HPLC法同时测定复方青黛胶囊中靛蓝、靛玉红的含量

杨海燕 张 成 任芸倩 陕西省食品药品检验所（西安710065）

复方青黛胶囊是由青黛、马齿笕、白芷等十四味中药组成的复方制剂，具有清热解毒、化瘀消斑，祛风止痒等功效，临床主要用于进行期银屑病、玫瑰糠疹、药疹等。其中青黛为君药，是一类常用中药材［1］，青黛中主要成分为靛蓝和靛玉红，《中国药典》2010年版一部青黛项下对靛蓝、靛玉红进行了不同方法的测定［2］，比较繁琐，且靛蓝和靛玉红可以互相转化，分别测定两个组分并不能真实的反映青黛中两组分的实际含量。本方法在同一色谱条件下，同时测定靛蓝和靛玉红的含量，比较真实地反映出样品中实际的含量，提高了检验的工作效率，降低了成本，保证了检验结果的准确性。

1 仪器与试药

1.1 仪 器 岛津2010C HT 型高效液相色谱仪，岛津2550 型紫外－可见分光光度计，Sartorius BP211D 型电子分析天平，

1.2 试 药 靛蓝、靛玉红对照品均由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为：110716－200610、110717－200204；甲醇：（色谱纯）；其余试剂均为分析纯；复方青黛胶囊（陕西天宁制药有限责任公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kro－mosil C18色谱柱（5μm，4.6mm×250mm）；流动相：甲醇－0.1%磷酸溶液（65∶35）；流速：1.0mL／min；柱温：30℃。检测波长293nm［3］。理论板数按靛蓝峰计算应不低于2000。

2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取靛蓝、靛玉红对照品适量，加N，N－二甲基甲酰胺［3］制成每1mL 含靛蓝50μg、靛玉红5μg的混合溶液，摇匀，即得。

2.2.2 样品溶液的制备：取本品内容物适量，研细，取约0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加N，N－二甲基甲酰胺25mL，称定重量，超声处理60 分钟，放冷，称定重量，用N，N－二甲基甲酰胺补足减失的重量，离心，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 实验方法 2.3.1 专属性试验：取按标准处方量及制法制得不含青黛的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，各进样10μL 测定，结果阴性无干扰。表明方法专属性好。对照品、样品、阴性样品色谱图见图1。

图1 对照品、样品、阴性对照品色谱图（1.靛蓝，2.靛玉红）

2.3.2 线性考察：精密吸取混合对照品溶液（每1mL含靛蓝0.0515mg／mL，靛玉红0.00601mg／mL）1，2，5，8，10，12，15，20，25μL进样，测定。以峰面积积分值为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，结果靛蓝在进样量为0.0515～1.2875μg范围内呈良好的线性关系，直线方程为：y＝5.4132×106x＋73710，r＝0.9997；靛玉红在进样量为0.00601～0.1502μg范围内呈良好的线性关系，直线方程为：y＝5.7191×106x＋2919，r＝0.9999。结果表明峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度考察：精密吸取供试品溶液，连续进样6次，测定峰面积积分值，结果峰面积RSD 靛蓝为0.73%，靛玉红为0.38%，结果表明本方法精密度良好。

2.3.4 稳定性考察：精密吸取供试品溶液，每隔4h进样1次，连续进样6次，测定峰面积积分值，结果在20h 内稳定性良好，峰面积积分值RSD 靛蓝为1.47%，靛玉红为0.11%。

2.3.5 重复性试验：取批号为110412的样品6份，按含量测定方法测定，靛蓝的平均含量为1.7413mg／g，RSD 为2.47%；靛玉红的平均含量为0.2339mg／g，RSD 为1.73%。结果表明，本法重复性良好。

2.3.6 回收率：取已知含量的样品（批号：110412，每1g含靛蓝1.7413mg，靛玉红0.2339mg），研细，取细粉约0.25g，精密称定，精密加入浓度为0.0821mg／mL 的靛蓝对照品溶液5mL，浓度为0.01372mL 的靛玉红对照品溶液5mL，再精密加入N，N－二甲基甲酰胺15mL，同法进行含量测定，计算回收率。结果见表1、2。

表1 靛蓝回收率测定结果

表2 靛玉红回收率测定结果

2.3.7 青黛药材含量测定：精密称取青黛约0.05g，同法进行含量测定，结果6批药材的含量分别为2.91%、3.02%、3.00%、2.90%、2.88%、2.74%均符合规定。

2.3.8 复方青黛胶囊含量测定：取样品0.5g，同法进行含量测定，11批样品测定结果最低为1.04mg／粒，最高为1.72mg／粒。所以暂将限度定为每粒含青黛以靛蓝（C16H10N2O2）与靛玉红（C16H10N2O2）的总量计，不得少于1.00mg。结果见表3。

表3 含量测定结果

3 讨论与结论

供试品溶液的制备曾参照《中国药典》2010年一部复方青黛丸含量测定方法［2］制备，结果靛蓝和靛玉红总量明显小于本实验提取方法，且提取时间过长。

通过对超声处理时间进行考察，选择含量最高超声处理60min；通过对提取溶剂体积进行考察，选择含量最高的25mL。

实验过程中，采用Kromasil C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱和Inertsil ODS－3C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，均得到了较好的分离。

在实验的过程中发现，样品溶液如果长时间暴露在强光下，靛玉红和靛蓝的含量会发生变化，靛蓝含量有轻微的减小趋势，靛玉红含量则稍有增大的趋势，而且溶液浓度越小越明显，所以建议实验过程中尽量避光操作。

［1］ 谢友良，何百寅，李远彬，等.青黛药材中的靛蓝和靛玉红含量的同时测定［J］.中药新药与临床药理，2011，22（4）：452－455.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：185.

［3］ 张青松，尹文清，陈柳生.青黛中靛玉红提取溶剂的改进［J］.广西师范大学学报：自然科学版，2010，13（3）：324－326.