血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与脑动脉粥样硬化性狭窄的关联性研究

曹裕民 张雄 龙隆 万鑫 王硕 代成波 马桂贤 杨哲贤 马腾云 张玉虎 王丽娟

血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与脑动脉粥样硬化性狭窄的关联性研究

曹裕民＊△张雄＊龙隆＊万鑫＊王硕＊代成波＊马桂贤＊杨哲贤＊马腾云＊张玉虎＊王丽娟＊

目的 研究血小板活化因子乙酰水解酶（platelet-activating factor acetylhydrolase，PAF-AH）基因Arg92His（4，275；G→A）、Ile198Thr（7，593；T→C）、Val279Phe（9，994；G→T）突变与脑动脉粥样硬化性狭窄（cerebral artery atherosclerotic stenosis，CAAS）及狭窄颅内外分布的关系。方法642例行全脑血管数字减影造影(cerebral digital subtraction angiography，DSA)检查的患者，根据狭窄程度，分为脑动脉狭窄（CAAS）组477例和对照组156例，CAAS组进一步分为3个亚组，单纯颅内动脉狭窄（intracranialatherosclerotic stenosis，ICAS）组，单纯颅外动脉狭窄（extracranial artery atherosclerotic stenosis，ECAS）组，颅内外动脉联合狭窄（intracranial-extracranial artery atherosclerotic stenosis，IECAS）组。比较Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe突变基因型及等位基因频率在各组的分布。结果Arg92His突变基因型及等位基因频率，在ICAS组显著高于对照组（42.6%vs.30.3%；23.3%vs. 16.4%）（P＜0.05），而ECAS组、IECAS组突变基因型频率（28.7%，26.1%）及突变等位基因频率（17.0%，15.3%）与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。Ile198Thr、Val279Phe突变基因型及等位基因频率在ICAS组、ECAS组、IECAS组与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。CAAS组与对照组比较，Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe突变基因型及等位基因频率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论Arg92His位点突变可能参与了颅内动脉粥样硬化性狭窄的发生。

血小板活化因子乙酰水解酶 基因多态性 脑动脉粥样硬化性狭窄 脑梗死 脑血管造影

血浆血小板活化因子（platelet-activating factor，PAF）是迄今发现的最有效的血小板激活剂，在脑梗死的病理过程中起着重要作用[1]。PAF的代谢失活由血浆型PAF乙酰水解酶（platelet-activating factor acetylhydrolase，PAF-AH）所催化。颅内动脉粥样硬化性狭窄是脑梗死的重要病因，在我国高发[2]。我们既往研究中发现，脑梗死患者血浆型PAF-AH基因Val279Phe突变基因型及突变等位基因显著增高[3]。但迄今为止，仍未发现PAF-AH基因位点多态性与脑动脉粥样硬化性狭窄及其颅内、外分布的相关性报道。本研究检测了脑梗死患者血浆型PAF-AH 4号、7号、9号外显子的基因型和等位基因，探讨其位点多态性与脑动脉粥样硬化性狭窄及其分布的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象入选2011年10月至2013年1月，在我科行选择性全脑血管数字减影造影(cerebral digital subtraction angiography，DSA)检查的642例缺血性脑血管病患者。

1.2 入组标准①所有入组患者诊断为大动脉粥样硬化型或小动脉病变性脑梗死（中国第四届脑血管病学术会议诊断标准，TOAST病因分型)[4]；②颅外动脉狭窄率的测量根据北美症状性颈动脉内膜切除术试验(North American Symptomatic Carotid Endarterectomy Trial Collaborators，NASCET)标准[5]，颅内动脉按照华法林-阿司匹林治疗症状性颅内动脉狭窄研究(theWarfarin Aspirin Symptomat ic Intracranial Disease Trial,WASID)方法[6]，脑动脉狭窄组（CAAS组）患者动脉狭窄率≥50%；③在CAAS患者中,进一步根据脑动脉狭窄的位置分为：ICAS组251例（单纯颅内动脉狭窄率≥50%或闭塞），ECAS组115例（单纯颅外动脉狭窄率≥50%或闭塞），IECAS组111例（颅内颅外动脉联合狭窄率≥50%或闭塞）；④对照（control）组165例，脑动脉狭窄率≤50%或未见明显狭窄。

1.3 排除标准①存在心源性栓子的潜在来源；②其他病因引起的脑梗死及动脉狭窄(如动脉夹层,血液高凝状态,动脉炎,烟雾病,复杂性偏头痛等)；③患者患有恶性肿瘤,系统性急慢性炎症性疾病；④患者卒中的病因不明等。

1.4 检测方法①标本采集：晨起抽受检患者空腹静脉血1m l，置于含乙二胺四乙酸二钠冻存管，3000rpm，4℃离心5min，分离上清液，沉淀物即为白细胞；②DNA提取：采用血液基因组DNA提取试剂盒（GK1042）；③基因型检测：基因位点多态性采用聚合酶链反应-连接酶检测技术（polymerase chain reaction-ligase detection reaction, PCR-LDR）。该实验过程和基因型分析在上海捷瑞生物工程有限公司实验室实施。

1.5 统计学方法所有数值均运用SPSS 13.0统计，Hardy-Weinberg遗传平衡定律对各组进行检验，计数资料采用χ2检验，计量资料年龄的比较采用t检验。α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 一般情况与对照组比较，CAAS组患者年龄、高血压病史、糖尿病史差异有统计学意义（P＜0.05）。在3个亚组中，男性患者比例均高于女性患者。IECAS组平均年龄最高，其次是ECAS组，对照组平均年龄最低。男性、吸烟、年龄与ECAS明显相关（P＜0.05）；高血压病史、糖尿病史与ICAS相关（P＜0.05）；男性、年龄、糖尿病史、高血压病史则与IECAS明显相关（P＜0.05）。

2.2 基因位点多态性分析CAAS组与对照组比较，Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe位点基因型和等位基因频率分布，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

ICAS组与对照组比较，Arg92His位点突变基因型频率（42.6%vs.30.3%）及突变等位基因频率（23.3%vs.16.4%）分布差异有统计学意义（P＜0.05）；Ile198Thr和Val279Phe位点突变基因型及等位基因频率差异无统计学意义（P＞0.05）。

ECAS组和IECAS组与对照组比较，Arg92His、Ile198Thr及Val279Phe位点突变基因型及突变等位基因差异均无统计学意义（P＞0.05）（表1～3）。

3 讨论

表1 Arg92His位点基因型和等位基因频率

表2 Ile198Thr位点基因型和等位基因频率

表3 Val279Phe位点基因型和等位基因频率比较

本研究通过对Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe突变基因型及等位基因频率在CAA组、ICA亚组、ECA亚组、IECA亚组分布的比较研究，探讨血浆型PAF-AH基因多态性与CAAS及其颅内、外分布的关系，结果显示，Arg92His突变基因型AA、AG及突变等位基因A在ICAS组中明显高于对照组，提示Arg92His突变与ICAS相关，突变基因型及突变等位基因A是ICAS的易感因素。本研究并未发现Arg92His突变与ECAS及IECAS相关。虽然Val279Phe已被证实与脑梗死明显相关，但研究结果显示，Val279Phe突变、Ile198Thr突变与CAAS、ICAS、ECAS、IECAS均无明显相关。对各狭窄组与对照组的传统危险因素进行比较，发现高血压和糖尿病与ICAS明显相关,这与国内学者[7]及国外学者的观点一致[8]。

动脉粥样硬化及脑梗死是多基因遗传疾病，近年来，脑梗死相关遗传机制的研究快速发展，已发现，ApoEε4位点突变[9]、对氧磷酶多态性[10]、白细胞介素6基因多态性[11]等已被证实与脑梗死有关。然而，某些与脑梗死相关的基因位点突变，并未发现与ICAS有关。Chutinet等[12]发现，同型半胱氨酸代谢的关键酶-亚甲基四氢叶酸还原酶、血管紧张素转换酶、载脂蛋白E基因多态性与颅内动脉粥样硬化性狭窄无关。

血浆PAF是迄今发现的最有效的血小板激活剂，参与了动脉粥样硬化性斑块形成和发展的病理过程[1]。PAF-AH通过脂蛋白在血液中循环，能去除PAF sn-2位置上的乙酰基团使PAF降解和灭活，还可以降解氧化磷脂的生物活性，从而在动脉粥样硬化性狭窄的防治中可能起到有效的作用。目前发现，血浆型PAF-AH基因存在Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe和Ala379Val位点多态性。Arg92His、Val279Phe突变可导致PAFAH活性的变化，而Ile198Thr突变对酶活性的影响尚存在争议[13-14]。本研究以脑梗死患者为研究对象，分析CAAS、ICAS、ECAS及IECAS与Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe突变的关系，仅发现Arg92His突变与单纯颅内动脉粥样硬化性狭窄相关，提示Arg92His突变参与了单纯颅内动脉粥样硬化性狭窄的形成和发展，与脑动脉粥样硬化性狭窄的颅内外分布有关。Val279Phe突变参与了脑梗死的发病，但本并未发现该位点突变与各部位脑动脉狭窄相关，提示脑动脉粥样硬化性斑块形成及其分布的病理过程存在环境、多基因相互作用等多因素的共同影响，Val279Phe突变可能参与了该病理过程，但与脑动脉粥样硬化性狭窄及其颅内、外分布无明显相关。关于Ile198Thr位点突变，本研究未发现其与任何部位脑动脉狭窄相关，进一步研究Ile198Thr突变与酶的关系，有助于明确其与动脉粥样硬化性狭窄之间的关系。

综上，本研究发现了Arg92His突变与单纯颅内动脉粥样硬化性狭窄有关，提示Arg92His突变可能参与了脑动脉粥样硬化性狭窄的颅内外分布。但本研究为单中心研究，存在回顾性横断面研究及单个基因位点分析缺陷，有必要进行多基因位点联合、更大样本量的前瞻性分析研究。

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A cross-sectional study on the association between platelet-activating factor acetylhydrolase gene polymorphism and cerebral artery atherosclerotic stenosis.

CAO Yumin,ZHANG Xiong,LONG long,WAN Xin,WANG Shou, DAI Chenbo,MA Guixian,MA Tengyun,YANG Zhexian,ZHANG Yuhu,WANG Lijuan.
Department of Neurology,Guangdong Provincial People’s Hospital＆Guangdong Academy of Medical Sciences,Guangzhou 510080,China.Tel:020-83827812-10301.

ObjectiveTo investigate the relationship between platelet-activating factor acetylhydrolase gene Arg92His(4,275;G→A),Ile198Thr(7,593;T→C)and Val279Phe(9,994;G→T)mutation and cerebral artery atherosclerosis stenosis.MethodsSix hundred forty-twopatients with cerebral infarction underwent cerebral digital subtraction angiography(DSA).The patients were then divided into cerebral artery atherosclerosis stenosis(CAAS)group(n= 477)and control group(n=81)accroding to the site and severity of their cerebral artery stenosis.Furthermore,the CAASgroup were divided into intracranial artery stenosis(ICAS)subgroup(n=251),extracranial artery stenosis(ECAS)subgroup (n=115)and extracranial-intracerebral artery stenosis(ECAS)subgroup(n=111).The distributions of genotype and allele frequencies of Arg92His，Ile198Thr and Val279Phemutation of platelet-activating factor acetylhydrolase genewere examined and comparied in different groups.ResultsThere were significant differences in the distributions of genotype and allele of Arg92Hismutation between ICAS subgroup and control group（42.6%vs.30.3%；23.3%vs.16.4%,P＜0.05）.These associations were not detected in ECAS and IECAS subgroups.There was no significant association between Ile198Thr and Val279Phe and stenosis atany site(P＞0.05).The distributions of genotype and allele of Arg92His, Ile198Thr and Val279Phemutation were no significantly difference between CAASgroup and control group(P＞0.05).ConclusionsArg92Hismutationmay be associated with intracranialartery atherosclerotic stenosis.

Platelet-activating factor acetylhydrolase Gene polymorphism Cerebral artery atherosclerosis stenosis Cerebral infarction Cerebral digital subtraction angiography

R743.3

A

2013-09-04）

（责任编辑：李立）

10.3936/j.issn.1002-0152.2014.03.003

☆广东省科技计划项目(编号：2012B031800410)

*广东省人民医院（广东省医学科学院）神经内科（广州 510080）

△汕头大学医学院在读硕士研究生