虚燥更平散对更年期高血压大鼠血压及血压变异性影响的研究

林 雪，周 斌，甘庆雷

更年期高血压属于特殊人群的高血压，以临床症状多、血压升高且血压变异性(blood pressure variability,BPV)大为主要特点[1]，BPV增大与靶器官损伤的发生相关，降低BPV可减少对靶器官的损害。为此，本研究采用摘除自发性高血压大鼠(SHR大鼠)卵巢的方法建立更年期高血压大鼠复合实验动物模型，用虚燥更平散对更年期高血压大鼠进行干预，观察大鼠血压、BPV及血清儿茶酚胺(catecholamine,CA)、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)、神经降压素(neurotensin,NT)、雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡生成激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)的水平变化，探讨虚燥更平散对更年期高血压大鼠血压、BPV的影响及其可能机制。

1　材料与方法

1.1实验动物选取由北京维通利华实验动物技术有限公司提供的近交系SPF级SHR雌性大鼠55只，WKY雌性大鼠10只，周龄11周，每只体质量(230±20)g。大鼠置于新疆医科大学第一附属医院实验动物科学研究部实验动物房，分笼饲养(干笼)，每笼3只。控制室温(21±2)℃，湿度30%～70%，通风1～2次/d、2 h/次，光照12 h/24 h，避免噪声及其他因素干扰。大鼠喂养通用饲料，饮用自来水，不限制进食量、饮水量。

1.2药物与制剂虚燥更平散(6 g/袋，批号ZJ20100010)，由新疆维吾尔自治区中医医院制剂室提供；缬沙坦胶囊(80 mg/粒，批号：X0355)，由新疆维吾尔自治区中医医院西药房提供；人工气候箱(RQH-250型)，由上海精宏实验设备有限公司提供；动物无创血压测量仪(BP-100A型)，由成都泰盟科技有限公司提供；大鼠血清CA、NPY、NT、E2、FSH、LH ELISA检测试剂盒，由上海西唐生物科技有限公司提供。

1.3方法

1.3.1实验动物分组所有大鼠购回后分笼适应性喂养1周。剔除体质量偏离均数过大的SHR大鼠7只、Wistar大鼠4只。剩余的48只SHR大鼠，按体质量大小依次编号1、2、3……48；查阅随机数字表，将所得随机数字依其出现之先后，按1、2、3……48的顺序排列；将末位数为单数的对应序号的大鼠分配至：中药组6只、西药组6只、更年期高血压对照组(空白对照组)12只、假手术组12只，将末位数为偶数的对应序号的大鼠分配至SHR组12只。另选取WKY大鼠6只作为正常对照(WKY组)。6组大鼠的体质量、血压〔WKY组除外，SHR组(184.2±1.9)mm Hg,假手术组(184.8±2.8)mm Hg,空白对照组(186.9±1.4)mm Hg,西药组(183.1±2.5)mm Hg,中药组(183.8±1.6)mm Hg〕水平间有均衡性。

1.3.2更年期高血压大鼠模型的制备[2]氯胺酮+阿托品+地西泮(0.75 ml/100 g)腹腔注射麻醉，仰位固定大鼠，剪除大鼠腹毛，用碘酒及75%乙醇消毒剪毛处皮肤，于无菌条件下沿腹部正中线自下而上做纵行切口，长1～2 cm，用眼科镊夹出卵巢，分离脂肪团，即可见黄红色的卵巢；结扎输卵管峡部，切除卵巢，将脂肪组织和子宫角送回腹腔内，同法摘除对侧卵巢，两侧摘除后，将腹膜与肌层分层缝针，用间断法缝合皮肤，于切口处滴加青霉素液(1 ml，20 U/ml)4～5滴，剩余药液肌肉注射。术后连续3 d，1次/d腹腔注射青霉素(1 ml/100 g)，以防术后感染。假手术组只切除卵巢周围的脂肪组织，不切除卵巢，将卵巢和子宫角送回腹腔内，同法摘除对侧卵巢周围的脂肪组织。造模过程中未出现死亡及造模失败大鼠。

1.3.3更年期高血压大鼠成模标准[3]去势1周后，从以下3方面来判定更年期高血压大鼠复合实验动物模型是否成功。

1.3.3.1去势大鼠阴道脱落细胞学检查评价通过阴道脱落细胞学检查，分析大鼠是否有动情周期生理性变化。大鼠动情周期根据阴道脱落细胞学检查结果可分为4期：(1)动情间期：主要是大量多核白细胞，也有少量上皮细胞；(2)动情前期：有大量上皮细胞，胞质呈粒状，尚有少量角化(无核)的上皮细胞，但无白细胞；(3)动情期：主要是大量角化上皮细胞，形状大而不规则，间有少量上皮细胞；(4)动情后期：有大量白细胞，亦有融合的角化上皮细胞。

1.3.3.2血清性激素水平评价比较SHR组、假手术组、空白对照组血清E2、FSH、LH、睾酮(testosterone,T)、孕酮(progesterone,P)水平差异。

1.3.3.3血压水平评价比较假手术组、空白对照组大鼠手术前后血压差异。

1.3.4给药方法给药剂量：1 ml·100 g-1·d-1，按人/鼠公斤体质量的等效剂量换算公式换算(《药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算》)。给药时间：于造模成功后每天上午10:00～11:00给药1次，实验设定为60 d。给药途径：灌胃给药。中药组灌胃虚燥更平散；西药组灌胃缬沙坦胶囊；余组灌胃0.9%氯化钠溶液。

2　结果

2.1更年期高血压大鼠模型评价

2.1.1阴道脱落细胞学评价大鼠去势10 d后，所有去势大鼠底层细胞均在50%以上，阴道脱落细胞学检查仅可见大量白细胞，亦有融合的角化上皮细胞，少有新生成的上皮细胞(见图1)，说明去势大鼠已无动情周期变化(符合更年期特征)，证明去势彻底，造模成功。

注：图1-1更年期高血压大鼠卵巢摘除前，图1-2更年期高血压大鼠卵巢摘除后第5天，图1-3更年期高血压大鼠卵巢摘除后第7天，图1-4更年期高血压大鼠卵巢摘除后第10天，图1-5 SHR大鼠，图1-6 假手术组大鼠
图1大鼠阴道脱落细胞学检查结果(光镜×200倍)
Figure1Results of vaginal smear cytology

2.1.2血清性激素水平评价SHR组、假手术组、空白对照组大鼠血清E2、FSH、LH、T、P水平间差异均有统计学意义(P<0.05)，与假手术组、SHR组比较，空白对照组大鼠血清E2、T、P水平明显下调，FSH、LH水平明显上调，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.1.3血压水平评价SHR组、空白对照组大鼠的血压值手术前后比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.2虚燥更平散对更年期高血压大鼠血压及血压变异性的影响血压值组间比较，差异亦有统计学意义(F组间=36.547，P<0.05)；天数间对比，差异有统计学意义(F天数=41.626，P<0.05)；天数与组别间交互作用对比，差异有统计学意义(P<0.05)。在治疗前各组(WKY组除外)血压值对比，差异无统计学意义(P>0.05)；各组治疗后5～60 d同一时间点血压值对比，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

6组大鼠的血压SD间差异有统计学意义(P=0.023)，与空白对照组比较，中药组、西药组血压SD明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；中药组、西药组、WTY组大鼠的血压SD比较，差异无统计学意义(P>0.05)；空白对照组、SHR组、假手术组的血压SD比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表1　SHR组和假手术组及空白对照组大鼠血清性激素水平比较Table 1　Comparison of serum sex hormone levels of rats in SHR group,fake surgery group and menopause hypertension control group

注：与假手术组和SHR组比较，*P<0.05；E2=雌二醇，FSH=促卵泡生成激素，LH=促黄体生成激素，T=睾酮，P=孕酮

样本假手术组手术前　　　手术后空白对照组手术前　　　手术后1187 2±4 7180 3±2 9187 6±3 2184 2±3 02189 2±2 8186 5±2 8193 5±3 5182 4±2 63195 5±3 4187 8±3 3195 3±2 5182 5±3 04187 3±3 6178 3±3 8194 5±3 8184 0±4 15192 2±4 3186 5±2 4190 3±4 0183 3±3 66189 3±3 5180 1±3 8192 6±3 3185 1±3 1t值1 4721 306P值0 0850 089

血压WKY组SHR组假手术组空白对照组西药组中药组治疗前118 3±3 2184 2±1 9184 8±2 8186 9±1 4183 1±2 5183 8±1 65d120 3±7 1181 6±6 2181 4±5 4187 2±2 1127 6±9 3138 7±11 510d116 5±7 5175 7±1 5176 0±2 4175 7±1 5121 0±8 2131 0±8 215d122 6±8 2180 5±5 1180 4±5 4185 5±5 1127 1±8 8139 3±11 020d122 9±5 4179 6±4 4179 6±3 2184 6±4 4127 4±6 2137 4±6 225d118 8±8 6180 1±6 0182 1±4 5184 0±4 5123 8±8 6134 9±9 730d116 3±4 9178 4±5 1178 4±4 7182 8±4 5119 5±7 2129 5±7 235d119 1±5 6179 1±3 6179 8±3 2183 5±2 8123 7±6 0133 1±6 640d119 9±5 3177 7±3 2177 9±2 6182 7±3 2124 9±5 2132 9±5 245d121 2±5 4179 6±2 4179 6±1 9184 6±2 4125 7±6 2135 7±6 250d117 1±5 5177 1±1 5175 6±1 6182 1±1 5122 1±5 5129 0±6 655d115 1±4 6176 8±1 4175 9±1 3181 8±1 4120 1±4 6126 5±6 960d117 6±4 4176 8±4 0177 3±3 9181 2±3 3122 6±4 4129 5±5 8

表4　6组大鼠血压变异性比较Table 4　Comparison of blood pressure variability in six groups

注：SD=标准差；与空白对照组比较，△P<0.05

2.3虚燥更平散对更年期高血压大鼠血清神经递质指标的影响6组大鼠的血清CA、NPY、NT水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较，中药组、西药组CA、NPY、NT水平上调，差异有统计学意义(P<0.05)；中药组与西药组CA、NPY、NT水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表5。

表5　6组大鼠血清神经递质指标水平比较Table 5　Comparison of serum neurotransmitters in six group rats

注：CA=儿茶酚胺，NPY=神经肽，NT=神经降压素；与空白对照组比较，▲P<0.05

2.4虚燥更平散对更年期高血压大鼠血清内分泌指标的影响6组大鼠的E2、FSH、LH水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较，中药组的E2水平下调，FSH、LH水平上调，差异有统计学意义(P<0.05)；西药组与空白对照组的E2、FSH、LH水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。SHR组与假手术组的E2、FSH、LH水平比较，差异亦均无统计学意义(P>0.05)，见表6。

表6　6组大鼠血清内分泌指标水平比较Table 6　Comparison of serum endocrine in six groups

注：与空白对照组比较，▲P<0.05

3　讨论

BPV是指一定时间内的血压波动程度，是体内神经-内分泌动态调节综合平衡的结果，是人类血压最基本的生理特征之一[4]。自主神经系统是影响和调控BPV的重要机制，BPV主要反映交感和迷走神经对心血管调节的动态平衡[5]，其次中枢神经系统及体液内分泌也是参与和形成BPV的主要机制。

目前针对更年期高血压发病内在机制的研究未涉及动物实验研究，而更年期综合征、高血压等疾病实验动物模型的建立为更年期高血压病复合实验动物模型的研究提供了极其宝贵的经验。SHR大鼠与人类原发性高血压病形成机制有相似之处，血压的升高均与外周血管阻力的增加有关，且对抗高血压药物有反应，因此，它是人类原发性高血压病研究及高血压病药物筛选较为理想的动物模型[6]。本实验造模结果显示，去势大鼠已无原有动情周期生理性变化，去势彻底；与假手术组、SHR组比较，更年期高血压大鼠血清E2、T、P水平明显下调，FSH、LH水平明显上调，符合更年期特征。更年期高血压大鼠手术前后血压无明显变化，提示摘除卵巢对SHR大鼠的刺激并未影响其血压变化，从另一角度佐证了更年期卵巢功能急剧下降，导致神经、内分泌等内环境紊乱，造成血压波动增大的病理改变，从而确定更年期高血压实验动物模型造模成功。另一方面异常BPV能在血管壁上形成异常的环形张力和纵向剪切力，直接损害血管内皮，引起血管结构和功能的改变，Sander等[7]研究显示，收缩压变异是颈动脉内膜中层厚度(IMT)进展的最好预测指标。本研究结果显示，与空白对照组比较，中药组、西药组血压明显降低，BPV明显减小，提示虚燥更平散对更年期高血压大鼠有降低血压，减少BPV的作用。究其原因考虑，更年期高血压大鼠交感神经张力增高，血压易受应激因素影响而波动，虚燥更平散所含中草药具有补益冲任、疏肝解郁、养血安神、宁心润燥之功效，能够透入中枢神经系统，通过阻滞中枢β受体，使兴奋性神经元活动减弱，造成外周交感神经张力降低，从而降低血压。灌服虚燥更平散后，中药组BPV降低，考虑虚燥更平散可以调节更年期高血压大鼠中枢神经功能，增加动脉压力反射敏感性，提高缓冲和平衡血压波动的能力，从而使BPV平稳降低。

基于新疆地药、民药组方而成的虚燥更平散治疗更年期高血压，经过多年临床应用，达到满意疗效，现已成为我院院内制剂。本研究结果进一步验证，虚燥更平散可有效降低更年期高血压大鼠的血压、减少BPV、调节更年期高血压大鼠神经递质及内分泌指标；建立更年期高血压大鼠复合实验动物模型，从实验研究入手，可以进一步研究更年期高血压的发病机制，为中医药防治更年期高血压奠定分子生物学基础。

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3洪润肖.补糖干预对动情周期抑制大鼠HPT轴及HPA轴结构和功能的影响[D].上海体育学院,2011年.

4Mancia G,Grassi G.Mechanisms and clinical implications of blood pressure variability[J].Cardiovasc Pharmacol,2000,35(7):515-519.

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