人巨细胞病毒在冠心病患者中的免疫调节作用及其临床意义

宁观佳，陈漠水

人巨细胞病毒在冠心病患者中的免疫调节作用及其临床意义

宁观佳，陈漠水

目的：检测冠心病患者人巨细胞病毒（HCMV）感染情况，探讨HCMV感染对冠心病患者调节性T淋巴细胞的影响。

冠心病；人巨细胞病毒；调节性T淋巴细胞

(Chinese Circulation Journal, 2014,29:976.)

冠心病血管的基本病理改变是动脉粥样硬化，动脉内膜上堆积的粥样脂质斑块，可直接引起管腔狭窄，诱发局部血栓形成，最终导致心绞痛和心肌梗死临床症状的发生[1]。人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）即人疱疹病毒5型，近年来的研究显示HCMV感染可能参与了动脉粥样硬化的发生、发展过程[2]。本研究检测了冠心病患者HCMV的感染情况，探讨了HCMV感染对冠心病患者免疫功能的影响，以期阐明HCMV感染在动脉粥样硬化发生、发展过程中的可能作用机制。

1 资料和方法

1.1病例资料

收集2012-04至2014-05我院心血管内科诊治的冠心病患者86例为冠心病组，其中男43例，女43例，年龄56～75岁，平均(66.4±8.2)岁，心绞痛患者46例，心肌梗死患者40例。冠心病的诊断参照美国心脏病学会诊断标准[3]：并行冠状动脉计算机断层摄影术或冠状动脉造影确诊。排除标准：近期使用过免疫抑制剂者，伴发其他自身免疫性疾病者，伴发慢性炎症、恶性肿瘤者。另取本院健康体检者80例作为对照组，其中男性40例，女性40例，年龄53～74岁，平均年龄（65.7±8.4）岁。冠心病组和对照组性别、年龄差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2人巨细胞病毒感染的检测

HCMV检测使用酶联免疫吸附测定（ELISA）法，检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采集所有受试者静脉血2 ml，1 000 g离心15 min分离上层血清送检验科，按试剂盒说明操作，并判断阴性、阳性结果。

1.3调节性T淋巴细胞的流式细胞仪检测

外周血单个核细胞中调节性T淋巴细胞的比例使用流式细胞仪检测。采集所有受试者静脉血5 ml，加入红细胞裂解液（上海基因生物科技有限公司），1 000 g离心15 min，弃上清，PBS缓冲液洗涤沉渣2次，英国Abcom公司生产的FITC-CD4、PE-CD25特异性抗体染色细胞30 min，使用美国Beckman Coulter公司生产的流式细胞仪检测CD4+/ CD25+的T淋巴细胞。

1.4白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达的检测

白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α的表达检测使用ELISA法，检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，采集所有受试者静脉血2 ml，1 000 g 离心15 min分离上层血清送检验科，按试剂盒说明操作，并根据标准品计算出上述因子的表达水平。

1.5统计学分析

2 结果

2.1冠心病组和对照组人巨细胞病毒感染情况分析

冠心病组检出HCMV感染62例，阳性率为72.1%，对照组检出HCMV感染22例，阳性率为27.5%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。表1

2.2冠心病组和对照组调节性T淋巴细胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达水平的比较

冠心病组调节性T淋巴细胞比例和白介素-10表达水平显著低于对照组（P＜0.01），而白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达水平又显著高于对照组（P＜0.01），差异均有统计学意义。表1

2.3心绞痛和急性心肌梗死患者人巨细胞病毒感染情况分析

46例心绞痛患者中检出HCMV感染28例，阳性率为60.9%，40例急性心肌梗死患者中检出HCMV感染34例，阳性率为85.0%，两者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。表1

2.4心绞痛和急性心肌梗死患者外周血单个核细胞中调节性T淋巴细胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达水平的变化

急性心肌梗死患者调节性T淋巴细胞比例以及血清中白介素-10表达水平显著低于心绞痛患者（P＜0.01），而白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达水平急性心肌梗死患者又显著高于心绞痛患者（P＜0.01），差异均有统计学意义。表1

表1 两组患者人巨细胞病毒感染率、调节性T淋巴细胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达水平的比较

表1 两组患者人巨细胞病毒感染率、调节性T淋巴细胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达水平的比较

注：与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01；与心绞痛患者比较△P＜0.05 △△P＜0.01

肿瘤坏死因子-α (μg/ml)对照组 80 27.5（22） 6.38±1.42 27.84±4.23 9.12±2.12 16.42±2.57冠心病组 86 72.1（62）* 3.32±0.73** 16.54±3.84** 28.91±4.38** 36.34±6.05**心绞痛患者 46 60.9（28） 4.24±1.03 21.43±4.16 20.55±3.43 31.12±5.83急性心肌梗死患者 40 85.0（34）△ 2.06±0.52△△ 10.91±2.23△△ 36.58±5.72△△ 44.49±7.24△△组别 例数 人巨细胞病毒感染率[% (例)]调节性T淋巴细胞比例(%)白介素-10 (μg/ml)白介素-6 (μg/ml)

3 讨论

HCMV在自然界中存在潜伏性感染[4]，本研究在健康对照人群中检测到27.5%的感染率，流行病学统计显示人群HCMV感染率会随着年龄增长而增加[5]，而冠心病就是一个老年性疾病，二者都有随年龄增加而发病增加的趋势，这一结果提示了二者之间存在一定的相关联系[6]，本研究的检测显示冠心病患者的HCMV阳性检出率显著高于健康对照人群，而且在急性心肌梗死患者HCMV阳性检出率又显著高于心绞痛患者，上述结果提示了HCMV感染可能参与了冠心病的发生和病程进展。

国内外的研究显示HCMV感染可以启动动脉粥样硬化形成程序[7]，但其具体机制仍未明了。调节性T淋巴细胞是最近几年发现的CD4阳性T细胞亚群，在体内起到免疫抑制的作用[8]，已有研究观察到HCMV感染的患者会出现调节性T淋巴细胞的减低[9]，可能是病毒感染T细胞，抑制了T细胞的活化，本研究观察到了冠心病患者调节性T淋巴细胞较健康对照显著减低，急性心肌梗死患者调节性T淋巴细胞又显著低于心绞痛患者。调节性T淋巴细胞的体内效应因子是白介素-10，白介素-10可以抑制白介素-6和肿瘤坏死因子-α等炎性因子的表达，已知炎性因子是冠心病动脉粥样硬化病变的主要始动因子[10]，本研究也观察到了冠心病患者白介素-10表达的减低，并且急性心肌梗死患者较心绞痛患者减低的更显著，同时冠心病患者白介素-6和肿瘤坏死因子-α炎性因子较健康对照人群显著升高，急性心肌梗死患者较心绞痛患者升高的更加显著。上述结果提示HCMV感染抑制了T细胞向调节性T淋巴细胞的分化，打破了机体的免疫抑制平衡状态，从而诱发了高炎症状态，进一步导致了冠心病患者动脉血管病变的发生、发展。综上所述，本研究显示冠心病患者中HCMV检出率高，HCMV感染可能通过抑制调节性T淋巴细胞的产生参与了冠心病患者动脉粥样硬化病变的发生、发展过程，本研究提示控制HCMV感染有可能成为延缓冠心病患者动脉粥样硬化病变的新靶点，HCMV感染调控调节性T淋巴细胞的具体机制还有待进一步的研究来证实。

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Immunity of Human Cytomegalovirus in Patients of Coronary Artery Disease With its Clinical Efficacy

NING Guan-jia, CHEN Mo-shui.
Department of Cardiology, Haikou People’s Hospital, Haikou (570208), Hainan, China

NING Guan-jia, Email: ngjlsy@126.com.cn

Objective: To detect the infectious condition of human cytomegalovirus (HCMV) in coronary artery disease (CAD) patients and to explore the effect of HCMV infection on Treg cells in CAD patieuts.Methods: A total of 86 CAD patients treated in our hospital from 2012-04 to 2014-05 were studied. The patients were divided into 2 groups: Angina Pectoris (AP) group, n=46 and Acute myocardial infarction (AMI) group, n=40. In addition, there was a Control group with 80 healthy subjects. The Treg cell amount was detected by fl ow cytometry analysis, the expression levels of HCMV and IL-10, IL-6, TNF-α were examined by ELISA.Results: The positive rate of HCMV infection was higher in CAD group than that in Control group as 72.1% vs 27.5%, P＜0.05. The ratio of Treg cell and the levels of IL-10, IL-6, TNF-α expression in CAD group were (3.32 ± 0.73) % and (16.54 ± 3.84) μg/ml, (28.91 ± 4.38) μg/ml, (36.34 ± 6.05) μg/ml, while in Control group were (6.38 ± 1.42) % and (27.84 ± 4.23) μg/ml, (9.12 ± 2.12) μg/ml, (16.42 ± 2.57) μg/ml respectively, all P＜0.01. The positive rate of HCMV infection was higher in AMI group than that in AP group as 85.0% vs 60.9%, P＜0.05. The ratio of Treg cell and the levels of IL-10, IL-6, TNF-α expression in AP group were (4.24 ± 1.03) % and (21.43 ± 4.16) μg/ml, (20.55 ± 3.43) μg/ml, (31.12 ± 5.83) μg/ml, while in AMI group were (2.06 ± 0.52) % and (10.91 ± 2.23) μg/ml, (36.58 ± 5.72) μg/ml, (44.49 ± 7.24) μg/ml respectively, all P＜0.01.Conclusion: CAD patients had the higher positive rate of HCMV infection, which may inhibit Treg cell production and then, involved in CAD occurrence and development.

Coronary artery disease; Human cytomegalovirus; Treg cell

2014-07-14）

（编辑：漆利萍）

570208 海南省，海口市人民医院 心血管内科

宁观佳 主治医师 学士 主要从事冠心病临床研究 Email: ngjlsy@126.com.cn 通讯作者：宁观佳

R541

A

1000-3614（2014）12-0976-03

10.3969/j.issn.1000-3614.2014.12.005

方法：收集2012-04至2014-05我院心血管内科诊治的冠心病患者（冠心病组）86例，其中心绞痛患者46例，心肌梗死患者40例。另取我院健康体检者80例作为对照组。HCMV检测使用酶联免疫吸附测定（ELISA）法，调节性T淋巴细胞使用流式细胞仪检测，白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达的检测使用ELISA法。

结果：冠心病组HCMV阳性率为72.1%，显著高于对照组的27.5%（P＜0.05）。冠心病组调节性T淋巴细胞比例以及白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达水平分别为（3.32±0.73）%、（16.54±3.84）μg/ml、（28.91±4.38）μg/ml、（36.34±6.05）μg/ml，对照组分别为（6.38±1.42）%、（27.84±4.23）μg/ml、（9.12±2.12）μg/ml、（16.42±2.57）μg/ml，上述指标在两组间具有显著性差异（P＜0.01）。急性心肌梗死患者HCMV阳性率为85.0%，显著高于心绞痛患者的60.9%（P＜0.05）。心绞痛患者调节性T淋巴细胞比例以及白介素-10、白介素-6和肿瘤坏死因子-α表达水平分别为（4.24±1.03）%、（21.43±4.16）μg/ml、（20.55±3.43）μg/ml、（31.12±5.83）μg/ml，急性心肌梗死患者分别为（2.06±0.52）%、（10.91±2.23）μg/ml、（36.58±5.72）μg/ml、（44.49±7.24）μg/ml，上述指标在两组差异有统计学意义（P＜0.01）。

结论：冠心病患者中HCMV检出率高，HCMV感染可能通过免疫系统抑制调节性T淋巴细胞的产生，并参与了冠心病患者动脉粥样硬化病变的发生、发展过程。