Hp LC法测定原料药中埃索美拉唑的含量

董琦鑫朱家俊郁韵秋△唐 超隋 强

(1复旦大学药学院药物分析教研室 上海 201203；2上海市医药工业研究院化学部 上海 200083)

Hp LC法测定原料药中埃索美拉唑的含量

董琦鑫1朱家俊1郁韵秋1△唐 超2隋 强2

(1复旦大学药学院药物分析教研室 上海 201203；2上海市医药工业研究院化学部 上海 200083)

目的建立用于测定原料药中埃索美拉唑含量的HPLC法。方法采用HPLC法测定,色谱柱：Waters XTerraⒸMS C8反相柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相：V(乙腈)：V(20 mmol/L醋酸铵缓冲液, p H 7.6)=28：72,检测波长280 nm,柱温25℃,流速1 mL/min。结果埃索美拉唑浓度在0.01～0.07 mg/mL范围内与峰面积之间呈现良好的线性关系(r=0.9996),方法回收率为98.49%～101.72%,RSD为0.15%～0.58%。结论本方法简便快速,能准确检测原料药中埃索美拉唑的含量,可作为原料药质量控制的分析方法。【关键词】 埃索美拉唑； 原料药； 高效液相色谱(HPLC)； 含量测定

埃索美拉唑是奥美拉唑的纯左旋异构体［1］,化学名为5-甲氧基-2-{(S)-［(4-甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)甲基］亚硫酰基}-1 H-苯并咪唑。它是第一种被发现的光学异构体质子泵抑制剂,与其他质子泵抑制剂一样,埃索美拉唑通过抑制胃壁细胞的H+/K+-ATP酶来降低胃酸分泌,防止胃酸形成［2］。由于代谢方面的优势,埃索美拉唑有良好的临床疗效和可预测性,其在AUC值、生物利用度及药代动力学个体一致性方面均有一定优势,使药物到质子泵的传递增强并能提供更好的酸控制效果［3］。对于胃食道反流性疾病的患者而言,埃索美拉唑在糜烂性食管炎的维持治疗方面有很好的效果和耐受性［4］；同时,它能减少夜间胃灼热和睡眠障碍,改善患者睡眠质量和工作效率［5］。

目前,基于色谱法的埃索美拉唑分析报道主要是制剂中的药物测定。Önal等［6］采用高效液相色谱(HPLC)技术对埃索美拉唑片剂进行了检测；Reddy等［7］以反相HPLC法同时检测药物制剂中的埃索美拉唑和萘普生。对于原料药的测定方法鲜有报道。为此,我们建立了测定原料药中埃索美拉唑含量的HPLC法,并用于不同批次原料药的测定。结果表明,该方法快速准确,可用于原料药中埃索美拉唑的含量测定,为其质量控制提供了手段和依据。

材料和方法

仪器和试剂Hitachi L-2000型高效液相色谱仪。乙腈为色谱纯,水为纯水(Millipore),其他化学试剂均为分析纯。埃索美拉唑对照品(上海医药工业研究院),埃索美拉唑原料药(上海医药工业研究院,批号20120906、20121008c、20121121c)。

色谱条件色谱柱：Waters XTerraⒸMS C8反相柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相：V(乙腈)：V (20 mmol/L醋酸铵缓冲液,p H 7.6)=28：72,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm,柱温25℃,进样体积20μL。

缓冲溶液配制20 mmol/L醋酸铵缓冲液,用氨水调至p H 11.0。

对照品储备液精密称取105℃干燥至恒重的埃索美拉唑对照品10 mg,置于10 m L容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得埃索美拉唑对照品储备液(1 mg/m L)。

空白对照品溶液量取2.5 m L缓冲溶液(p H 11.0)置于50 m L容量瓶中,用纯水定容至刻度,摇匀,即得空白对照品溶液。

供试品溶液精密称取样品2.5 mg置于50 m L容量瓶中,加入2.5 mL缓冲溶液(p H 11.0),用纯水定容至刻度,摇匀,即得供试品溶液。

混标溶液称取各有关物质约1 mg及样品约10 mg置于200 m L容量瓶中,加入10 m L缓冲溶液(p H 11.0),用纯水定容至刻度,摇匀,即得混标溶液。

结 果

线性关系考察精密量取对照品储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 m L分别置于50 m L容量瓶中,加入2.5 m L缓冲溶液(p H 11.0),用纯水稀释至刻度,分别取20μL注入色谱仪,记录色谱峰面积。以峰面积对进样浓度作线性回归,得到线性方程：Y=28319X-42.043(r=0.9996)。结果显示,埃索美拉唑质量浓度在0.01～0.07 mg/m L范围内与峰面积之间呈现良好的线性关系。

精密度试验精密量取对照品储备液1、2、3 m L分别置于50 m L容量瓶中,加入2.5 m L缓冲溶液(p H 11.0),用纯水定容至刻度,制得低(0.02 mg/m L)、中(0.04 mg/m L)、高(0.06 mg/m L)浓度的溶液,分别重复进样5次,每次进样20μL,记录峰面积,计算RSD分别为0.30%、0.078%、0.23%,结果表明精密度良好。

稳定性试验精密称取样品配成溶液,室温下分别在0、2、6、10、24 h时进样20μL,纪录峰面积,计算RSD为0.22%。结果表明样品溶液在24 h内基本稳定。

重复性试验取同一批次样品,精密称取5份,配制成供试品溶液并测定原料药中埃索美拉唑的含量,重复进样5次,埃索美拉唑平均含量为99.18%, RSD为0.20%(n=5)。

准确度试验精密量取对照品储备液1.5、2.5、3.5m L分别置于50 m L容量瓶中,加入2.5 m L缓冲溶液(p H 11.0),用纯水定容至刻度,制得低(0.03 mg/m L)、中(0.05 mg/m L)、高(0.07 mg/ m L)浓度样品各3份,按上述色谱条件测定,得到方法回收率(表1)。

样品含量精密称取3批原料药样品,配制成供试品溶液,分别取20μL注入液相色谱仪,记录埃索美拉唑峰面积,外标法计算含量。3批样品中埃索美拉唑含量分别是98.49%、98.54%和99.18%。

讨 论

检测波长的选择取对照品及有关物质适量,分别加甲醇使其溶解,并稀释成适当浓度,经紫外光谱扫描测定,所有物质在280 nm处均有最大吸收,因此本研究中选择280 nm作为检测波长。

流动相的选择和优化埃索美拉唑在酸性条件下容易降解［8］,而在碱性条件下很稳定,因此我们选择将流动相的水相调为碱性。然而流动相过碱性会对色谱柱寿命产生较大影响,经过数次试验后,最终将流动相水相醋酸铵缓冲液的p H值确定为7.6。为了使埃索美拉唑和有关物质达到基线分离,我们考察了不同流动相比例下的色谱分离度。当乙腈与醋酸铵缓冲液比例为28∶72时,主峰与最近的杂质峰的分离度为2.3(图1),而保留时间仅为6.62 min,分离效果好,分析时间短,因此我们将流动相比例确定为V(乙腈)∶V(20 mmol/L醋酸铵缓冲液,p H 7.6)=28∶72。在此色谱条件下得到埃索美拉唑对照品、空白对照品、埃索美拉唑原料药样品溶液的色谱图(图2)。理论塔板数＞3000,与相邻峰的分离度＞1.5。

配样溶剂和峰形优化由于埃索美拉唑为弱碱性化合物,所以在当前色谱条件下,埃索美拉唑的色谱峰明显拖尾,对称因子差。提高流动相碱性可以使碱性化合物的解离完全被抑制,从而使峰形得到改善,但是碱性条件下色谱柱的耐用性降低,使用寿命受到显著影响。为了解决这一问题,我们在配制样品溶液时加入少量p H为11的强碱性醋酸铵缓冲液,加强了局部碱性。结果证明进样后峰形得到了明显改善,对称性良好。

［1］ Cotton H,Elebring T,Larsson M,et al.Asymmetric synthesis of Esomeprazole［J］.Tetrahedron：Asymmetry, 2000,11(18)：3819-3825.

［2］ Thitiphuree S,Talley NJ.Esomeprazole,a new proton pump inhibitor：pharmacological characteristics and clinical efficacy［J］.Int J Clin Pract,2000,54(8)：537-541.

［3］ Tonini M,Vigneri S,Savarino V,et al.Clinical pharmacology and safety profile of esomeprazole,the first enantiomerically pure proton pump inhibitor［J］.Digest Liver Dis,2001,33(7)：600-606.

［4］ Vakil NB,Shaker R,Johnson DA,et al.The new proton pump inhibitor esomeprazole is effective as a maintenance therapy in GERD patients with healed erosive oesophagitis：a 6-month,randomized,double-blind, placebo-controlled study of efficacy and safety［J］. Aliment Pharmacol Ther,2001,15(7)：927-935.

［5］ Johnson DA,Orr WC,Crawley JA,et al.Effect of esomeprazole on nighttime heartburn and sleep quality in patients with GERD：a randomized,placebo-controlled trial［J］.Am J Gastroenterol,2005,100(9)：1914-1922.

［6］ Önal A,Öztunc A.Development and validation of HPLC method for the determination of esomeprazole in tablets［J］.J Food Drug Anal,2006,14(1)：12-18.

［7］ Reddy PS,Sait S,Vasudevmurthy G,et al.Stability indicating simultaneous estimation of assay method for naproxen and esomeprazole in pharmaceutical formulations by RP-HPLC［J］.Der Pharma Chemica, 2011,3(6)：553-564.

［8］ DellaGreca M,Iesce MR,Previtera L,et al.Degradation of lansoprazole and omeprazole in the aquatic environment［J］.Chemosphere,2006,63(7)：1087-1093.

Content determination of esomeprazole in bulk drug by Hp LC

DONG Qi-xin1,ZHU Jia-jun1,YU Yun-qiu1△,TANG Chao2,SUI Qiang2
(1Department of Pharmaceutical Analysis,School of Pharmacy,Fudan University,Shanghai 201203,China；
2Department of Chemistry,Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry,Shanghai 200083,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of esomeprazole in bulk drug.MethodsHPLC was applied to determine the test drug with Waters XTerraⒸMS C8column (150 mm×4.6 mm,3.5μm).The mobile phase was V(acetonitrile)：V(20 mmol/L,ammonium acetate,p H 7.6)=28：72,the measurement wavelength was 280 nm,the column temperature was 25℃and flow rate was 1 m L/min.ResultsThe linear range was 0.01-0.07 mg/m L(r= 0.9996).The method recovery rate and RSD was 98.49%-101.72%and 0.15%-0.58%, respectively.ConclusionsThis method is simple,fast,and can be accurately used for the determination of esomeprazole in bulk drug.Therefore,it can be used as an effective quality control method for esomeprazole bulk drug.

esomeprazole； bulk drug； HPLC； content determination

R 917

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2014.01.021

2013-01-31；编辑：王蔚)

△Corresponding author E-mail：yqyu@shmu.edu.cn