输血前不规则抗体筛查与直接抗人球蛋白试验的意义

曾学平

(海口市解放军第187医院输血科，海口 571159)

现今输血技术大大提高了输血的临床疗效，血液的配合型输注不单单指ABO血型系统的相互配合，同时还包括Rh多种少见血型系统的配合，通过血型鉴定可大大降低速发型溶血反应的概率。不规则抗体是指血清中除抗-A、抗-B抗体外其他血型的抗体，引起溶血性输血反应，溶血较轻时会导致患者出现发热、寒战症状，降低临床治疗效果，严重时甚至危机到患者的生命安全。直接抗人球蛋白试验(direct antiglobulin test，DAT)阳性表明人体内的红细胞受到不完全抗体致敏，导致交叉配血过程出现凝集反应，给配血带来困难。最近几年，国外已经广泛应用微柱凝胶技术。本研究对收治的住院后需要输血患者的临床资料进行分析，对其运用微柱凝胶法对DAT及不规则抗体进行筛查，同时对阳性患者的血液抗体特异性进行鉴定。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择海口市解放军第187医院于2010年4月至2013年1月收治的住院后需要输血的患者3454例，其中男2014例、女1440例，年龄1～88(54.2±6.3)岁。其中1022例有输血史，2432例无输血史；女性患者中235例有妊娠史，1205例无妊娠史；运用微柱凝胶法对患者的DAT及不规则抗体进行筛查，同时对阳性患者的血液抗体特异性进行鉴定。

1.2仪器与试剂 仪器主要包括专用卡式离心机、37 ℃孵育箱、微柱凝胶抗人球蛋白检测卡等，均由长春博讯生物技术有限公司提供。检测不规则抗体的试剂为人红细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，主要包括C，c，D，E，M，N，e，s，PL，Lea，Leb，k，Jka，Jkb，Fya，Fyb共16种抗原。

1.3方法

1.3.1不完全抗体的鉴定与筛查 将微柱凝胶抗人球蛋白检测卡取出，标记上Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，将患者50 μL的血清样本加入孔中，再分别将0.8%的检测细胞(50μL)加入其内，保持温度恒定在37 ℃，经过15 min的孵育，在离心机的离心半径26 cm条件下,900 r/min持续2 min、1500 r/min持续3 min离心约5 min观察结果，检测的细胞如未出现凝集现象即为阴性，如出现凝集即为阳性结果，进而再用谱细胞鉴定不完全抗体的特异性，操作时严格按照说明书及参考文献执行。

1.3.2DAT定性 将50 μL浓度为0.5%～0.8%的待检红细胞悬液加入到微柱凝胶抗人球蛋白检测卡(抗IG+C3d)中，立刻在离心半径24 cm条件下，900 r/min持续2 min、1500 r/min持续3 min共离心约5 min，对结果进行观察，DAT阳性结果运用抗IgG+C3d、抗C3d及抗IgG试剂进行分型。

2 结 果

3454例患者中共检测出6例为不规则抗体，阳性率为0.17%，其中2例为抗-E、1例为抗-C、1例为抗-c1、1例为抗-s1、1例为抗-Jka，且有输血史较无输血史者不规则抗体检出率高(P<0.01)，女性有妊娠史者较女性无妊娠史者不规则抗体检出率高(P<0.01)；35例为DAT阳性，阳性率为1.01%，其中18例为IgG型抗体、7例为C3型抗体、10例为IgG+C3型抗体,且有输血史较无输血史者DAT阳性率高(P<0.01)，女性有妊娠史者较女性无妊娠史者DAT阳性率高(P<0.01)(表1)。

表1 3454例需输血患者DAT及不规则抗体筛选的结果 [例(%)]

3 讨 论

随着社会的发展，医疗技术水平的不断进步，以及医院实施的各种节约用血措施的实施，同样的手术需要输血的可能性越来越小，需血量也在逐渐降低，虽然如此，但是用血的不确定性在逐渐升高，因而对于医院来说，手术通知单下达的备血数量只是一个参考值，并不是提前根据通知单上的要求备好血液，进行交叉配血实验主要是在术中随机应变，但是速度要求快，这样可以确保手术的顺利实施[1]。但是，特殊情况时会遇到不规则抗体导致的配血不和现象，短时间内很难找到适合的血液，这样会对临床用血造成困扰，耽误患者的最佳治疗时间，严重者甚至危及到患者的生命安全，因此要在输血前的1～2 d对患者的血清中的不规则抗体进行筛选，以保证出现紧急情况时可迅速输注血液。

输血在临床的治疗过程中占据着重要的位置，输血的安全性已经受到社会的广泛关注。虽然大多数人不存在不规则抗体，但是其为导致溶血性输血反应及迟发性免疫反应的主要原因，美国食品药品管理局对由于输血导致死亡的患者进行报道时指出，死亡患者中约55.5%是由于溶血性输血反应导致的，然而其中的14%是由于不完全抗体导致的[2]。本研究结果显示，3454例患者中共检测出6例为不规则抗体，阳性率为0.17%，与徐继勋[3]报道的有妊娠史或者输血史的数值比较偏低，与戴芳等[4]报道的基本一致。本研究中6例不规则抗体阳性的患者都有过妊娠史及输血史，表明不规则抗体表现为阳性主要与患者的妊娠史及输血史有关，也说明输血或者妊娠过程中的免疫刺激导致不规则抗体的出现，因而对于曾有过妊娠史及输血史的患者要特别注意筛查不规则抗体。

本文研究的结果可以看出其中6例患者为不规则抗体，具体有抗-E、抗-C、抗-c1、抗-s1、抗-JKa，35例为DAT阳性，阳性率为1.01%，其中包括三型抗体，分别为IgG型抗体、C3型抗体、IgG+C3型抗体。不规则抗体有输血史较无输血史者不规则抗体检出率高，女性有妊娠史者较女性无妊娠史者不规则抗体检出率高；35例为DAT阳性，有输血史较无输血史者DAT阳性率高；女性有妊娠史者较女性无妊娠史者DAT阳性率高。

本研究对6例不完全抗体阳性的样本进行了特异性抗体鉴定，经过分析得出，不规则抗体多数为Rh血型系统，主要以除抗-D以外的抗体为主，如抗-C、抗-E等不规则抗体的检出率相对较高，大多数医院以将D抗原作为输血前的常规检查，防止进行输血过程中D抗原导致免疫反应，因此抗-D产生有所降低，而没有对Rh(C，c，E，e)的检测进行定性要求，抗-E、抗-C等已经成为现今妊娠后及多次输血后常见的抗体类型[5-6]。由此可见，输血前要常规对不规则抗体进行筛查，当抗体筛查出现阳性反应时，要对抗体的特异性类型进行确定，选择输注相应抗原阴性的红细胞，防止出现溶血性输血反应，以此来保证患者的输血安全性。

DAT是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要依据，但是引起患者红细胞DAT阳性的因素很多，如溶血性贫血、药物因素、慢性肝炎、自身免疫性疾病以及癌症等[7]。DAT阳性可导致微柱凝胶法交叉配血主侧、次侧同时凝集，也可以出现次侧凝集的现象，引起配血有一定难度[8]。运用吸收试验将患者血清中的自身抗体清除，再运用这个血清进行主侧交叉配血试验，对患者的红细胞做放散试验，将放散掉的自身抗体红细胞进行交叉配血次侧试验，如果将干扰因素排除，交叉配血试验相合，就可以进行输血，避免由于输血不相合的血液导致溶血性输血反应。

综上所述，进行输血前要对DAT及不规则抗体进行筛查，特别是有妊娠史及输血史的患者，这样可以确保临床输血的安全性，同时降低出现溶血反应的概率，具有重要的临床意义。

[1] 沈柏涛,谢一唯,陈秉宇.反复输血的受血者不完全抗体和直接抗人球蛋白试验阳性率的研究[J].中国卫生检验杂志，2012，12(6)：662-663.

[2] 赵莉.不规则抗体筛查在预防溶血性输血反应中的作用[J].国际检验医学杂志,2011,5(20):2339-2340.

[3] 徐继勋.输血前不规则抗体筛查与临床安全输血[J].临床血液学杂志：输血与检验版，2010，26(4)：464-466.

[4] 戴芳,李建武.微柱凝胶法在不规则抗体筛检中的应用[J].中国医药科学,2011，3(10)：81-82.

[5] 邓丽敏,周丽梅.尿毒症患者反复输血对交叉配血的影响[J].中国社区医师：医学专业,2010,22(32)：75-76.

[6] 刘宏,李静,李存刚.输血前检测不规则抗体的必要性[J].医学信息(内·外科版),2009,31(10):721-722.

[7] 蒋丽华,韦海春,黎海澜.妇幼医院开展不规则抗体筛查的价值和意义[J].现代中西医结合杂志,2010,10(16):84-85.

[8] 严根兴,查荣宝,周建华,等.微柱凝胶技术筛检不规则抗体的临床应用与分析[J].中国卫生检验杂志,2009,36(4):91-93.