缬沙坦对不稳定型心绞痛患者CD4+CD28－T淋巴细胞及预后的影响

杨 斌 谭丽娟 郑春燕 苑海涛(青岛大学医学院附属医院心内科，山东 青岛 266003)

缬沙坦对不稳定型心绞痛患者CD4+CD28－T淋巴细胞及预后的影响

杨 斌 谭丽娟 郑春燕 苑海涛1(青岛大学医学院附属医院心内科，山东 青岛 266003)

目的研究缬沙坦对不稳定型心绞痛患者外周血中CD4+CD28－T淋巴细胞的比例及其相关细胞因子IFN-γ的影响。方法将85例经冠状动脉造影证实的不稳定型心绞痛患者随机分为常规治疗组和缬沙坦治疗组。采用流式细胞仪检测42例常规治疗组和43例缬沙坦治疗组患者治疗前及治疗6个月后外周血中CD4+CD28－T淋巴细胞的数量，以酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定治疗前后血浆中干扰素-γ(IFN-γ)水平，并同时观察两组患者出院后6个月内因不稳定型心绞痛再次入院、急性心肌梗死、血运重建及死亡等主要心血管事件(MACE)情况。结果两组患者在治疗6个月后CD4+CD28－T淋巴细胞的比例及血浆中IFN-γ水平均较治疗前下降(P＜0.05)，缬沙坦治疗组下降较常规治疗组更为明显(P＜0.05)。缬沙坦治疗组6个月内的主要心血管事件显著减少(P＜0.05)。结论缬沙坦可能通过降低不稳定型心绞痛患者外周血中CD4+CD28－T淋巴细胞的比例及血浆中IFN-γ的水平，从而达到稳定斑块，改善预后的作用。

不稳定型心绞痛;T淋巴细胞;缬沙坦;干扰素-γ

不稳定型心绞痛(UAP)的发病机制是冠状动脉粥样斑块的破裂、出血，继而血栓形成，引起冠状动脉不完全阻塞，而动脉粥样斑块的破裂与炎症和免疫反应有密切的关系〔1，2〕，新近研究表明 CD4+CD28－T淋巴细胞在VAP患者外周血中出现异常扩增(增加10%)而在稳定型心绞痛和正常人中这种T淋巴细胞的表达小于1%，表明CD4+CD28－T淋巴细胞异常增殖可能是其发病机制之一〔3〕。调节CD4+CD28－T淋巴细胞的比例有可能稳定斑块，减少临床缺血事件的发生。已有研究证明血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)能够调节T细胞亚群的失衡〔4〕，而本研究目的是观察缬沙坦能否降低UAP患者外周血CD4+CD28－T淋巴细胞的比例及其对UAP患者预后的影响。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2009年10月至2011年2月，本院心内科收治的85例UAP患者，其中男63例，女22例，年龄(61±7.5)岁，符合Braunwald分级Ⅱ或Ⅲ级，入院前1个月内出现过静止性胸痛，有一过性的ST段压低或T波倒置，CK-MB和CTnT升高小于正常上限的2倍。排除合并严重心力衰竭(LVEF＜40%)、高血压、风心病、心肌病、严重的肝肾功能不全、风湿系统疾病、严重感染、恶性肿瘤及应用炎症抑制物如非甾体类抗炎药或类固醇等的患者。将上述85例患者随机分为两组:常规治疗组42例(男30例，女12例)和缬沙坦(代文)组43例(男33例，女10例)，所有患者均行冠状动脉造影检查显示至少有1支血管直径狭窄超过50%。两组患者的年龄、性别和冠心病危险因素均无显著性差异。见表1。

1.2 给药方法 常规治疗组给予常规药物治疗(阿司匹林、低分子肝素、β-受体阻滞剂、他汀类、硝酸酯类和钙离子拮抗剂等药物)，缬沙坦治疗组在常规治疗基础上加用缬沙坦(valsartan，代文，诺华公司产品)80 mg，1次/d，连续服药6个月，用药期间注意观察肾功能和血钾及血压的变化。

1.3 主要试剂和仪器 所有流式试剂均购于法国Immunotech公司，抗体均为鼠抗人单克隆抗体，主要试剂及产品编号如下:PE－CD4+:Im0499，FITC－CD28－:Im1236，同型对照 PE/FITCIgG1:Im 0670/Im 0639，溶血素Optilyse:PNA11894;BECKMAN COULTER公司的流式细胞仪 EPICS XL-4。ELISA试剂盒(IFN-γ)购于北京中杉金桥生物技术有限公司，IFN-γ最低检测浓度为8 pg/m l。

表1 两组患者一般临床资料的比较(±s)

表1 两组患者一般临床资料的比较(±s)

指标 常规治疗组(n=42)缬沙坦组(n=43)59±6 61±5性别(男/女) 30/12 33/10吸烟史(吸/不吸) 25/17 30/13糖尿病(有/无) 26/16 28/15家族史(有/无) 27/15 29/14总胆固醇(mmol/L) 4.75±0.62 4.92±0.57低密度脂蛋白胆固醇(mmol/L) 3.53±0.42 3.35±0.86高密度脂蛋白胆固醇(mmol/L) 1.12±0.28 0.97±0.35甘油三酯(mmol/L)年龄(岁)1.47±0.59 1.62±0.43

1.4 标本制备 所有患者于服药前及服药6个月后于清晨空腹抽取肘静脉血5 m l(EDTA抗凝)，其中2 ml用于流式细胞检测，3 ml用于细胞因子(ELISA法)测定。

1.5 流式细胞仪检测 应用BECKMAN COULTER公司的EPICSXL-4流式细胞仪，通过前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)设门选定分析的目的群体淋巴细胞，每个测定管分析10 000个淋巴细胞，数据处理应用SystemⅡ3.0分析软件。以散点图显示细胞表达，以百分比表示细胞数量。

1.6 血浆细胞因子的测定 严格按照ELISA试剂盒说明操作进行，具体步骤如下:取待测血浆100μl加入已被IFN-γ单克隆抗体包被的96孔板，置37℃温箱孵育120 min，用洗涤液洗板6次，再加入生物素化的抗人IFN-γ的抗体50μl，将反应板充分混匀后置37℃温箱孵育60 min后用洗涤液洗板6次。每孔中再加入辣根过氧化物酶标记的Strepavidin 100μl置37℃温箱孵育60 min后洗板6次，加OPD底物工作液100μl，置37℃暗室反应10 min，最后每孔加 50μl终止液混匀。在492 nm处测OD值，并根据标准曲线求出IFN-γ的浓度。

1.7 两组患者出院后6个月内主要心血管事件的情况 记录治疗后两组UAP患者在6个月内主要心脏不良事件(MACE)的发生情况，主要包括不稳定型心绞痛再次入院、急性心肌梗死、血运重建及死亡等。

1.8 统计学处理 采用SPSS11.5软件，计量资料以±s表示，计数资料以百分率表示，分别行t检验和χ2检验。

2 结果

2.1 两组患者治疗前后外周血中CD4+CD28－T淋巴细胞的比较 两组患者治疗前外周血中CD4+CD28－T淋巴细胞的比例无显著性差异(10.1%vs 9.01%，P＞0.05)。两组患者治疗后外周血中CD4+CD28－T淋巴细胞的比例较治疗前降低(P＜0.05)，但缬沙坦组改变较常规治疗组更为明显(4.84%vs 1.51%，P＜0.05)。

2.2 两组患者治疗前后血浆中IFN-γ水平的比较 常规治疗组和缬沙坦组患者治疗前血浆中IFN-γ水平无显著性差异〔(148±11)vs(112±7)pg/ml，P ＞0.05〕。两组患者治疗后血浆中IFN-γ水平较治疗前降低〔(146±9)vs(93±6)pg/m l，P＜0.05〕，但缬沙坦组改变较常规治疗组更为明显(P＜0.05)。

2.3 两组患者治疗6个月后MACE事件发生率的比较 6个月后常规治疗组发生MACE事件10例(23.8%)，但缬沙坦组仅有4例(9.3%)差异有显著性(P＜0.05)。

2.4 两组患者血压的比较 两组UAP患者血压在治疗前无明显差异(P＞0.05)，在治疗后均有所下降(P＜0.05)，但两者相比差异无显著性(P＞0.05)。见表2。

表2 两组患者血压的变化(±s，mmHg)

表2 两组患者血压的变化(±s，mmHg)

与治疗前比较:1)P＜0.05

组别 n SBP治疗前 治疗后常规治疗组 42 125±13 117±921) 82±7 76±521)治疗后DBP治疗前缬沙坦组 43 127±111 119±1 0231) 83±61 75±8231)

3 讨论

许多证据表明不稳定斑块炎症的发生发展和T淋巴细胞活化及促炎症细胞因子的作用有关〔5，6〕。Liuzzo等〔7〕在 UAP患者外周血中发现了CD4+CD28－表型的单克隆T淋巴细胞的异常增殖，并且与患者的发病、再发及预后有密切的关系〔3，7〕，提示CD4+CD28－T淋巴细胞亚群的增多可能是独立于传统心血管危险因子以外的危险因素。

CD4+CD28－T淋巴细胞能产生高水平的IFN-γ从而活化单核巨噬细胞，加速单核巨噬细胞对动脉粥样斑块的浸润;活化的单核巨噬细胞也大量分泌TNF-α等促炎症细胞因子以及基质金属蛋白酶等，从而损伤血管内皮细胞降低斑块的稳定性〔8〕;另一方面，UAP患者的CD4+CD28－T淋巴细胞有溶细胞毒作用，能够在体内杀伤内皮细胞〔6〕;CD4+CD28－T淋巴细胞也可通过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与病变中表达CCR5(又称CD195，为一种趋化因子受体)的血管平滑肌细胞结合诱导血管平滑肌的凋亡〔9〕，从而导致动脉粥样硬化斑块的不稳定性。最近的研究证实应用细胞因子抗体(抗TNF-α)在体外能够降低CD4+CD28－T淋巴细胞的比例，但是能否给不稳定型心绞痛患者带来临床益处尚无定论〔10〕。

本实验表明UAP的常规治疗包括他汀类等药物可抑制UAP患者体内的炎症和免疫反应。缬沙坦具有降压以外的抗炎和免疫抑制作用，能够降低CD4+CD28－T淋巴细胞的比例，减少IFN-γ的产生。缬沙坦通过抗炎和免疫调节作用，有稳定UAP患者粥样斑块，改善其临床症状和预后的作用。CD4+CD28－T淋巴细胞活化、增殖以及向动脉粥样硬化斑块的迁徙导致动脉粥样硬化斑块的不稳定是一个复杂的免疫反应过程，多种细胞因子及效应分子参与其中。我们仅通过临床观察到血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂确实可以降低UAP患者外周血中CD4+CD28－T淋巴细胞的比例，其具体机制有待深入研究。

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Effects of valsartan on CD4+CD28－T lymphocyte and IFN-γ in patients w ith unstable angina pectoris

YANG Bin，TAN Li-Juan，ZHENG Chun-Yan，et al.
Department of Cardiology，the Affiliated Hospital of M edical College Qingdao University，Qingdao 266003，Shandong，China

Ob jective To investigate the effects of valsartan on CD4+CD28－T lymphocytes and its cytokine in patients with unstable angina pectoris(UAP).Methods85 UAP patientswere recruited and divided into two groups randomly:conventional group(n=42)and valsartan group(n=43).The quantity of CD4+CD28－T lymphocytes of two groupswas detected by flow cytometry and the level of IFN-γwasmeasured by ELISA atbaseline and 6 months later.Major adverse cardiovascular events(MACE)in two groupswere observed after6 months.ResultsThe frequency of CD4+CD28－T lymphocytes and the levels of IFN-γ in two groups were all lower than those of baseline level(P﹤0.05)and more reduced in valsartan group compared with those of conventional group(P﹤0.05).MACE in valsartan group was significantly improved in 6months(P﹤0.05).ConclusionsValsartan could reduce frequency of CD4+CD28－T lymphocytes and the levels of IFN-γin patients with UAP.Thismay contribute to the stability of atherosclerotic plaque and improvement ofmyocardial ischemia.

Unstable angina;T lymphocyte;Valsartan;Interferon-γ

R541.4

A

1005-9202(2013)05-0993-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2013.05.001

国家自然基金资助(81070188);山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2009YY027)

1 山东省立医院心内科

苑海涛(1971-)，男，主任医师，硕士生导师，主要从事心血管免疫学研究。

杨 斌(1979-)，男，主治医师，硕士，主要从事心血管免疫学研究。

〔2011-10-21收稿 2012-05-20修回〕

(编辑 曹梦园)