TLR8基因多态性与中国东北地区汉族肺结核病的关联性分析

李 彤，张 娟，张桂珍，徐江涛，张 萍，蒋 俊，孙秀华，杜珍武

（1.辽宁省沈阳市胸科医院急症科，辽宁沈阳 110044；2.吉林大学中日联谊医院中心研究室，吉林 长春 130033）

TLR8基因多态性与中国东北地区汉族肺结核病的关联性分析

李 彤1，张 娟1，张桂珍2，徐江涛1，张 萍1，蒋 俊1，孙秀华1，杜珍武2

（1.辽宁省沈阳市胸科医院急症科，辽宁沈阳 110044；2.吉林大学中日联谊医院中心研究室，吉林 长春 130033）

目的：探讨Toll样受体8（TLR8）基因的4个位点单核苷酸多态性（SNP）与我国东北地区汉族人群结核病的关联性，分析其基因型频数分布在肺结核病与其他肺病间的差异。方法：采用病例－对照的研究方法。选择中国东北地区368例汉族肺结核病患者 （病例组）和355例汉族其他肺病患者 （对照组）为研究对象。应用连接酶特异检测技术检测2组患者TLR8基因4个位点rs3764880、rs3761624、rs3788935和rs3764879的基因型，比较2组患者等位基因频数分布差异，计算其危险系数（OR），并比较不同性别患者组间基因型频数分布的差异。结果 ：TLR8基因rs3764880、rs3761624、rs3788935和rs3764879位点等位基因型频数在2组间分布差异无统计学意义（P＞0.05）；不同性别的2组患者TLR8基因4个位点等位基因频数分布差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：TLR8基因位点rs3764880、rs3761624、rs3788935和rs3764879的SNP在我国东北地区汉族肺结核患者与其他肺病患者中的分布相同，提示上述TLR8基因4个位点的SNP与结核病的发生无关联性。

TLR8基因；单核苷酸多态性；肺结核

结核病依旧是目前全球性重大的公共卫生和社会问题。经大范围流行病学调查与长期追踪观察发现：结核病患者占全球结核杆菌感染人数的1／3，但发病患者人群不到10%［1］。随着结核病发病机理研究的不断深入，遗传因素在决定宿主个体对结核分枝杆菌的易感性上的重要作用逐渐得到重视。一些与结核病发病易感性相关基因以及相应的位点逐 渐 被 发 现［2－6］。Toll样 受 体 （Toll－like－recptor，TLR）是人们在研究果蝇胚胎发育过程中发现的dToll基因所编码的一种跨膜受体蛋白，在启动和调节天然免疫、诱导获得性免疫中起到重要作用，另外在肿瘤、心血管疾病和自身免疫的发生发展中亦扮演了重要角色［7］。一些研究［8－10］表明：TLR8基因的单核苷酸多态性（SNP）与肺部疾病包括肺结核易感性有关联。2008年新加坡基因研究所的科学家发现：Toll样受体8（Toll－like receptor 8，TLR8）基因的4个SNP位点rs3764880、rs3761624、rs3788935和rs3764879的多态性与印尼人和俄国人的结核病易感性密切相关［11］。由于TLR8基因位于X染色体上，而男性只有一条X染色体，因此男性携带致病位点从而感染结核病的概率更大［11］。印尼人与中国人的基因变异相似，但该结果是否也同样适用于我国尚未见报道。本研究初步探讨TRL8基因上述4个SNP位点在结核病患者和其他肺部疾病患者的分布，并分析该基因4个SNP位点在二者之间分布差异，从而为进一步研究上述4个位点是否能作为我国肺结核发病的易感基因位点奠定实验基础。

1 资料与方法

1.1 研究对象 368例汉族肺结核患者均为2009年5月—2011年10月沈阳市胸科医院结核病房收治的患者。结核病诊断依据2008年WHO制定的结核病诊断标准，同时符合结核菌素试验≥5mm，排除肺结核病并发活动性肺外结核病者和非结核分枝杆菌肺病患者。355例对照组研究对象为2009年7月—2011年7月沈阳市胸科医院收治的汉族非结核病患者，符合无结核病既往史和结核病家族史、有卡介苗接种史、PPD（－）、TB－AB（－）、肺部CT影像除外肺内活动性结核病变，痰涂片和培养查结核菌均呈阴性（－）。病例组和对照组研究对象均无输血史、无器官移植史、无吸毒史。本研究取得了沈阳市胸科医院伦理委员会的批准，并征得患者本人同意。TLR8基因4个位点的基因型频数分布在病例组和对照组均符合Hardy Weinberg平衡（P＞0.05）。病例组患者年龄为（54±16）岁，对照组患者年龄为（52±18）岁，2组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；病例组男性260例（70.7%），女性108例（29.3%）；对照组男性226例（63.6%），女性129例（36.4%），病例组与对照组之间的性别构成比差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 标本采集及外周血白细胞DNA的提取 所有研究对象均采集静脉血5mL，经EDTA抗凝，4℃冰箱保存。采用TIANGEN公司生产的血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）进行基因组DNA提取，溶于Tris－EDTA溶液，于－20℃冻存。

1.3 TLR8基因多态性分析 根据参考文献［11］，针对 TLR8 基因的 4 个 SNP 位点rs3764880、rs3761624、rs3788935和rs3764879采用连接酶检测反应（LDR）分型方法［12］检测基因型，委托上海捷瑞生物技术公司完成。

1.4 统计学分析 采用SPSS 11.0软件进行统计学分析。病例组和对照组等位基因频数组间比较采用χ2检验，计算OR值以及其95%可信区间。

2 结 果

2.1 TLR8基因4个SNP位点多态性检测结果采用连接酶特异检测技术检测TLR8基因4个SNP位点的峰图，其中S3：rs3788935测得基因型为AA、GG和GA；S1：rs3764880测得基因型为AA、GG和GA；S2：rs3761624测得基因型为AA、GG和GA；S4：rs3764879测得基因型为CC、GG和GC。见图1。

2.2 TLR8基因4个SNP位点多态性在2组患者中的分布 TLR8基因4个SNP位点的等位基因型频数分布在病例组与对照组患者之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.3 不同性别患者TLR8基因4个SNP位点等位基因频数分布 男性患者TLR8基因4个SNP位点的等位基因频数分布见表2。女性患者TLR8基因4个SNP位点的等位基因频数分布见表3。病例组与对照组不同性别患者之间TLR8基因4个SNP位点多态性的等位基因频数分布比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

图1 TLR8基因4个SNP位点的基因型Fig.1 Genotypes of four SNP sites on TLR8gene

表1 2组患者TLR8基因4个SNP位点基因型频数的分布Tab.1 Distribution of genotypic frequencies of four SNP sites on TLR8gene of patients in two groups［n（η／%）］

表2 2组男性患者TLR8基因4个SNP位点等位基因频数的分布Tab.2 Distribution of allelic frequencies of four SNP sites on TLR8gene of male patients in two groups ［n（η%）］

表3 2组女性患者TLR8基因4个SNP位点等位基因频数的分布Tab.3 Distribution of allelic frequencies of four SNP sites on TLR8gene in female patients in two groups ［n（η／%）］

3 讨 论

结核杆菌感染者发病因素复杂，以前的研究多集中于环境因素方面。研究［13－14］显示：在我国影响结核发病的环境因素主要包括精神压力、营养不良、并发其他感染（如HIV感染）和衰老等。随着结核病发病机理研究的不断深入和分子生物学技术的高速发展，遗传因素在结核病发病中的作用越来越受到人们的重视。有充分的证据［15－16］显示：遗传因素在决定宿主个体对结核分枝杆菌的易感性上起着重要的作用。

TRL8基因是结核杆菌感染肺部组织过程中的关键基因，研究［11］发现：该基因的某些位点变异在印尼人和俄国人与结核病的易感性有密切关系。本研究探讨该基因的4个SNP位点多态性在结核病患者人群中和其他肺病患者中分布的差异性。对我国东北地区700余名肺部疾病患者的TRL8基因4个位点基因型的分析研究显示：该基因致病基因型（rs 3764879：C；rs3788935：A；rs3761624：A；rs3764880：A）在我国北方汉族人群肺结核病患者的分布为12%～16%，而在印尼人结核患者中为30%以上，在俄国人结核患者约为80%［11］。因此我国东北汉族人TRL8基因4个SNP位点的致病基因型的分布频数远低于上述国家，说明不同种族之间存在TRL8基因多态性分布差异。

本研究结果显示：TLR8基因4个SNP位点等位基因频数分布在结核患者与其他肺病患者之间差异无统计学意义，在不同性别患者中等位基因分布在二类患者之间差异也无统计学意义。TLR8基因作为与肺部疾患有密切关联的基因［17－20］，其4个SNP位点可能为所有肺病包括肺结核病的易感基因，即具有相同TLR8基因多态性遗传背景的患者，在不同环境因素的影响下可发生不同的肺部疾患。但上述的推测还需进一步的实验研究证明。

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Association analysis between polymorphism of TLR8gene and tuberculosis in Han population from Northeast China

LI Tong1，ZHANG Juan1，ZHANG Gui－zhen2，XU Jiang－tao1，ZHANG Ping1，JIANG Jun1，SUN Xiu－hua1，DU Zhen－wu2
（1.Department of Accident and Emergency，Shenyang Chest Hospital，Shengyang 110044，China；2.Central Research Laboratoty，China－Japan Union Hospital，Jilin University，Chuangchun 130033，China）

Objective To explore the correlation between single nucleotide polymorphism（SNP）of four sites on the Toll－like receptor 8 （TLR8）gene and tuberculosis in Han population from Northeast china，and to analyze the differences of genotypic frequency distribution between tuberculosis and other lung diseases patients.Methods A case－control study for 368cases of tuberculosis patients（case group）and 355other lung disease patients（control group）in Han population from Northeast China was established.The ligase specific detection technology was carried out to detect the genotypes of rs3764880，rs3761624，rs3788935，and rs3764879sites on TLR8gene in two groups.The distribution of allelic frequencies（GF）of the patients in two groups were compared and the odds ratio（OR）and the distribution of genotypic frequencies of the patients with different gender were analyzed.Results The allelic frequency distribution of rs3764880，rs3761624，rs3788935，and rs3764879sites on TLR8 gene between case group and control group was not statistically significant（P＞0.05）；the distribution of allelic frequency of four sites on TLR8gene of patients with different gender between case group and control group was not statistically significant（P＞0.05）.Conclusion The distributions of SNP at rs3764880，rs3761624，rs3788935，and rs3764879sites on TLR8gene are same between tuberculosis and other lung disease patients in Han population from Northeast China，which indicates that there is no association between SNP of four sites on TLR8gene and the occurrence of tuberculosis.

Toll－like receptor 8gene；single nudeotide polymorphism；tuberculosis

R563.9

A

1671－587Ⅹ（2013）03－0584－04

10.7694／jldxyxb20130333

2012－10－19

辽宁省沈阳市科技局科技攻关项目资助课题 （F10－149－9－26）

李 彤 （1969－），女，辽宁省营口市人，副主任医师，医学硕士，主要从事肺结核病分子病理学研究。

杜珍武 （Tel：0431－84995423，E－mail：phdzhw＠yahoo.com.cn）