麻桔喘咳口服液对大鼠实验性肺心病的影响

卢 云

(成都中医药大学附属医院，成都 610072)

慢性肺源性心脏病(简称肺心病)在我国是常见病、多发病，平均患病率为0.4%～0.47%。据估计，目前我国肺心病患病人数为550万，由于肺心病是原发于重症胸肺、肺血管基础疾病的晚期并发病，后期累及心、肺，并发症多而复杂、危重，住院病死率达15%左右。肺心病中81.8%的患者由慢性阻塞性肺疾病发展而来，随着近年来慢阻肺发病率的增加，肺心病发病率也呈上升趋势，严重影响了患者的生活质量[1]。自1993年以来我们在陈绍宏教授、张晓云教授带领下开展了中西医结合治疗肺心病急性期的研究，于2006年开始采用循证医学原则，按照《临床药品临床试验管理规范(GCP)》要求，进行前瞻性、多中心、随机对照临床研究，并研究了一个适合中国国情的中西医结合治疗肺心病的综合治疗方案，此方案可以降低病死率和致残率，改善心肺功能，减少平均住院天数和复发次数，降低住院费用，提高生活质量。在此基础上我们还开展了慢性肺源性心脏病急性发作期中医综合序贯治疗方案研究和慢性肺源性心脏病急性发作期中药筛选优化研究，证实三拗汤、栝楼薤白半夏汤(去白酒)、桔梗汤三方合方治疗慢性肺源性心脏病急性发作期安全有效，说明中西医结合治疗肺心病急性发作期具有明显的优势。麻桔喘咳口服液是我们在前期工作基础上开发的中药制剂，目的在于为肺心病急性发作期患者提供一种新的简便高效的中成药合剂，本文报告了该药对大鼠实验性肺心病的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SD清洁级大鼠，体质量180～220 g，雌雄各半，由四川省实验动物专委会养殖场提供(许可证号SCXK(川)2008-14)。动物饲养于成都中医药大学附属医院药理实验室(实验动物使用许可证号SYXK(川)2008-028)。饲养观察室温度22～24 ℃，相对湿度65%～75%。全价鼠颗粒料由四川省实验动物专委会养殖场提供。

1.2 药品与试剂

1.2.1 实验药品 麻桔喘咳口服液由成都中医药大学附属医院药剂科提供(麻桔喘咳口服液为院内制剂，批号20110908)，含量为3.5 g生药/ml，临床用量为1 g/kg。根据急性毒性试验结果及临床用量，临用前将麻桔喘咳口服液用蒸馏水分别配成1.2、0.6与0.3 g生药/ml的药液，以10 ml/kg灌胃供大鼠试验用，即高、中、低剂量组分别为临床用药剂量的12倍、6倍、3倍(根据动物体表面积计算，相当于人等效剂量的2倍、1倍、0.5倍)。肺力咳胶囊0.3 g/粒，贵州健兴药业有限公司生产(批号20110304、20120308，批准文号国药准字Z20025420)，临用前用蒸馏水将其配成0.108 g生药/ml混悬液供大鼠试验用，用蒸馏水配成0.075 g生药/ml混悬液供小鼠试验用。卡托普利片25 mg/片，汕头金石制药总厂生产(批号120109，批准文号国药准字H44024904)，临用前用蒸馏水配成1 mg/ml混悬液供大鼠试验用。

1.2.2 实验试剂 野百合碱由sigma公司生产，进口分装；无水乙醇，分析纯，成都金山化学试剂有限公司，500 ml/瓶(批号20110606)；乌来糖，国药集团化学试剂有限公司，500 g/瓶(批号T20050610)；0.9%氯化钠注射液，四川美大康佳药业有限公司生产，500 ml/瓶(批号100722103，批准文号国药准字H51022439)；内皮素检测试剂盒，北京北方生物技术研究所(批号20120306)；NO检测试剂盒，南京建成生物工程研究所(批号20120405)。

1.3 仪器

十万分之一电子分析天平，德国Sartorius；电子天平T-1000型，美国G&G；BASIC半自动生化仪，法国SECOMAM；高压灭菌锅(YX-280D)，合肥华泰医疗设备有限公司。

1.4 方法

SD大鼠56只，体质量180～220 g，雌雄各半。按体质量和性别随机分为7组，每组8只，分别为麻桔喘咳口服液高剂量组(12 g生药/kg)、中剂量组(6 g生药/kg)、低剂量组(3 g生药/kg)，以下简称高剂量组、中剂量组、低剂量组和肺力咳组(1.08 g/kg)、卡托普利组(10 mg/kg)、模型组和正常对照组。除正常对照组外，各组大鼠以1%野百合碱溶液(无水乙醇∶生理盐水=2∶3)腹腔一次性注射造模5 ml/kg，剂量为50 mg/kg。造模后1周开始灌胃给药，每日1次，给药容量为10 ml/kg，正常对照组及模型组灌胃等容量的蒸馏水，连续给药14 d。末次灌胃给药1 h后，眼眶后静脉丛取血。分离血清，分光光度法检测一氧化氮NO含量；分离血浆，放免法检测内皮素ET-1含量。处死大鼠，取心脏解剖分离右心室(RV)和左心室(LV)+室间隔(S)分别称重，计算各组右心肥厚指数。右心肥厚指数=右心室/(左心室+室间隔)，即RV/(LV+S)。以t检验对各组NO、ET-1、RV/(LV+S)进行比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

1.5 统计学方法

取肺投入10%甲醛溶液中固定、石蜡包埋，切片4 μm，HE染色，光镜下观察。

1.5.1 肺动脉面积、肺动脉血管壁面积观察检测 先用低倍(100×)观察HE染色切片肺组织内肺动脉，寻找5个肺动脉横断面大小接近的肺动脉作为测量目标，然后在中倍(200×)镜下用图像分析系统(Mias2000)测量5个肺动脉横断面血管的面积及相应肺动脉管壁面积，计算5个肺动脉横断面面积之和、5个肺动脉横断面管壁面积之和，表示肺动脉面积、肺动脉管壁面积。

1.5.2 肺动脉管腔面积检测 上述5个肺动脉横断面面积之和减去相应5个肺动脉横断面管壁面积之和等于5个肺动脉横断面管腔面积之和，表示肺动脉管腔面积。

1.5.3 肺动脉血管壁面积绝对值、血管腔面积绝对值计算 为排除因选择肺动脉大小不一致所致肺动脉管壁和管腔大小不一致导致的统计差异，统计时采用肺动脉管壁和肺动脉管腔的绝对值进行统计。肺动脉管壁面积绝对值=肺动脉管壁面积/肺动脉面积，肺动脉管腔面积绝对值=肺动脉管腔面积/肺动脉面积。

1.6 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件进行统计处理，计量资料用One-Way ANOVA-t检验，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

表1显示，与对照组比较，模型组大鼠血液中ET-1含量升高，NO含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，表明模型组大鼠形成肺心病模型的ET-1/NO失衡，血管收缩因子ET-1增加，血管舒张因子NO减少。与模型组比较，麻桔喘咳口服液能降低血浆ET-1水平，其中麻桔喘咳口服液中剂量组(6 g生药/kg) 与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)；同时麻桔喘咳口服液能升高血清NO水平，中剂量组 (6 g生药/kg)、小剂量组(3 g生药/kg)与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。上述结果表明，麻桔喘咳口服液能通过降低ET-1水平、增加NO水平，从而改善肺心病模型的ET-1/NO失衡。与模型组比较，阳性药卡托普利(10 mg/kg)同样能明显降低ET-1水平，增加NO水平(P<0.05)。

表1显示，与对照组比较，模型组大鼠右心肥厚指数增高，差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较，麻桔喘咳口服液给药组右心肥厚指数有下降趋势，但与模型组比较差异无统计学意义。阳性药卡托普利(10 mg/kg)能明显降低右心肥厚指数 (P<0.05)，说明卡托普利能减轻野百合碱所致肺心病大鼠右心肥厚。

表1 麻桔喘咳口服液对肺心病大鼠ET-1、NO、右心肥厚指数的影响

注：与对照组比较:#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较:*P<0.05，**P<0.01

表2显示，病理组织学统计结果显示，麻桔喘咳口服液能不同程度地使肺动脉血管壁面积缩小，即使肺动脉血管壁变薄，同时使血管腔面积增大；麻桔喘咳口服液低剂量组可显著降低肺动脉血管壁厚度、增加血管腔面积；麻桔喘咳口服液大、中剂量组有降低肺动脉血管壁厚度和增加血管腔面积的趋势。

表2 麻桔喘咳口服液对肺心病大鼠肺动脉血管壁面积绝对值及血管腔面积绝对值的影响

注：与模型组比较：*P<0.05，与模型组比较：**P<0.01

病理照片如下：

4 讨论

慢性肺源性心脏病属于中医“喘证、痰饮、肺胀”范畴。我们前期研究发现，肺心病急性发作期的基本病机为痰湿蕴肺、肺气闭郁，以宣肺平喘、化痰止咳为治法。我们体会到中医药在救治肺心病中所起的作用：(1)稀释痰液，促进痰液引流，改善通气，提高抗感染的效果；(2)增进病人食欲，改善营养，防止呼吸肌疲劳，减少呼吸机待机时间；(3)降低肺动脉高压，改善右心功能；(4)每剂中药含K+为90～110 mmol/L,可补充K+，防止低钾性碱中毒；(5)温肾阳中药能提高人体免疫力，减轻对糖皮质激素的依赖，缩短使用激素的时程。

麻桔喘咳口服液具有宣肺平喘、豁痰开胸的功效，临床用于痰浊内阻所致肺胀、哮喘、咳嗽等疗效显著。因此在主要药效学试验中，采用野百合碱诱发大鼠肺心病模型评价麻桔喘咳口服液的治疗作用。通过测定血管收缩因子内皮素(ET-1)和血管舒张因子一氧化氮(NO)的含量变化，探讨麻桔喘咳口服液改善肺血管舒缩功能的作用；通过测定右心肥厚指数，探讨麻桔喘咳口服液改善肺动脉高压、减轻右心肥厚的效果；通过肺病理组织学，探讨麻桔喘咳口服液减轻肺血管增生重构的效果。

实验结果显示，麻桔喘咳口服液高剂量组(12 g生药/kg)、中剂量组(6 g生药/kg)、低剂量组(3 g生药/kg)能明显改善野百合碱致肺心病模型大鼠血中血管收缩因子内皮素/血管舒张因子一氧化氮的失衡(P<0.05或P<0.01)，有减轻右心肥厚指数RV/(LV+S)的趋势。病理组织学结果显示，麻桔喘咳口服液能不同程度地降低肺动脉血管壁厚度，增加血管腔面积，说明麻桔喘咳口服液能减轻肺动脉的血管增生。

综上所述，主要药效学试验结果表明，麻桔喘咳口服液能通过缓解ET-1/NO失衡、减轻右心肥厚和肺血管增生重构治疗肺心病。在目前治疗肺心病药物较为匮乏的情况下，麻桔喘咳口服液的临床应用前景广阔。

[1] 程显声.肺心病防治研究进展和策略变化[J]．中华内科杂志，1996,35(11):723-724．

[2] 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南[M]．北京：人民卫生出版社，1994：209.

[3] 中华人民共和国卫生部药政管理局．新药(西药)临床前研究指导原则汇编[S]．北京：人民卫生出版社，1994：204-208.

[4] 国家药品监督管理局.新药审批办法[S]．1999．

[5] 徐叔云,卞如濂，陈修.药理实验方法学[M]．3版.北京：人民卫生出版社，2001.

[6] 陈奇,邓文龙，张世玮，等.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993.