血管抑素与32P-胶体治疗肝癌的疗效评价

郝大林

肝癌是指发生于肝细胞或肝内胆管上皮细胞的癌变，是我国常见恶性肿瘤之一。基因治疗是近年来医疗技术发展中的重要成果，对肿瘤生长和转移的抑制具有良好的效果。本研究以血管抑素基因联合放射性药物32P-胶体治疗大鼠肝癌的研究，对治疗效果进行评价。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试剂与器材 TUNEL荧光试剂盒（北京中昊时代生物有限公司），总RNA提取试剂盒（上海拜力生物科技有限公司），显微镜为奥林巴斯FV500激光显微镜，CT机为GE公司生产的螺旋CT机，32P-胶体购自原子高科股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血管抑素基因的构建 以试剂盒提取总RNA，血管抑素基因下游引物为5’-TTATGAGCACCGCTTCAGGTTGC AGTAT-3’，上有引物为5’-CGAAGCTTGGATCCATGGAC CATAAGGAAGTAA-3’。根据标准方法扩增RT-PCR，将扩增之后增加的物质接入pMD18T克隆载体，进行血管抑素基因的重组构建，进行鉴定测序后再次扩增并进行质粒提取。

1.2.2 模型制备与分组 选取购自省实验动物中心的健康Wistar雄性大鼠（吉检证字2002A044），大鼠体重在140～150g。以中国医学科学院提供的Walker-256肿瘤细胞0.05mL在大鼠肝叶位置接种，进行肝癌的动物模型建立。7d后进行肿瘤大小检查。将大鼠随机分为3组，分别为基因治疗组、联合治疗组、对照组，3组大鼠均为30只。将大鼠行开腹暴露肝脏部分与肿瘤组织，分3个点进行肿瘤注射，主要药物量为20mL，基因治疗组注射20μg血管抑素基因质粒，联合治疗组注射20μg血管抑素基因质粒与32P-胶体，对照组注入0.2mL生理盐水。

1.3 评价方法[1]分别在治疗前、治疗后7、14、21d行CT检查，测量肿瘤体积，计算肿瘤生长率。治疗21d后处死大鼠，取肿瘤组织并固定、切片，进行显微镜检查，以免疫组化的方法进行肿瘤微血管密度（MVD）测量，以TUNEL方法进行细胞凋亡指数（AI）测定。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件分析，计量资料以(±s)表示，组间进行t检验，计数资料比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组大鼠治疗后的肿瘤生长率检测结果比较 基因治疗组与联合治疗组治疗后7、14、21d肿瘤生长率均显著低于对照组（P＜0.01），联合治疗组治疗后7、14、21d肿瘤生长率均显著低于基因治疗组（P＜0.01）。见表1。

表1 3组大鼠治疗后的肿瘤生长率检测结果比较（±s，%）

表1 3组大鼠治疗后的肿瘤生长率检测结果比较（±s，%）

注：与对照组比较，aP＜0.01；与基因治疗组比较，bP＜0.01

组别 例数 7d 14d 21d基因治疗组 30 5.87±1.88a 15.79±2.43a 23.93±4.98a联合治疗组 30 2.71±1.39ab 4.77±1.85ab 6.82±2.55ab对照组 30 8.53±1.42 24.89±5.21 45.32±8.83

2.2 3组大鼠治疗后MVD与AI检测结果比较 治疗21d后，基因治疗组与联合治疗组MVD与对照组相比均显著降低（P＜0.01），AI与对照组相比均显著升高（P＜0.01）。基因治疗组MVD与联合治疗组相比均明显增加（P＜0.05），基因治疗组AI与联合治疗组相比明显降低（P＜0.05）。见表2。

表2 3组大鼠治疗后MVD与AI检测结果比较（±s）

表2 3组大鼠治疗后MVD与AI检测结果比较（±s）

注：与对照组比较，aP＜0.01；与治疗组相比bP＜0.05

组别 例数 MVD(n) AI(%)基因治疗组 30 46.02±7.71ab 15.64±3.53ab联合治疗组 30 30.02±3.38a 24.95±4.04a对照组 30 61.78±10.67b 5.51±1.49b

3 讨论

血管抑素和重组的血管抑素蛋白直接注射于实验动物体内，能明显抑制肿瘤原发灶和转移灶的血管生成。基因工程的迅速发展为血管抑素的基因治疗提供了实验基础。血管抑素和内皮抑素血管抑素是人纤溶酶原的片断。血管抑素在体外表现出抑制内皮细胞增殖、迁移和血管形成，而在体内则表现为抑制血管形成和转移[2]。考虑到血管抑素需要大剂量多次注射以及长期治疗，这使其失去临床试验的吸引力。血管抑素更具潜力的是它和体外放疗的联合应用。本研究实验数据显示，在不增加毒性作用下联合离子放射和血管抑素，能提高肿瘤的清除。这暗示血管抑素与其他治疗联合应用时更加有效，而不应只是作为基础治疗。由于抗肿瘤血管生成基因治疗不受肿瘤细胞周期的影响，故而是化疗、放疗和其他基因治疗方案的良好补充。血管抑素的抗血管治疗与传统的抗肿瘤细胞治疗的联合应用，能更有效地治疗肿瘤。本次研究中肿瘤体积、MVD、AI的变化证明血管抑素能够抑制肿瘤生长，而联合放射性药物32P-胶体相比血管抑素单一作用更为明显，可以通过抑制肿瘤血管内皮细胞生长与发展迁移而抑制肿瘤生长，能够有效控制肝癌病情、改善治疗效果。

[1]刘志广.AD-AS-ES(血管抑素/内皮抑素双基因腺病毒表达载体)体外对肺癌A549细胞作用的初步研究[D].哈尔滨医科大学，2010.

[2]马铎，于峰，高慧棋，等.血管抑素基因联合32P-胶体治疗大鼠肝癌的疗效[J].中国老年学杂志，2011，31(21):4202-4204.