赤首乌与白首乌的HPLC指纹图谱鉴定

易远红

（四川省成都中医药大学附属医院，四川成都 610072）

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赤首乌与白首乌的HPLC指纹图谱鉴定

易远红

（四川省成都中医药大学附属医院，四川成都 610072）

【摘要】目的分析研究白首乌和赤首乌的HPLC指纹图谱的鉴定方法。方法采取DAD（RP-HPLC）方法，对赤首乌和白首乌进行测定和对比分析。结果何首乌的各个样品指纹图谱相似，白首乌的指纹图谱有一定区别，两者加工之前和以后也有不同。结论对赤首乌和白首乌可以采取HPLC指纹图谱鉴定。

【关键词】指纹图谱；HPLC；赤首乌；白首乌

根据相关报道表明[1]，何首乌一共分为两种，其中包括赤首乌和白首乌。其具有益气、延年益寿以及滋补肝肾等功效，属于一种常用中药。本文笔者采取HPLC方法对白首乌和赤首乌的指纹图谱给予分析研究，现将具体情况报告如下。

1　材料

何首乌采自河南、广东、四川、广西等地方或者为市场销售品种，一共分为十份样品，经过本文作者鉴定全部为蓼科植物何首乌当中的块根。制作何首乌来自安徽，经过鉴定属于其加工产品。白首乌采取河北以及山东等相关地方。何首乌粉来自市场销售产品，来自长沙博健生物科技有限公司，生产许可证编号QS：430114020021。

2　炮制加工方法和结果

2.1色谱条件

色谱柱：安捷伦zorbax extend-c18分析柱（250毫米×4.6毫米，5μm）。流动相：A（水）和B（乙腈）梯度洗脱，其条件0分钟→60分钟，水（%）97-0，乙腈（%）2-100,60分钟→80分钟，水（%）0-0，乙腈（%）100→100。体积流量：每分钟一毫升。色谱柱温度：25°C。检测波长：210纳米。参比波长：360纳米。分析时间为80分钟。进样量为20μL。

2.2供试品制备

采取药材粗粉5克，置入烧瓶当中，加入酒精100毫升，采取水浴加热回流，一共提取三次，同时联合滤液，把其浓缩到小体积，采取氯仿40毫升，并提炼两次，将提炼液合并，采取无水硫酸钠脱水，滤过，滤过液一直浓缩到合适体积，蒸干，剩余残渣加入异丙醇进行溶解，一定要溶解到25毫升容量瓶当中。采取滤膜（微孔）进行过滤，其过滤液当做供试品[2]。

2.3对照品制备

对照物品采取大黄素，其一定要适量，加入甲醇，制作成为溶液，每毫升为20μg。

2.4方法学

采取广东产出得何首乌药材当做样品，对其仪器精密度、稳定性以及实验方法重现性进行考察，实验结果显示，稳定性和重现性明显；（1）稳定性实验：采取相同溶液（供试品），分别在0h、2h、4h、7h、11h、16h、22h、29h、36h给予检测，对色谱峰保留时间是否一致进行考察，各个色谱峰的时间RSD为0.2%-2.9%；（2）精密度实验：采取相同溶液（供试品），一共进样五次，对色谱峰保留时间是否一致进行考察，各个色谱峰的时间RSD全部在3%以下；（3）重现性实验：采取相同溶液（供试品），一共五分，采取同一方法进行检测，对色谱峰保留时间是否一致进行考察，以tR为36.2分钟的大黄素峰当做对照组，各个色谱峰的时间RSD全部在3%以下。对叠加色谱图进行观察，这样能够对峰位明显重合进行判断[3]。

2.5建立指纹图谱

将两种实验品溶液分别吸取20μL，注入HPLC，按照选择好的色谱条件给予检测，具体情况见图1。

2.6指纹图谱分析

2.6.1共同拥有指纹峰标定经过和对照品进行对照组，何首乌标定九个共同拥有峰当做其特征峰，炮制何首乌标定五个共同拥有指纹特征峰。和对照品峰当中的五号峰作对比，其当中的八个共同拥有指纹峰相对应的保留时间包括栽培品：0.118、0.642、0.732、0.928、1.152、1.487、1.521以及2.079，野生品：0.102、0.715、0.854、0.906、1.125、1469、1.516以及2.028。炮制何首乌其他四个共同拥有指纹峰相对应的保留时间包括:0.852、1.137、1.484以及2.039。白首乌的色谱图标定八个共同拥有指纹特征峰，以供试品当中保留时间在38分钟的共同拥有指纹峰当做参照，和三号峰相对比，其余七个共同拥有指纹峰相对应的保留时间包括：0.100、0.338、1.065、1.231、1.276、1.389以及1.779；

图1　赤首乌和白首乌高效液相色谱仪指纹图谱

2.6.2其相似程度评价把十个批次样品测试数据放到中药指纹图谱相似度计算软件，通过选峰，并设置模板（匹配），把谱峰自主匹配。之后根据设置好的模板，对其差异和相似给予评价。两种何首乌指纹图谱对比：根据各个指纹图谱当中，能够发现，两种何首乌指纹图谱存在差异，其特征峰部位、数目以及积分值都有明显不同，何首乌当中存在大黄素，然而白首乌无大黄素。

3　讨论

在优化色谱条件期间，第一是对何首乌的色谱图进行考察，之后对白首乌色谱峰分离情况进行分析。通过实验对比，以乙腈和水当做流动相，根据以上数据实施梯度洗脱，可以将其当中的各个色谱峰进行分离，同时出峰非常多。然而采取DAD对波长进行考察，同时对不是同一波长的色谱图进行对比，实验结果在230纳米之下，何首乌色谱图当中的峰非常多，信息也相对较多，因此，采取230纳米当做对波长的检测标准。

本文结果显示，何首乌当中不同样品的指纹图谱相似度明显，然而其和白首乌指纹图谱有较大差异，炮制何首乌之前和以后，白首乌加工之前和以后的指纹图谱有明显区别。其显示的区别，通常是因为其采取炮制以后联合型蒽醌量下降，然而游离型蒽醌量增多。另外，白首乌在加工期间，C21甾苷类流失较多造成的。因此，可以表明对赤首乌和白首乌可以采取HPLC指纹图谱鉴定，并操作非常简便，重现性和特征性良好。

参考文献

［1］刘训红,陈斌,蔡宝昌,王玉玺.赤首乌和白首乌的HPLC指纹图谱鉴定研究[J].中草药，2011,36（11）：1705.

［2］刘旭.不同产地首乌药材HPLC指纹图谱的研究[J].中华医药杂志，2011,34（2）：153.

［3］何文斐，李士敏.中药色谱指纹图谱的研究进展[J].时珍国医国药，2013，14（4）：238.

作者简介：易远红，1973年生，男，本科学历，主要从事医院相关中药学等工作。