湖北省桑属植物亲缘关系RAPD分析

陈祥平　范小敏　柯皓天　陈仁芳　朱一平　李萤　刘玲　张佳钰　沈曦彤

摘要[目的]采用RAPD和ITS方法分析湖北省桑属植物亲缘关系。[方法]利用RAPD分析湖北省桑属植物的亲缘关系，并与ITS分支图进行比较，研究湖北省桑属植物亲缘关系。[结果]两者在分析桑属的亲缘关系时，均把桑属分为2大支。其中，RAPD多态性高，适合居群遗传多样性分析；但RAPD资料属等位基因频率资料，不同种的RAPD扩增产物往往并不同源，不宜假定外类群，无法确定树根。ITS为核糖体基因内转录间隔区的差异，位点的变异往往能反映出桑属种间的差异，宜假定外类群，进行分支分析。但ITS资料并不能把桑属所有桑种分开。[结论]在研究桑属的亲缘关系时，先用ITS进行粗略的分类后，再用RAPD进行细分的结果较准确。

关键词湖北省；桑属；RAPD；ITS；亲缘关系；再分析

中图分类号S888.3；Q948文献标识码A文章编号0517-6611（2014）07-01917-04

作者简介陈祥平（1955-），男，四川成都人，副教授，硕士，从事蚕桑科学研究。*通讯作者，副教授，硕士生导师，博士，从事蚕桑新品种选育研究。

收稿日期20140210随机扩增片段长度多态性DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）标记，发明于20世纪90年代[1-2]，是在PCR基础上发展起来的一种对未知序列基因组DNA进行随机扩增，根据扩增的DNA条带长度的多态性，判断供试材料间的遗传多样性及亲缘关系。桑树随机扩增多态性DNA，已有较多人研究[3-17]，但关于RAPD与核糖体内转录间隔区 （Internal Transcribed Spacer，ITS）对比分析的研究鲜有报道。笔者在前报《基于ITS标记分析湖北省收集桑种质资源的亲缘关系》的基础上[18]，选取相同材料，利用RAPD标记，对湖北省桑树种质资源的亲缘关系进行再分析，试图比较2种方法各自的优缺点，以期为RAPD技术的进一步应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料 材料同前报，并增加浙江瑞穗桑、四川川桑、新疆黑桑、广东荆桑、钦州长果桑、云南滇桑和外类群湖北构树，增加的材料分别取自浙江农业大学桑品种园、新疆维吾尔自治区和田桑品种园、四川丝绸公司桑品种园、广东省蚕桑研究所桑品种园、广西钦州百果园和昆明植物园，所有材料经鉴定后采集（表1）。

1.2DNA提取及质量检测 总DNA提取采用稍加改进的CTAB法[19]，从0.150 g的硅胶干燥桑叶中提取。质量和浓度用Nanodrop 2000微量紫外分光光度计检测确认。