耳穴按压对大鼠精神性疲劳影响的实验研究*

丁婷婷，袁 红，李思诺，梁 田，张 茜，肖 响

(北京中医药大学，北京100029)

持续的脑力劳动、睡眠不足或某些身心疾病均可诱发精神疲劳，又称心理疲劳［1］。由于疲劳与精神活动密切相关，因此中枢神经系统是疲劳研究的主要对象，如疲劳后脑内神经递质水平的变化及调控脑内神经递质来延缓疲劳的发生［2］、连续驾驶后驾驶员疲劳评价［3］及中医证模型［4］等。睡眠质量的下降和睡眠不足是临床慢性疲劳症患者的主诉，因此睡眠剥夺(sleep deprivation，SD)是建立疲劳模型的主要方法之一。在长途运输等作业条件下，睡眠剥夺现象会经常发生，驾驶人员的身心健康会受到很大影响，产生诸多问题，严重的会导致免疫力下降及脑功能受损。同时精神疲劳驾驶是恶性交通事故的重要诱发因素，特别是在交通及航天领域约20%～30%的事故来源于此［5］。因此，如何缓解驾驶精神疲劳，对于改善精神状态、保障交通安全具有重要的社会意义。

耳穴压丸法是在中医理论指导下安全有效的自然疗法。本实验以耳部的“全息理论”和经络脏－腑相关性作为突破口，将课题主要对象设定为精神疲劳造模的大鼠，通过对其双耳“心”、“皮质下”耳穴的压迫刺激［6－8］，探究耳穴刺激对精神性疲劳的缓解作用。

1 材料

1．1 实验动物

清洁级150 g雄性Wistar大鼠60只(生产许可号:SCXK京2011－0004)，购自斯贝福(北京)实验动物科技有限公司。

1．2 睡眠剥夺箱的制备［9－10］

睡眠剥夺箱是51 cm×36 cm×20 cm的大鼠箱，其中放置一个小平台(d=6．5 cm)或一个大平台(d=15 cm)，平台周围注3 cm的水，形成水环境，平台露出水面以上1 cm，在平台上方16 cm处放置笼罩，笼罩以平行的不锈钢丝制成，上面可以提供水和食物。水温与室温保持一致，并且每日换水、打扫睡眠剥夺箱。

1．3 实验器材

可调温游泳箱;YLS－1A多功能大鼠自主活动记录仪(山东省医学科学院设备站)。

2 方法

2．1 动物分组

清洁级150 g雄性Wistar大鼠60只。大鼠适应性喂养7天后，随机(随机数字表)平均分成4组，每组15只，分别为空白组(A组):不给予任何处理，只是同步饲养;单纯抓取组(B组):不进行睡眠剥夺，抓取时间与治疗组相同但不刺激耳穴;模型组(C组):进行睡眠剥夺，不进行耳穴按压，其余与耳穴按压组相同;耳穴按压组(D组):进行睡眠剥夺，给予双耳“心”、“皮质下”耳穴按压刺激。在实验过程中保证动物可以自由进食饮水，室温控制在25℃，提供12 h光照/12 h黑暗的环境(光照时间为7:00～19:00)［11］。

2．2 大鼠精神疲劳模型的建立及干预

在适应性饲养7天后进行睡眠剥夺，大鼠精神疲劳的模型采用改良后的小站台水环境法(flowerpot)［12］。将模型组大鼠、耳穴按压组大鼠分别放入睡眠剥夺箱内的小平台(d=6．5 cm)上，每箱装1只大鼠。小平台上的大鼠不能舒展身躯，但进食和饮水不受影响，还可进行简单的动作如转头、舔毛等，可以小憩，但如果大鼠进入快速动眼睡眠时期，由于全身的肌张力降低、肌肉的松弛和节律性垂头，大鼠会落水突然惊醒，因为大鼠惧水，不会在水中长留而重回小站台，重复之前的动作站立，如此实现持续睡眠剥夺72 h。空白组大鼠、单纯抓取组大鼠放入睡眠剥夺箱内的大平台(d=15 cm)上，大鼠在大平台上可以睡眠而不会落入水中，其它环境与模型组相同，但大平台直径大，可保持完整的睡眠周期，并可排除隔离、限制活动和水环境造成的应激影响。大鼠在睡眠剥夺期间可自由进食饮水，室内照明控制在12 h/12 h的明暗周期。72 h睡眠剥夺结束后，耳穴按压组进行耳穴按压干预(2006年中国针灸学会耳穴、腧穴专业委员会全国学术研讨会上华兴邦指出动物模型可在耳廓上出现阳性反应点，但是阳性反应点不是点状而是片状、小区，因此耳穴按压组的刺激方式为耳穴区域按压)，单纯抓取组只给予抓取刺激，模型组除造模外不进行耳穴干预，空白组不给予任何干预。

2．3 测定指标及方法

干预结束后检测各组大鼠的自发活动度(大鼠在自主活动箱中经过5 min的适应期后，以运动测量法测量大鼠3 min爬格数、3 min探身数)及负重游泳时间［5］。负重游泳以“大鼠游泳协调性显著性下降、身体下沉、水淹没鼻尖至再次浮出水面超过10秒”作为力竭判断标准［13］。

2．4 统计学处理

采用SPSS软件完成数据的独立样本T检验以及单因素方差的分析，采用LSD检验进行组间比较。

3 结果

各组大鼠旷场实验测定结果比较见表1;各组大鼠游泳时间测定结果比较见表2。与空白组对照比较，模型组的爬格数和探身数均显著减少(P＜0．05)，负重游泳时间显著缩短(P＜0．05)，表明建模成功;与空白组对照比较单纯抓取组的爬格数和探身数均无显著增多或减少(P＞0．05)，负重游泳时间无显著延长或缩短(P＞0．05)，因此可排除抓取对本次实验大鼠精神性疲劳产生影响这一混杂因素;与模型组对照比较，耳穴按压组的爬格数和探身数均显著增多(P＜0.05)，耳穴按压组的负重游泳时间显著延长(P＜0.05)，表明按压耳穴可显著改善大鼠精神性疲劳。

表1 各组大鼠旷场实验测定结果比较(±s)

表1 各组大鼠旷场实验测定结果比较(±s)

注:与 A 组比较，b1 P=0．95 ＞0．05，b2P=0．95 ＞0．05，c1 P=0．00 ＜0．05，c2 P=0．001 ＜0．05;与 C 组比较，d1 P=0．00 ＜0．05，d2 P=0．00 ＜0．05。

组别 例数(只) 爬格数(个) 探身数(次)A组15 51．93 ±21．83 14．40 ±6．21 B 组 15 51．40 ±20．72b1 14．27 ±6．1b2 C 组 15 27．60 ±8．08c1 8．40 ±3．98c2 D 组 15 52．36 ±16．66d1 16．43 ±2．95d2

表2 各组大鼠游泳时间测定结果比较(±s)

表2 各组大鼠游泳时间测定结果比较(±s)

注:与A组比较，c3P=0．00＜0．05;与C 组比较，d3P=0.00 ＜0．05。

组别 例数(只) 游泳时间(min)A组15 7．85 ±1．97 B 组 15 7．83 ±1．83b3 C 组 15 4．50 ±1．28c3 D 组 15 8．86 ±2．18d3

4 讨论

旷场实验是测评动物情绪兴奋性和探究活动的传统方法，主要反映动物对新环境的探索、适应性以及伴随的情绪变化［14］。本实验中观察到，与空白组对照比较，模型组的爬格数和探身数均显著减少(P＜0．05)，负重游泳时间显著缩短(P＜0.05)，这说明本实验采用72 h睡眠剥夺法后，模型组大鼠兴奋性明显减弱，与文献报道［15］一致，表明建模成功。

针灸是中国传统中医药学的重要组成部分，耳穴诊治法是针灸学微针体系中的一种，早在2000多年前，《黄帝内经》中就记载了许多以耳诊治疗疾病的经验和理论，如耳与经络、脏腑的关系，望耳诊断疾病，耳背放血治疗抽搐等。耳穴的研究在国外也备受关注。1956年，法国学者PaulNogier提出了42个耳穴点和形如倒置胚胎的耳穴分布图［16］成为了国际范围的焦点此后，我国学者不仅整理和发掘古代文献，同时吸收国外先进的研究成果，组织并开展了大量临床研究和探索，众多未被报道过的耳穴有效点和区域被发现，同时耳廓分区和穴位定位的研究也同时大规模展开［17］。随着时间的推移，耳穴的研究日益繁荣，成果更加突出，耳穴的功效也被越来越多的医学工作者肯定，现代对耳穴疗效的原理研究也颇多，主要有全息胚学说和生物全息律的耳廓的穴位分布的3个规律(耳廓穴位分布全息律、耳廓经络全息律及耳廓对称全息律［18］)，详尽的阐释了耳穴的分布与功效的对应关系。

通过本实验发现，耳穴“心”、“皮质下”对神经衰弱患者有良好疗效，按压耳穴可缓解大鼠由于长时间疲劳兴奋性差的问题，显著改善精神疲劳。

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