不同分离制备时间对凝血因子Ⅷ含量的影响探讨

尤榕，黄丽红，黄智君

(江西省血液中心，江西南昌330052)

·检验与临床·

不同分离制备时间对凝血因子Ⅷ含量的影响探讨

尤榕，黄丽红，黄智君

(江西省血液中心，江西南昌330052)

目的分析不同分离时间制备新鲜冰冻血浆(FFP)对凝血因子Ⅷ(简称Ⅷ因子)含量的影响。方法按不同分离制备时间(6～8h、9～12h、13～18h)分为3组，对3组新鲜冰冻血浆产品进行凝血因子Ⅷ含量检测。结果3组不同时间分离制备FFP的凝血因子Ⅷ含量采用单因素方差分析，F=35.07，P＜0.05，有统计学意义；再进行两两比较，发现第1组vs第2组，P＞0.05，无统计学意义；第1组vs第3组和第2组vs第3组，P＜0.05，有统计学意义。结论实际采集、制备FFP全过程中，应严格把控各个环节上的关键点，加强对采血、分离制备、速冻的时间和贮存、运输、离心、速冻温度的控制；确保在12h内制备的FFP的凝血因子Ⅷ的质量，既满足临床输注的安全性和有效性，又能满足临床对FFP需求量。

新鲜冰冻血浆；分离制备时间；凝血Ⅷ因子含量

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.033

新鲜冰冻血浆(FFP)中凝血因子Ⅷ是血友病患者缺乏的凝血因子之一，对这种患者的止血凝血，Ⅷ因子具有不可替代的作用。而血液采集、贮存、运输、分离、制备、速冻等过程中各关键点，均会影响凝血Ⅷ因子的含量。

制备新鲜冰冻血浆，使用抗凝剂为CPD、CP2D、CPDA-1的血液应在8h内分离并速冻，而抗凝剂为ACD的血液则在6h内分离并速冻。当血液采集时间200ml＞7min，或400ml＞13min时，所采集的全血不可用于制备新鲜冰冻血浆。血浆中不稳定的凝血因子Ⅷ在体外半衰期为l2～24h[1]，随着保存时间延长其活性逐渐降低，为了确保新鲜冰冻血浆质量、维持凝血因子Ⅷ稳定、提高临床疗效，应尽量缩短新鲜液体血浆在室温的停留时间[2]，采集后的血液尽快置于2℃～6℃保存，在运输过程中保持2℃～10℃,离心分离温度控制在2℃～6℃。速冻是保存凝血因子Ⅷ的关键加工步骤，冷冻速率和血浆中心温度是2个关键参数，分离后应在60 min内将血浆中心温度降至-30℃以下快速冻结，在-18℃下保存有效期一年[3]。

FFP中含有全部的凝血因子,特别是不稳定的Ⅴ、Ⅷ因子，Ⅴ、Ⅷ凝血因子在凝血过程中具有极其重要的作用,在FFP制备过程中保护Ⅴ、Ⅷ因子活性,减少其活性损失,对临床血浆输注的效果具有重要意义，而影响V、Ⅷ凝血因子活性的主要因素是温度和时间[4]。在2012颁布新版《GB18469-2012全血及成分血质量要求》及第3版《临床输血》[5]中，FFP定义由原来在全血采集后6h(全血保养液为ACD)或8h(全血保养液为CPD、CPD-1)内，改为最好在6～8h内，但不超过18h分离出血浆并速冻呈固态的成分血。参考国外的相关标准[6]，其中规定新鲜冰冻血浆(冷沉淀原料浆)的制备时间最长不宜超过18h。

FFP中不稳定凝血因子(V因子和Ⅷ因子)的含量多少是评价新鲜冰冻血浆质量的关键[7]，因此笔者针对在近同等条件下进行采集、运输、分离条件、速冻、储存的血液，但在不同时间段进行分离制备FFP，检测其凝血因子Ⅷ含量，进行统计学分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 对象及分组样本为2012年7月至2014年8月间自愿无偿献血者血液标本，全部采用抗凝剂CPDA-1配方，按不同时间段制备FFP样本共183份,分为3组，第1组：6～8h内分离制备，共94份样本；第2组：9～12h内分离制备，共42份样本；第3组：13～18h小时分离制备，共47份样本。

1.2 仪器与试剂仪器：为日本SYSMEX公司生产的CA-500全自动血凝分析仪；深圳普特公司产的LWS-3100W型低温工作台，Dometic公司生产的MBF21血浆速冻机，三洋低温冰箱。配套试剂：Ⅷ因子试剂、APTT试剂、氯化钙CaCl2试剂，均在有效期内使用。

1.3 方法按照《GB18469-2012全血及成分血质量要求》，FFP中凝血因子Ⅷ含量≥0.7IU/ml，对3组样本进行凝血因子Ⅷ含量检测。

1.4 统计学方法计量数据采用x±s表示，对三组Ⅷ因子含量进行单因素方差分析，进行两两比较，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

不同分离制备时间对凝血因子Ⅷ含量的影响：在不同时间分离得到FFP的凝血Ⅷ因子含量，结果显示(见表1)，采用单因素方差分析，F=35.07，P＜0.05有差别，后进行两两比较，得出第1组vs第2组，P＞0.05，无统计学差异，第1组vs第3组和第2组vs第3组，均P＜0.05，有统计学差异。

表1 不同分离制备时间对Ⅷ因子含量的影响(±s)

表1 不同分离制备时间对Ⅷ因子含量的影响(±s)

组别Ⅷ因子含量( I U / m l ) P第一组第二组第三组0 . 9 0 ± 0 . 2 0 0 . 9 1 ± 0 . 3 4 0 . 5 6 ± 0 . 2 5第1组v s第2组，P = 0 . 9 7 2第1组v s第3组，P = 0 . 0 0 0第2组v s第3组，P = 0 . 0 0 0

3 讨论

FFP含有V因子和Ⅷ因子等凝血因子，保持它们的生物活性，才能满足临床的要求。FFP主要用于治疗凝血因子缺乏引起的出血，是多种凝血因子缺乏性疾病的有效的治疗制品。常用于严重肝病患者、大量输血伴发凝血功能障碍、血浆置换、烧伤、DIC等，所以临床对FFP的需求量较大，根据本中心临床供血数据统计，2012年较2011年增涨8%，2013年较2012年增涨45.22%，但由于原制备时间的限制(6～8h)，故原制备量较难满足临床需求。

现各血站在18h内分离制备FFP的凝血因子Ⅷ是否能达到国家标准，目前报道较少。本研究在对南昌地区不同时间段进行分离制备的FFP，按照分离制备时间的不同分为3个时间组(6～8h、9～12h、13～18h)，对3组不同时间段凝血Ⅷ因子含量采用单因素方差分析，F=35.07，P＜0.05有统计学差异，再进行两两比较，显示第1与第2组间差异无统计学意义，但第3组与第1组、第2组间均差异有统计学意义。分析结果显示，在6～12h内进行分离制备的FFP，其凝血因子Ⅷ含量基本符合国家标准，但13～18h分离制备的FFP的凝血因子Ⅷ含量，只有23.40%达到国家标准。说明当分离制备时间在13～18h，凝血因子Ⅷ受到影响而大部分失活，凝血因子Ⅷ在体外半衰期为8～12h，这是FⅧ：C活性丧失的主要原因[8]，l2h后分离的冰冻血浆，不稳定凝血因子(特别是Ⅷ因子)会明显降低，而影响凝血活性[9]，考虑FFP中的凝血因子易受血浆储存、运输等条件的影响而失活，从而导致血液疗效的降低[10]。提示在实际采集、制备FFP全过程中，应严格把控各个环节上的关键点，加强冷链对FFP整个制备过程的控制至关重要[11]，以及对采血，分离制备、速冻的时间的控制，确保FFP中凝血因子Ⅷ的质量，符合国家标准。

通过对3组不同时间段凝血因子Ⅷ含量的分析研究，笔者认为制备FFP的分离时间可延长至12h，在确保FFP中凝血因子Ⅷ质量的同时，既保障临床输注的有效性和安全性，又满足临床对FFP的大量需求。

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R457.1+2，R554.1

A

1674-1129(2014)06-0735-02

2014-08-08；

2014-09-23)