VG染色在慢性肝病组织中的应用

姜晶 王彩芹

慢性肝病包括慢性肝炎和肝硬化，最基本的病理特征之一为肝内纤维结缔组织弥漫性增生，纤维间隔的形成。本研究应用VG（Van Gieson）染色方法，探讨由慢性肝炎到肝硬化过程中肝内胶原纤维的增生，分布变化，以鉴别不同类型的慢性肝炎和肝硬化，探讨慢性肝病组织中胶原纤维可能起源，为肝硬化的早期诊断及其防治提供组织病理学依据。

1 资料与方法

1.1 一般材料 选自北华大学附属医院和基础医学院的尸检，活检材料，共40例，其中慢性肝炎9例，均为肝穿刺标本，在31例肝硬化标本中，外科切除20例，尸体解剖11例。标本均用10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，制片，厚5μm，待做HE及VG染色。

1.2 方法 常规HE染色 石蜡切片脱蜡水洗，苏木精将组织切片适当过染，水洗后经盐酸酒精分化，弱氨水显蓝，使细胞核呈鲜明蓝色，胞质背景无色，再经水洗后用伊红将胞质等染成粉红色至红色，脱水、透明、封固。光镜观察，确定病理诊断及病理类型。做VG染色：切片按常规脱蜡水洗，用Weiger氏铁苏木精染核15min,自来水充分冲洗，用显微镜观察细胞核着色程度，用蒸馏水洗后以VG染液染5min，直接用新的95%酒精急速分化兼脱水，约需8s,无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2 结果

2.1 HE染色 根据肝组织损伤程度确定慢性肝炎和肝硬化的病变类型。9例慢性肝炎中：轻型慢性肝炎2例，中度慢性肝炎4例，重度慢性肝炎3例；31例肝硬化中，不完全分割3例，细节结型17例（图1），粗结节型11例。

2.2 VG染色 经VG染色显示慢性肝病组织内胶原纤维增生及分布状况。VG染色后将胶原纤维染成深粉红色，肝细胞质染成黄色，而核呈棕黑色。

图1 HE染色，200倍视野下，细节结型肝硬化形成的假小叶较小，其周边的纤维间隔内有大量炎细胞浸润。

图2 VG染色，200倍视野下，假小叶周边的纤维间隔呈深粉红色。

2.2.1 胶原纤维在慢性肝炎组织中的分布 (1)轻型慢性肝炎：肝小叶结构无破坏，仅在汇管区及其周边组织内有少量胶原纤维分布；（2）中度慢性肝炎：肝小叶结构大部分得以保存，仅在肝小叶内形成少许条索状纤维间隔；（3）重度慢性肝炎：增生的胶原纤维形成纤维间隔，并分割肝小叶，新生的胶原纤维条索由汇管区或肝细胞坏死灶向肝小叶内延伸，分割肝小叶结构。汇管区明显增宽，胶原纤维成宽带状，结构疏松深染。

2.2.2 胶原纤维在肝硬化组织中的分布 （1）不完全分割型肝硬化（早期肝硬化）：胶原纤维间隔不完整，且间隔较薄，可见不完整或盲端的纤维间隔向小叶内伸延，假小叶结构尚未完全形成；（2）细节结型肝硬化：形成的假小叶较小，其周边的胶原纤维间隔较薄，较均匀（图2）；（3）粗结节性肝硬化：形成的假小叶较大，其周边的纤维间隔不规则，宽窄不均，间隔较宽处胶原纤维融合成束，并形成编织状，甚至发生玻变。

3 讨论

肝纤维是肝脏对各种原因所致肝损伤的代偿修复反应，表现为肝内纤维结缔组织增生与沉积，是多种慢性肝病共同的病理过程[1]。VG染色表明，轻型慢性肝炎仅有少量胶原纤维分布在汇管区及其周围。中度慢性肝炎在肝实质内也能见到纤维条索。重型慢性肝炎胶原纤维起源于碎片状，桥接坏死灶，并形成纤维间隔分割肝实质。在肝硬化病变中，粗结节型其周围纤维间隔较宽，而细节结型其间隔较窄。纤维结缔组织间隔较宽表明与坏死灶内网状支架塌陷、胶原化有关，而较细间隔与肝内炎灶细胞活化有关。在肝脏受到损害时，肝星状细胞（HSC）被激活，表达多种细胞因子及受体，大量增殖合成细胞外基质（ECM）[2]。纤维间隔内增生的纤维组织也与Kupffer氏细胞与激活的活化的HSC密切相关[3-4]。激活的HSC分化为肌纤维母细胞和成纤维样细胞，并分泌产生胶原纤维分割肝实质。Kim等[4]报道，慢性肝炎损伤后，活化的HSC和肝成纤维细胞是肝细胞生长因子作用靶点。此处多种损伤肝的因素，如慢性肝炎、酒精性肝病、药物损害、肝外胆道阻塞以及维生素A过多等均使贮脂细胞数目增多，其周围可见明星的胶原纤维增生。

肝纤维化是多种肝病的共同病理过程，是由不同原因引起的慢性肝损伤，激活HSC促进以胶原为主的ECM合成和分泌增多，降解减少或代偿不足，从而使ECM在肝内异常沉积而引起肝的纤维化病变，肝纤维化系由肝结缔组织弥漫性增生所致，大多数慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段，其病变特点为肝内弥漫性纤维增生，但无假小叶和再生结形成。已证实肝纤维化是可逆病变[5]，因此能否阻止或逆转肝纤维化是慢性肝病对病因治疗之外的重要环节。Tomiya等[6]报道，支链氨基酸可以作用肝脏，通过诱导肝脏产生HGF而达到治疗肝纤维化的目的。应用VG染色显示胶原纤维在肝组织内分布，对探讨慢性肝病肝纤维化的形成机制有重要实用价值，临床上在治疗肝损伤同时，也考虑抗纤维化治疗，可能对肝纤维化的防治具有指导意义，值得深入探索。

[1]张孝盈，李菲.慢性乙型肝炎纤维化治疗中肝纤维化指数的临床意义[J].江苏医药，2011，37（11）:1285-1287.

[2]黄强.银杏叶提取物对大鼠纤维化肝脏NF-κB活性的抑制作用[J].中国中医急症，2010，19(12):2102-2103.

[3]Bhunchet E,Eishi Y,Wake K.Contribution of immune response to the hepatic fibrosis induced by porcine serum[J].Hepatology,1996,23(4):811-817.

[4]Kim WH,Matsumoto K,Bessho K,et al.Growth inhibition and apoptosis in liver myofibroblasts promoted by hepatocyte growth factor leads to resolution from liver cirrhosis[J].Am patho1,2005,166(4):1017-1028.

[5]Pinzani M,Rombouts K.Liver fibrosis from the bench to clinical targets[J].Dig liver Dis,2004,36(4):231-242.

[6]Tomiya T,Omata M,Fujiwara K.Significance of branched chain amino acids as possible stimulators of hepatocyte growth factor[J].Biochem Biophy Res Commun,2004,313(2)：411-416.