老年胃癌患者病变组织GC-CmRNA表达与病情的关系

范永熙 (高密市人民医院检验科，山东 高密 261500)

胃癌是消化系统较为常见的一种恶性肿瘤〔1〕，对早期胃癌进行手术是唯一可行的根治方法〔2〕。当前胃癌的检查方法多为胃镜以及活检，虽然一定程度可以发现肿瘤的存在，但多在患者出现明显症状后才考虑进行检测，一旦确诊往往病情已进入中晚期〔3〕。因此，寻找一种简单、准确、并能在早期提示恶性病变的方法就成为了目前的迫切任务。本研究应用实时荧光定量PCR技术对胃癌患者病变组织中鸟苷酸环化酶C信使核糖核酸(GC-C mRNA)进行检测，探讨其与外周血微转移及病情判断的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 60例胃癌患者及30例相应远癌正常胃黏膜组织标本均来自我院2010年1月至2012年6月外科手术切除的标本。60例胃癌患者中，男42例，女18例，年龄60～83〔平均(72.1±9.7)〕岁。对术后肿瘤大小进行分组，其中＜5 cm者32例、≥5 cm者28例;根据分化程度进行分组，其中29例为中、高分化腺癌，31例为低分化腺癌。另外，本组中28例为肠型胃癌、32例为弥漫型胃癌;41例患者出现淋巴结转移。胃癌分期:Ⅰ～Ⅱ期26例、Ⅲ～Ⅳ期34例。

1.2 实时定量PCR方法 经过培养的细胞，利用TRIzo1提取总RNA后使用RT-PCR试剂盒进行逆转录，最后使用SYBR Green荧光染料进行实时定量PCR扩增，反应条件为50℃5 min，95℃ 3 min，95℃ 20 s，60℃ 1 min。

1.3 统计学方法 应用SPSS14.0统计软件进行分析，计量资料以±s表示，均数比较采用t检验和方差因素分析。

2 结果

2.1 GC-C mRNA在胃癌组织以及远癌胃黏膜组织中的表达比较 GC-C mRNA在远癌胃黏膜组织中不存在表达，而在胃癌组织中的表达阳性率(50例)及表达水平(40.95±25.20)均明显升高，与远癌胃黏膜组织比较有显著差异(均P＜0.01)。

2.2 GC-C mRNA在胃癌组织中表达的相关性分析 根据性别、年龄、肿瘤大小、Lauren分型、TNM分期、分化程度、淋巴转移等情况分别进行比较，发现肠型胃癌的表达水平明显高于弥漫型胃癌(P＜0.01)，与其他因素无明显关系。见表1。

表1 GC-C mRNA在胃癌组织中表达的相关性分析(±s)

表1 GC-C mRNA在胃癌组织中表达的相关性分析(±s)

项目 n GC-C mRNA t值 P值＜70 25 41.52±28.36 0.27 ＞0.05≥70 35 39.82±20.51性别 男 42 38.66±33.66 0.56 ＞0.05女 18 43.53±23.41肿瘤大小(cm) ＜5 32 38.04±17.63 0.72 ＞0.05≥5 28 42.49±29.62 Lauren分型 肠型 28 51.30±26.26 3.75 ＜0.01弥漫型 32 30.33±16.49 TNM分期 Ⅰ～Ⅱ期 26 41.41±28.33 0.10 ＞0.05Ⅲ～Ⅳ期 34 42.12±26.90分化程度 低分化 31 40.77±25.63 0.36 ＞0.05中、高分化 29 38.51±22.51淋巴转移 有 41 38.25±25.62 0.56 ＞0.05无年龄(岁)19 42.01±20.08

3 讨论

目前，对于胃癌的发病机制尚不明确，但认为遗传和环境是胃癌发病的两大重要相关因素〔4〕。多基因改变、多因素参与、多阶段发生是目前遗传和环境导致胃癌发生的最基本原因〔5〕。Correa学说认为胃癌的发生过程中伴随着多种基因异常，例如蛋白质、酶以及基因等的改变〔6〕。GC-C属于N-连接糖蛋白受体，是一次性跨膜蛋白，正常情况下仅存在于肠黏膜细胞，不在肠外组织中表达〔7〕。Park等〔8〕通过检测发现胃腺癌组织以及癌旁组织中GC-C mRNA的阳性检测率分别为88.89%和85.71%，而健康正常人的胃黏膜中不表达GC-C mRNA。

胃癌是我国最常见恶性肿瘤之一，早期诊断具有重要意义。随着分子生物学、生物信息学和功能蛋白质组学等相关领域的科技进步，蛋白标志物具有良好的发展前景〔9〕。研究认为〔10〕，GC-C以及CDP二酰基苷油合成酶(CDX2)的异常表达均与胃黏膜癌变的发生有密切关系，两者共同参与了人胃腺癌致癌过程的调控。因此，检测GC-C以及CDX2能够帮助临床医师对早期胃癌以及胃癌前病变进行诊断。在一些胃癌的实验研究中已经表明〔8〕，通过体外培养的胃癌细胞株(SGC-7901)进行PCR检测可以发现GC-C mRNA的表达程度明显上升。而通过靶向GC-C mRNA的siRNA能够有效抑制SGC-7901的生长与繁殖，从而达到杀灭肿瘤细胞以及防止其转移的目的。

本研究结果发现，胃癌患者GC-C mRNA呈现较高的表达，而GC-C mRNA在远癌胃黏膜组织则未见有任何的表达;而且，肠型胃癌中的表达明显高于弥漫型胃癌。这也说明GC-C在肠型胃癌的发生、发展中扮演了重要的角色。

综上，在胃黏膜癌变过程中，GC-C mRNA的异常表达是胃癌发生的早期表现。因此，可通过PCR技术对高危人群胃黏膜组织的GC-C mRNA进行测定来早期发现胃癌，从而帮助患者早期治疗，最终提高胃癌患者的近期与远期生存率。

1 宗祥云，师英强，孙孟红，等.大肠癌患者外周血中鸟苷酸环化酶C的表达及其意义〔J〕.中国癌症杂志，2005;15(4):339-42.

2 毛振彪，许 钟，张健锋，等.鸟苷酸环化酶C和尾型同源盒转录因子2在胃癌及癌前病变组织中的表达及意义〔J〕.中华消化杂志，2008;28(10):673-7.

3 朱惠君，许 钟，毛振彪，等.鸟苷酸环化酶C和尾型同源盒转录因子2蛋白在胃癌及癌前病变组织中的表达〔J〕.中华医学杂志，2008;88(48):3418-21.

4 张健锋，薛世民，张 弘，等.胃癌患者外周血中鸟苷酸环化酶C信使RNA的表达及其临床意义〔J〕.中华医学杂志，2012;92(6):371-5.

5 宗祥云，师英强，孙孟红，等.鸟苷酸环化酶C在大肠癌淋巴结中表达的意义〔J〕.外科理论与实践，2004;9(5):407-10.

6 毛振彪，许 钟，张健锋，等.胃癌组织中GC-C和CDX2 mRNA的表达及临床意义〔J〕.江苏医药，2009;35(2):176-8.

7 张健锋，印红军，张 弘，等.稳定干扰鸟苷酸环化酶C基因表达的人胃腺癌细胞株的筛选和建立〔J〕.胃肠病学，2011;16(7):429-31.

8 Park J，Schulz S，Haaf J，et al.Ectopic expression of guanylyl cyclase C in adenocarcinomas of the esophagus and stomach〔J〕.Cancer Epidemiol，Biomarkers Prev，2002;11(8):739-44.

9 刘洪义，邢 金，所 剑.Twist基因沉默对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响〔J〕.中国老年学杂志，2012;32(16):3464-6.

10 毛振彪，王唯一，张冬雷，等.实时荧光定量PCR检测大肠癌患者外周血鸟苷酰环化酶C基因及其临床意义〔J〕.第二军医大学学报，2005;26(11):1252-5.