两种防脱片剂在免疫组化染色中的应用比较

张婉仪 胡垚 叶勇

免疫组化（IHC）是应用抗原抗体反应的原理，通过化学反应显色确定组织细胞内抗原对其进行定位、定性及定量的技术，由于IHC步骤多、环节多、影响因素多，要求组织切片在实验过程中要有较高的耐受能力，避免脱片的发生，耗损人力物力，延误了实验结果准确诊断，故防脱片是保证病理诊断工作的关键[1-2]。笔者为了探讨免疫组化染色中防脱片的方法，通过对50 份切片进行处理观察，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 材料 选自我院50 例经10%中性甲醛液固定的乳腺组织、宫颈组织、前列腺组织、脱钙骨组织、细胞块组织、肠癌组织、淋巴组织、甲状腺组织等，每个病例挑选同一个组织块进行切片两张，分成两组。对照组50 张切片，观察组50 张切片。两组标本比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 仪器和试剂盒 免疫组化试剂盒、多聚赖氨酸、APES由北京中杉金桥生物技术开发有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 防脱玻片的制备 选择同一批高清洁度免洗载玻片。对照组处理方法： 将载玻片浸泡在2%的APES无水乙醇溶液中1～2 min，再分别在无水乙醇（Ⅰ）（Ⅱ）（Ⅲ）浸洗1～2 min，洗去未结合的APES，置60℃烤干1 h，备用。观察组处理方法：将载玻片浸泡在0.01%多聚赖氨酸水溶液中5 min，取出置60℃烤干1 h或室温晾干备用。

1.3.2 切片 组织块经脱水包埋后，连续切片2 张，厚4 μm，分别用APES及多聚赖氨酸玻片捞片，置65℃烤箱烤片2～3 h。

1.3.3 显色 切片脱蜡至水，蒸馏水洗，PBS洗，分别采用高压锅热修复、微波热修复和胃酶消化3 种抗原修复方式后，PBS洗3 min/2 次，H2O2室温10 min，PBS洗5 min/2 次，山羊血清室温封闭30 min，PBS洗5 min/2 次，滴加一抗抗体并4℃孵育过夜，PBS洗5 min/3 次，滴加相应二抗，37℃孵育15 min，PBS洗5 min/3 次，滴加相应三抗，37℃孵育15 min，PBS洗5 min/3 次，加DAB显色液，自来水冲洗、复染、脱水、透明、封片。

1.4 脱片判断标准 轻度脱片：切片边缘轻度卷曲至脱落面积＜10%；中度脱片：10%＜切片脱落面积＜80%；重度脱片：切片脱落面积＞80%。

1.5 统计学方法 所有数据采用SPSS 18.0 统计学软件进行处理，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，计数资料采用χ2检验或秩和检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

观察组完整贴片率为100%，对照组完整贴片率为92%，观察组完整贴片率优于对照组，差异有统计学意义（P=0.023＜0.05），见表1。

表1 两组脱片情况比较

3 讨论

由于病理组织常规使用的甲醛固定剂可以造成蛋白质的交联，即在氨基酸分子间形成亚基桥从而造成部分或大部分抗原结合位点（抗原决定族）的封闭，通过抗原热修复可以使抗原结合位点重新暴露[3]，从而增加免疫组化染色的强度。免疫组化实验过程中，步骤多、环节多，通常会用到高压热修复、微波热修复和酶消化等方式进行抗原修复，防止组织因高温、高压和酶消化等的外力作用而出现脱片现象，是保证及时准确的实验结果的重要条件。

本研究结果显示，多聚赖氨酸防脱剂有理想效果，多聚赖氨酸其分子结构中所具有的多个阳离子集团与组织上阴离子相互作用会产生较强的粘合力，可有效防止免疫组化、原位杂交等过程中的脱片现象[4-6]。采用浸泡方法进行多聚赖氨玻片的制备，可以使多聚赖氨酸水膜在玻片均匀分布，通过长时间的浸泡，使玻片表面充分与试剂接触，产生良好的防脱片效果[7]。组织粘附于玻片后完全可以耐受多重物理化学环境剧变，可运用于常规免疫组化、冷冻免疫组化、分子实验技术等，且易于标准化制作，操作简单，节约试剂。

笔者认为免疫组化防脱片还应注意几点：(1)在进行多聚赖氨酸浸泡过程中容器应选择塑料制品，避免玻璃器皿；(2)烤片时间以1 h为宜，不可过久，烤干即可；(3)多聚赖氨酸工作液不使用时置于4℃环境保存，同批工作也循环使用次数不超过3 次，保留时间短于1 个月。

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