余试剂为分析纯。

2 性状及制备

2.1 性状及制备

棕色液体，嗅之有淡淡的中药香。

取处方药味，加水，先浸润，再加热煎煮多次；合并水煎液，滤过，分装入瓶，封口，灭菌，冷却后贴标签，即得。

2.2 鉴别

2.2.1 丹参取丹桔合剂3 mL于10 mL带盖离心管中，加入甲醇6 mL，振摇混合均匀，超声提取15 min后，以4500 r·min-1离心10 min，上清液即可作为供试品溶液。取除丹参外的4味药材各40 g，按合剂制备法制得丹参的阴性合剂，再按供试品溶液的制备方法制备阴性溶液。另取丹参对照药材0.2 g，加75%甲醇25 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为丹参对照药材溶液。再取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照2010版《中国药典》丹参药材项下鉴别方法进行检测。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰[2]。

2.2.2 陈皮取丹桔合剂3 mL于10 mL带盖离心管中，加入甲醇6 mL，振摇混合均匀，超声提取15 min后，以5000 r·min-1离心10 min，上清液即可作为供试品溶液。取除陈皮外的4味药材各40 g，按合剂制备法制得陈皮的阴性合剂，再按供试品溶液的制备方法制备阴性溶液。另取陈皮对照药材0.3 g，加甲醇10 mL，加热回流20 min，滤过，取滤液5 mL，浓缩至1 mL，作为陈皮对照药材溶液。再取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照2010版《中国药典》陈皮药材项下鉴别方法进行检测。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰[3]。

2.3 检查

按《中国药典》2010年版一部附录ⅠJ合剂项下有关规定检查，对本品的密度、pH值、装量、微生物限度等进行了检查和测定，均符合规定。

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相梯度洗脱如表1；检测波长：284 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。理论板数按丹酚酸B峰计算不低于2000。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.4.2 溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品6.01 mg，置于10 mL量瓶中，用50%甲醇充分溶解并定容至刻度，摇匀，即得丹酚酸B对照品储备液。精密称取橙皮苷对照品5.02 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇充分溶解并定容至刻度，精密量取5 mL，置于10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得橙皮苷对照品储备液。

供试品溶液的制备：精密量取丹桔合剂0.5 mL，加入水4.5 mL，再加入甲醇5 mL，超声处理15 min，使充分混合均匀；以5000 r·min-1离心15 min。上清液即可作为供试品溶液。

2.4.3 专属性试验取本合剂缺丹参、陈皮的阴性制剂，按供试品溶液制备方法制得丹参、陈皮阴性样品，按上述色谱条件进样，测定，结果表明，阴性制剂无干扰。见图1。

2.4.4 线性关系考察精密吸取0.601 mg·mL-1的丹酚酸B对照品储备液0.31、0.62、1.25、2.5、5 mL分别用50%甲醇定容至10 mL的量瓶中，摇匀，分别得到浓度为0.301、0.150、0.075、0.038、0.019 mg· mL-1的丹酚酸B系列对照品溶液，按上述色谱条件进样，测定峰面积，以峰面积积分值（A）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程Y=1.0×107X+68826。

精密吸取0.502 mg·mL-1的橙皮苷对照品储备液0.31、0.62、1.25、2.5、5 mL用甲醇定容至10 mL的量瓶中，摇匀，即得0.251 mg·mL-1的橙皮苷对照品溶液；依次稀释，分别得到浓度为0.251、0.126、0.063、0.031、0.016 mg·mL-1的橙皮苷系列对照品溶液，按上述色谱条件进样，测定峰面积，以峰面积积分值（A）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程Y= 9.0×106X-11406。

图1 样品色谱图

2.4.5 精密度试验精密吸取配制好的丹酚酸B对照品溶液，在上述色谱条件下，连续进样6针，测定峰面积，计算得丹酚酸B的相对标准偏差（RSD）为0.06%（＜3%），结果表明，在该条件下仪器精密度良好。

精密吸取配制好的橙皮苷对照品溶液，在上述色谱条件下，连续进样6针，测定峰面积，计算得RSD为0.35%（＜3%），结果表明，在该条件下仪器精密度良好。

2.4.6 重复性试验平行制备供试品液5份，吸取制备好的供试品溶液，进样，测定丹酚酸B、橙皮苷峰面积，计算得丹酚酸B的RSD=2.7%（<3%），橙皮苷的RSD=1.9%（<3%），结果表明此测定方法重复性良好。

2.4.7 稳定性试验吸取制备好的供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、18、24 h进样，测定丹酚酸B、橙皮苷峰面积，计算得丹酚酸B的RSD=0.28%（＜3%），橙皮苷的RSD=0.39%（＜3%），结果表明，在该条件下样品溶液在24 h内稳定。

2.4.8 加样回收率试验精密量取已知丹酚酸B、橙皮苷含量的同一批合剂共6份，再精密加入等量的丹酚酸B、橙皮苷对照品，测定丹酚酸B、橙皮苷峰面积，计算丹酚酸B、橙皮苷的含量，按下式计算回收率（应为95%～105%）和平均回收率，结果见表2。表明此测定方法回收率良好。

回收率=（测得量-已知样品量）/加入的标准品量

表2 丹酚酸B、橙皮苷加样回收试验结果

2.4.9 样品含量测定以建立的方法对3批样品进行含量测定。结果见表3。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

梯度洗脱的选择：按2010版《中国药典》药材项下“含量测定”方法检测。丹酚酸B的流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59），检测波长为286 nm；橙皮苷的流动相为甲醇-醋酸-水（35∶4∶61），检测波长为283 nm。故本实验确定检测波长为284 nm，根据药典的流动相比例及目标峰的出峰时间，可初判橙皮苷的极性大于丹酚酸B的极性。由图1可知橙皮苷的出峰时间为16 min左右，丹酚酸B的出峰时间为22 min左右，前15 min的峰非目标峰，故选用相对大极性的流动相比例，以节省时间，目标峰的出峰时间分别采用平缓的梯度23%、27%的乙腈。选用上述梯度洗脱条件可以大大节省时间，样品的出峰时间控制35 min内，并且峰型清晰，无拖尾现象。故最终确定“2.4.1”的色谱条件。

[1] 赵颖，谈瑄忠，毛春芹，等.益坤宁颗粒的质量控制[J].中国医院药学杂志，2009，29（14）：1234-6.

[2] 刘丰贤.丹参调肝颗粒的薄层色谱法鉴定[J].湖南师范大学学报，2012，9（1）：84-6.

[3] 宋锦锋，李娟.升清胶囊定性定量方法研究[J].中南药学，2012，10（3）：192-5.

Quality Standard of Danju Mixture

PANG Peng,LI Wen
Nanjing Hospital of TCM,Nanjing 210001

Objective：To study and formulate the quality control index of Danju mixture.Methods：Qualitative analysis of Salvia Miltiorrhiza and Tangerine Peel in Danju mixture was made with thin-layer chromatography(TLC).And salvianolic acid and aurantiamarin in the Danju mixture were quantified with high performance liquid chromatography(HPLC).Results：The TLC spots were clear and no interference was found in the negative control.The good linear ranges of calibration curves for salvianolic acid and aurantiamarin were 0.19～0.75 μg and 0.16～0.13 μg,respectively,and the recovery rates were 98.28%and 97.91%,respectively.Conclusion：The process is convenient,specific and exact,and can be used as the basis of quality control for Danju mixture.

Danju mixture;TLC;HPLC;Salvianolic acid;Aurantiamarin

R927.11

A

1673-7806（2014）02-118-03

庞鹏，女，主管中药师，主要研究方向：药检及临床药学 E-mail:njqly@163.com

*通讯作者 李文，女，主任中药师，主要研究方向：中药制剂及检验 E-mail:njzyyliwen@sohu.com

2013-10-21

2014-01-06