广痛消泡沫气雾剂对大鼠肛门水肿的作用

张 媛，赵宝明

广痛消泡沫气雾剂对大鼠肛门水肿的作用

张 媛1，赵宝明2

目的：观察大鼠肛门水肿组织病理改变和广痛消泡沫气雾剂的干预作用。方法：SD大鼠用0.16 mL巴豆油混合液致肛门肿胀，治疗组肛门内给予广痛消泡沫气雾剂，分别于给药后24 h、48 h、72 h全部处死，取肛周组织进行染色处理，显微观察空白组、模型组、治疗组及对照组病理改变。结果：空白组直肠黏膜正常；模型组直肠黏膜呈急性炎症改变；治疗组随着给药天数的增加，黏膜层溃疡逐渐好转，黏膜下层充血、水肿明显改善，血管充血、扩张消失,对照组炎症改变不明显。结论：巴豆油注射可致SD大鼠肛门水肿炎性改变；广痛消泡沫气雾剂对大鼠肛门肿胀具有抗炎、消肿的作用。

广痛消泡沫气雾剂；巴豆油；大鼠水肿；病理改变

广痛消泡沫气雾剂是一种中药新剂型，该药主要由延胡索、厚朴、黄柏等八味药组成，具有止痛、消肿、活血、行气、祛瘀等功效。目前，该药经过不断改进，止痛、止血、促愈合等作用已得到实验证实[1-2]。本研究旨在验证广痛消泡沫气雾剂抗炎消肿作用。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级SD大鼠64只，6周龄，雌雄各半，(180±20)g。中国医学科学院动物中心提供（许可证编号SCXK京2007-004）。适应性喂养3 d。环境温度（20±2）℃，相对湿度20%～30%。

1.2 试剂及药物 巴豆油，梯希爱（上海）化成工业发展有限公司；乙醚，北京化工厂；吡啶，国药集团化学试剂北京有限公司；水合氯醛，国药集团化学试剂北京有限公司；广痛消泡沫气雾剂由北京中医药大学药学院制备，贵州宏守药业有限公司灌装（20120406），每毫升含生药1.3822 g。主要成分包括延胡索、厚朴、白芍、黄柏等。橄榄油：广州屈臣氏个人用品商店有限公司。6%巴豆油：巴豆油0.48 mL，橄榄油7.53 mL。巴豆油混合液：蒸馏水0.8 mL，吡啶3.2 mL，乙醚4 mL，6%巴豆油8 mL。固定液：4%多聚甲醛，0.1 mol/L磷酸缓冲液。

1.3 方法

1.3.1 分组 64只大鼠按随机数字表随机分为空白组、模型组、实验1组、实验2组、实验3组。实验1组按随机数字表法分为治疗1组和对照1组，实验2组分别是治疗2组和对照2组，实验3组分别是治疗3组和对照3组，每组8只。

1.3.2 模型制作 空白组大鼠未处理。模型组和实验组均用浸吸0.16 mL巴豆油混合液的棉球插入麻醉后的大鼠肛门内，将大鼠头朝上提起直立，10 s后拔出。6 h后，将空白组和模型组处死取肛周组织。1.3.3 实验组给药 治疗各组于造模后6 h给予广痛消中剂量组（约0.165 mL广痛消泡沫气雾剂原液,含1.154 g生药/kg，相当于临床给药量的6倍）。对照组给予0.9%氯化钠注射液0.165 mL。注入大鼠肛门后，向肛内塞入棉签（棉签顶部以柔软的塑料包裹），将大鼠头朝上提起直立，1 min后拔出棉签。此后各组每6 h给药1次，分别于给药后第24 h、48 h、72 h同一时间处死。

1.3.4 观察指标 分别于造模后、每日给药前将各组大鼠固定于手术台上，充分暴露肛门，并放置坐标纸，用佳能数码相机拍摄受试大鼠肛门肿胀部位照片。将图片输入计算机用Photoshop软件测量肿胀面积，并以肿胀面积抑制率评价肿胀面积消退情况；测量R通道值，对比颜色变化情况(R通道值是Photoshop软件测量的一种指标，表示测量区域红色深浅程度，R通道值越大，红色越浅，反之则越深)。肿胀面积抑制率越大，表明肿胀消退越快。充血抑制率越大，表明肿胀部位充血症状改善越好，充血症状消除越明显。

肿胀面积=肿胀区像素/框选区方格像素×框选区面积。

肿胀面积抑制率=[给药前(造模后)的肿胀面积-给药后的肿胀面积]/给药前(造模后)的肿胀面积× 100%。

充血抑制率=[给药后的R通道值-给药前(造模后)的R通道值]/给药前(造模后)的R通道值× 100%。

1.3.5 取材及染色 以棉签插入肛门内指引，沿肛周0.5 cm环形分离肛门，深至直肠上1.5～2 cm，剪断肠管后放入固定液中。固定24 h，常规石蜡包埋。靠近肛门处取病理标本5μm厚纵行连续切片5张，常规HE染色处理。

1.4 统计分析 所有数据均采用SPSS 18.0统计软件进行分析，计量资料以(±s)表示，满足方差齐性，采用t检验；不满足方差齐性，采用t'检验或非参数检验；组组之间比较，方差齐用ANOVA检验，方差不齐采用Welch近似方差分析。

2 结果

2.1 形态改变 空白组肛门无回缩，无水肿等异常情况（图1A、B）；模型组可见肛门周围红肿，附着少量分泌物，未见明显出血点及溃疡、糜烂等(图1C、D)。

图1 形态学改变

2.2 实验各组形态改变 对照组各组肛周红肿情况明显，治疗组给予广痛消泡沫气雾剂后，各组红肿范围、程度均有缓解。见表1。

表1 实验各组肛周形态改变

2.3 实验各组肿胀面积抑制率和充血抑制率比较治疗组肿胀面积抑制率均大于对照组，且P＜0.05，差异具有统计学意义，提示广痛消对大鼠肛门水肿模型有降低肿胀面积的作用。治疗组充血抑制率均大于对照组，且P＜0.05，差异具有统计学意义，说明各治疗组肿胀消退程度好于对照组，广痛消泡沫气雾剂能够减轻肛门水肿、充血的症状。治疗组各组之间肿胀面积抑制率及充血抑制率两两比较，P＜0.05差异具有统计学意义，提示广痛消泡沫气雾剂的消肿作用随时间而改变。治疗组肿胀面积抑制率随时间的延长，肿胀面积抑制率逐渐增大，提示消肿作用起效快，对照组增加速度缓慢；治疗组充血抑制率增加迅速，提示充血症状改善明显，对照组增加缓慢。见表2。

表2 实验各组肿胀面积抑制率及充血抑制率比较(±s)

表2 实验各组肿胀面积抑制率及充血抑制率比较(±s)

注：肿胀面积抑制率方面，与实验1组治疗组比较，aP＜0.05；充血抑制率方面，与实验1组治疗组比较，bP＜0.05

分组肿胀面积抑制率治疗组（n=8）对照组（n=8）充血抑制率治疗组（n=8）对照组（n=8）实验1组实验2组实验3组23.98±6.57 42.43±9.96a68.97±15.02a25.84±8.95a31.20±5.75 33.32±10.16 6.35±5.18 22.64±5.92b35.70±9.60b10.49±8.42b12.65±7.88 15.91±6.44

2.4 组织学观察 空白组肠黏膜上皮及腺体排列紧密，黏膜褶皱存在，黏膜下层未见水肿、充血等，肌层及浆膜层未见病变（图2A）。模型组肠黏膜呈急性炎症改变，上皮及腺体大量缺失，见散在溃疡及糜烂，黏膜下层充血、水肿，血管充血、扩张(图2B)。实验1组中治疗组肠黏膜腺体排列混乱，部分上皮缺失，散在糜烂、溃疡；粘膜下层可见水肿及血管扩张(图2C)。对照组黏膜层上皮及腺体破坏明显，部分缺失，散在糜烂、溃疡，黏膜下层水肿明显，血管充血、扩张（图2D）。实验2组中治疗组黏膜层腺体排列基本正常，部分上皮缺失，黏膜下层水肿、血管充血程度均较实验1组减轻（图2E）。对照组黏膜层上皮及腺体破坏明显，黏膜层基底部散可见溃疡、糜烂，黏膜下层水肿，血管充血明显；肌层及浆膜层未见病变（图2F）。实验3组中，治疗组较实验2组病变明显减轻，黏膜层上皮较完整，水肿程度较模型组明显减轻（图2G）。对照组黏膜层表面上皮及腺体糜烂、浅溃疡，部分缺失；粘膜下层水肿、血管充血；肌层及浆膜层未见病变（图2H）。

3 讨论

巴豆油致SD大鼠肛门肿胀的形态改变和病理切片观察，提示SD大鼠肛门肿胀模型符合急性炎症改变，与痔疮急性发作时炎性改变相似。但是否能成为痔疮模型还需进一步探讨，尤其是肛门部肌肉和血管的改变。巴豆油致SD大鼠肛门肿胀模型比肛周注射细菌、醋酸、角叉菜胶等，以及玻璃棒摩擦致肿胀等模型稳定，方法也较完善，容易拟造充分的造模条件，适合于药物的药效评价。

肿胀抑制率和充血抑制率：肖强等[3]通过数码相机和Photoshop软件测定树叶的面积，以此来判定植物是否受到病害或者昆虫等的迫害。从面积和颜色像素的改变来评价局部消肿的疗效，具有一定说服力。本实验中治疗组的肿胀面积抑制率及充血抑制率明显大于对照组，说明广痛消泡沫气雾剂对巴豆油致SD大鼠肛门肿胀具有一定的消肿作用；治疗组各组之间肿胀面积抑制率及充血抑制率两两比较，差异明显（P＜0.05），且肿胀抑制率及充血抑制率随着时间的增加而增大，说明广痛消泡沫气雾剂持续给药消肿功效更佳。

广痛消泡沫气雾剂中延胡索具有止痛、行气、活血之功效。延胡索乙素抗炎作用也得到证实，能够抑制细胞外信号调节激酶和p38蛋白激酶（MAPK）磷酸化，从而抑制炎症介质IL-8的分泌[4]。白芍中的主要有效成分芍药苷，具有显著的抗炎、免疫调节和保护内皮细胞的药理作用，已广泛应用于风湿免疫性疾病。厚朴酚可以影响白细胞功能，对炎性介质LTB4和5-HETE的生物合成有较强的抑制作用；还可以抑制趋化三肽刺激的白细胞内钙升高[5]。

图2 组织学改变

本研究结果表明，治疗组可见肛门近端黏膜上皮及腺体的显著改变，从造模后上皮和腺体的缺失到给药后逐渐完整，粘膜下层水肿、血管充血、扩张程度也较模型组明显减轻，提示广痛消泡沫气雾剂于巴豆油致SD大鼠肛门肿胀有抗炎、消肿、的作用。

[1]赵宝明，史兆岐，景建中.广痛消泡沫气雾剂对肛门直肠疾病止痛作用的临床研究[J].中医杂志，1998，39(7)：412-413.

[2]张志谦，赵宝明，张书信，等.广痛消泡沫气雾剂止痛促愈合的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2012，19(3)：33-35.

[3]肖强,叶文景，朱珠，等.利用数码相机和Photoshop软件非破坏性测定叶面积的简便方法[J].生态学杂志，2005，24（6）：711-714.

[4]鲁春梅，张春森，姜立勇，等.延胡索化学成分及药理作用研究进展[J].中国现代药物应用，2011,5（15）：126-127.

[5]李杰萍，梁统，周克元.厚朴酚对大鼠白细胞5-脂氧合酶活性和细胞内钙离子浓度的影响[J].广东医学院学报，2002，20（3）：177-178.

（收稿：2013-07-06 修回：2014-03-02）

（责任编辑 赵连根）

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Intervention Effects of Guangtongxiao(广痛消)Foam Aerosol on Anus Edema Model in Rats

ZHANG Yuan，ZHAO Bao-ming.Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing(100029),China

ObjectiveTo observe the pathological changes of edema in rat anus and the intervention effects of Guangtongxiao（广痛消）foam aerosol.MethodsSD rats were induced swelling of the anus by 0.16 mL croton mixture oil.The treatment group were given Guangtongxiao（广痛消）foam aerosols into the anus.All were killed after administration In the first three days respectively,taking perianal tissue staining process and microscopic pathologic changes observed in the blank group,model group,treatment group and the control group.ResultsThe rectal mucosa of the blank group was normal,of which the model group showed in acute inflammation.With increasing of drug delivery days,the ulcer of mucosa in the treatment group gradually improved,hyperemia and edema of the submucosa showed better,with less expansion of vascular congestion. The inflammatory changes of the control group were not obvious.ConclusionCroton oil injection can cause edema and inflammatory changes in SD rat anus;Guangtongxiao（广痛消）foam aerosol can lead to anti-inflammatory and antioncotic to anal swelling of rats.

Guangtongxiao（广痛消）foam aerosol；croton oil；anal edema in rats；pathological changes

Q95-33;R657.1+5

A

1007-6948(2014)02-0163-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2014.02.018

1.北京中医药大学（北京 100029）

2.北京中医药大学东直门医院肛肠科（北京 100700）

赵宝明，E-mail：zhaobaoming1961@126.com