卡洛芬注射液抗炎、镇痛效果及皮肤刺激性观察

邱 梅，郝智慧，沈 巍，蒋皓静，马丰英

(1.青岛康地恩药业股份有限公司，山东青岛 266061;2.青岛农业大学化学与药学院，山东青岛 266111)

卡洛芬是美国辉瑞公司于20世纪70年代开发的高效动物用抗炎药，由于其抗炎效果好，副作用小，在美国、加拿大和欧洲多个国家已获得广泛应用。美国食品药物管理局(FDA)兽药中心(CVM)已批准用于犬的高效COX－2选择性抗炎药。本实验室研制的新一代非甾体抗炎镇痛药物——卡洛芬注射液(商品名:痛立止)，其有效成分为卡洛芬，主要用于治疗犬猫的风湿、类风湿性关节炎，以及由炎症引起的疼痛和其他原因引起的疼痛等。分别采用不同有机溶剂研制了两种卡洛芬注射液，其中卡洛芬注射液I采用甲醛缩甘油和1，2－丙二醇作为有机溶剂，卡洛芬注射液II则选用二甲基乙酰胺和1，2－丙二醇作为有机溶剂，为了验证不同处方研制的卡洛芬注射液的抗炎、镇痛效果及对皮肤刺激性，进行了以下研究。

1 材料与方法

1.1 实验药物 受试药物:卡洛芬注射液I(含量5%，批号20110926)、卡洛芬注射液II(含量5%，批号20110926)，均由青岛康地恩药业股份有限公司提供;对照药物:托芬那酸注射液(含量4%，批号9A2164Q)，法国威隆公司产品。

1.2 实验试剂 生理盐水(0.9%，批号10050876，山东长富洁晶药业有限公司)、冰醋酸(批号091015，天津市富宇精细化工有限公司)、二甲苯(批号20090930，莱阳市康德化工有限公司)、甲醛(批号20100512，莱阳市康德化工有限公司)。

1.3 实验动物 清洁级小鼠，体重18～22 g，青岛市药品检验所提供;Wister大鼠，体重180～220 g，青岛市药品检验所提供;新西兰兔，青岛宝依特实验动物中心提供。

1.4 实验方法

1.4.1 抗炎作用

1.4.1.1 对二甲苯致小鼠耳部炎症的影响 小鼠40只，体重18～22 g，雌雄各半，预饲7 d后，随机分为4组，具体分组见表1。每天一次，连续给药5 d，末次给药后0.5 h，将致炎剂二甲苯 0.1 mL 均匀涂于小鼠左耳两面，右耳作为对照，致炎15 min后将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓线剪下两耳，用直径8 mm打孔器分别在两耳的同一部位打下左右耳片，随即用电子天平称重，以两耳片重量之差作为炎性肿胀度，并计算肿胀抑制率，用肿胀抑制率表示药物抗炎强度。

1.4.1.2 对甲醛所致大鼠足趾肿胀的影响 取Wister大鼠24只，雌雄各半，随机分成4组，每组6只。具体分组情况见表1。每只大鼠每天给药1次，连续给药5 d，于末次给药0.5 h后，右后足趾部皮下注射2.5%的甲醛溶液0.05 mL。分别于致炎前及致炎后0.5、1、2、4 h 测量足趾厚度，以致炎前后足趾厚度之差作为炎性肿胀度，并计算肿胀抑制率。结果用F检验进行分析。肿胀抑制率(%)=(空白对照组平均肿胀度－药物组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度×100%。

1.4.2 镇痛作用

1.4.2.1 对小鼠热板实验的影响［1－2］将小鼠放于调节到(55±0.5)℃热板上(置于玻璃杯内，注意不要将烧杯拿出水浴锅，以保持其杯底温度一致)，记录其从接触热板到开始舔足的时间(s)作为给药前的痛阈值，剔除不舔足及给药前痛阈值大于30 s或者小于5 s的小鼠，观察截至时间为60 s。经筛选选出合格的40只小鼠(雌雄各半)，按体重随机分为4组，具体见表1，用于正式试验。

测量各组小鼠给药前的痛阈值，每只小鼠测2次，两次测痛间隔为5 min，取其平均值作为该动物的基础痛阈值。将受试小鼠按上述分组分别进行皮下注射给药。测量小鼠给药后0.25、0.5、1 h的热板反应时间。记录每组各时间点的痛阈值，采用t检验对各时间的结果进行数理统计。

1.4.2.2 对冰醋酸致小鼠扭体实验的影响［3－4］取40只小鼠(雌雄各半)，按体重随机分为4组，具体见表1。各组小鼠给药后0.25 h，每只腹腔注射0.7%的冰醋酸(10 mL/kg 体重，约0.2 mL/只)，以小鼠腹部内凹，伸展后肢，臀部抬高为准，记录各组小鼠第一次出现扭体反应的时间和15 min内发生扭体反应的次数。对各组间的试验结果采用t检验进行数理统计。扭体反应抑制率(%)=(空白组平均扭体次数一给药组平均扭体次数)÷空白组平均扭体次数×100%。

表1 试验分组及给药情况

1.4.3 对兔的皮肤刺激试验 20只兔子，于给药前24 h将背部两侧去毛，试验采用左右自身对比，一侧为生理盐水对照，另一侧为试验药物，具体分组见表2。给受试药物后，观察兔是否尖叫等疼痛反应及注射部位有无红肿、水肿等，或按压注射部位观察其有无不良反应。若有疼痛反应，则对受试药物分步试验:即将其主要有效成分及辅助成分分开注射给药，观察其刺激性。皮肤刺激性反应评分标准见表3及结果评价标准见表4。

表2 试验分组及给药情况

表3 皮肤刺激性反应评分标准

表4 结果评价标准

1.5 数据分析 采用SPSS11.5软件进行数据统计分析，检验其差异显著性。

2 结果与分析

2.1 抗炎作用

2.1.1 对二甲苯致小鼠耳部炎症的影响 结果如表5所示。表5结果显示，各给药组均能降低小鼠致炎耳部的肿胀度，且与生理盐水组差异显著(P＜0.05)，其中托芬那酸组的肿胀抑制率最高，为42.9%，其次为卡洛芬注射液I组。

表5 受试药物对二甲苯致小鼠耳部炎症的影响( ± s)

表5 受试药物对二甲苯致小鼠耳部炎症的影响( ± s)

注:*为与生理盐水组差异显著(P＜0.05)。

组别 剂量/(mL·kg－1)肿胀度/mm肿胀抑制率/%生理盐水组0.7 23.3 ±4.0 －卡洛芬注射液 I组 0.7 15.4 ±2.1* 33.9卡洛芬注射液 II组 0.7 17.9 ±1.5* 23.2托芬那酸注射液组 0.7 13.3 ±2.2*42.9

2.1.2 对甲醛所致大鼠足趾肿胀的影响 结果如表6所示。由表6可见，大鼠足趾致炎后0.5～4 h各给药组的肿胀度均低于生理盐水组，差异显著(P＜0.05);卡洛芬注射液II组在致炎后1～4 h的肿胀度较其他两组高，且与托芬那酸组差异显著(P＜0.05)。托芬那酸组和卡洛芬注射液I组的肿胀抑制率均在33.3%以上，好于卡洛芬注射液II组。

表6 受试药物对甲醛所致大鼠足趾肿胀的影响( ± s)

表6 受试药物对甲醛所致大鼠足趾肿胀的影响( ± s)

注:*为与生理盐水组差异显著(P＜0.05);a为与托芬那酸组差异显著(P＜0.05)。

组别 剂量/(mL·kg－1)致炎后不同时间足肿胀度(mm)/抑制率(%)0.5 h 1 h 2 h 4 h生理盐水组0.3 7.9 ±1.0 13.2 ±1.8 18.2 ±0.8 15.3 ±0.9卡洛芬注射液 I组 0.3 4.8 ±1.6* 8.5 ±1.1* 11.5 ±1.7* 10.2 ±0.7*39.2 35.6 36.8 33.3卡洛芬注射液 II组 0.3 5.5 ±1.3* 9.7 ±1.0*a 13.9 ±2.0*a 11.5 ±1.6*a 30.4 26.5 23.6 24.8托芬那酸注射液组 0.3 4.9 ±0.7* 7.3 ±0.8* 9.3 ±1.0* 8.4 ±0.9*37.9 44.7 48.9 45.1

2.2 镇痛作用

2.2.1 对小鼠热板实验 结果如表7所示。表7结果显示，卡洛芬注射液I组和托芬那酸组在15、30 min时均可有效延长小鼠热板痛阈值;卡洛芬注射液II组没有明显镇痛效果。各组间痛阈值差异不显著(P ＞0.05)。

2.2.2 受试药物对冰醋酸致小鼠扭体实验 结果如表8所示。由表8试验结果可知，卡洛芬注射液组对小鼠扭体的潜伏期没有明显改变，但扭体次数相对较少，扭体抑制率分别为34.7%和17.5%。托芬那酸组第一次扭体的潜伏期较长，与生理盐水组差异显著(P＜0.05)，扭体抑制率为42.6%。

表7 受试药物对小鼠热板实验的影响( ± s)

表7 受试药物对小鼠热板实验的影响( ± s)

组别 剂量/(mL·kg－1) 基础痛阈值/s 15 min痛阈值/s 30 min痛阈值/s 60 min痛阈值/s生理盐水组0.7 13.1 ±4.8 12.2 ±1.1 13.2 ±2.5 14.4 ±3.0卡洛芬注射液 I组 0.7 11.9 ±3.5 16.7 ±2.8 13.6 ±0.5 11.4 ±1.6卡洛芬注射液 II组 0.7 14.9 ±6.2 14.8 ±5.3 10.0 ±2.8 10.3 ±1.9托芬那酸注射液组0.7 13.2 ±1.3 14.6 ±5.8 16.4 ±2.9 13.1 ±1.3

表8 受试药物对小鼠扭体实验的影响( ± s)

表8 受试药物对小鼠扭体实验的影响( ± s)

注:*为与托芬那酸组差异显著(P＜0.05)。

组别 剂量/(mL·kg－1)潜伏期/min 15 min内扭体次数扭体抑制率/%生理盐水组 0.7 3.9 ±0.1 32.0 ±6.4*－卡洛芬注射液 I组 0.7 3.5 ±0.7*20.9 ±8.6 34.7卡洛芬注射液 II组 0.7 3.7 ±2.922.7 ±5.8 17.5托芬那酸注射液组0.7 8.7 ±3.7 12.0 ±8.1 42.6

2.3 受试药物对兔皮肤刺激观察结果 兔子皮肤注射给药后，各给药组均未出现尖叫、皮肤红肿等不良反应，按压其注射部位亦无不良反应。

3 讨论与结论

近年来，由于犬猫的生活习性及创伤引起的犬猫关节病越来越多。其中，犬的关节病主要有风湿性、类风湿性、外伤性、骨性及化脓性关节炎，猫的关节病主要为急性败血症性关节炎和慢性关节炎。目前，针对风湿性、类风湿性关节病的治疗以非甾体抗炎药为首选药物。兽用止痛药主要有非甾体抗炎止痛药、中枢性止痛药、麻醉性止痛药三大类，止痛效果以吗啡、杜冷丁等阿片类药最强，但其强大的镇痛背后是严重的依赖性和成瘾性，从而限制了其临床的应用。

卡洛芬是新一代非甾体抗炎镇痛药，具有强的抗炎、镇痛、解热作用，较阿司匹林、保泰松、对乙酰氨基酚、布洛芬强，还具有吸收快、副作用小的特点。

抗炎试验结果表明，各给药组均能降低小鼠炎症部位的肿胀度，且与生理盐水组差异显著(P＜0.05)，其中托芬那酸组的肿胀抑制率最高，其次为卡洛芬注射液I组。在对小鼠的热板试验以及对冰醋酸致小鼠扭体试验中，卡洛芬注射液I较卡洛芬注射液II有更好的抑制效果，说明选择甲醛缩甘油和1，2－丙二醇作为有机溶剂较选择二甲基乙酰胺和1，2－丙二醇效果好。研究发现配方药卡洛芬注射液I在短时间内对小鼠的镇痛效果较对照组托芬那酸强，但维持时间较托芬那酸短，表明本配方药效快，可以用于缓解动物急性疼痛性疾病。皮肤刺激试验结果表明本品的刺激性很小，无不良反应。

综上所述，研究所选用的配方药卡洛芬注射液I的抗炎、镇痛效果显著，安全无刺激性，具有广阔的应用前景。

［1］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1993:258－270.

［2］ 陈小野，张宇鹏，蒋小丽.热板法、醋酸扭体法疼痛模型寒、热属性的初步研究［J］.浙江中医学院学报，2005，29(4):46－51.

［3］ 周秋仁，郑小清.痛经舒胶囊抗炎镇痛的实验研究［J］.国际医药卫生导报，2005，11(10):28.

［4］ 景志杰，牛拴成，张轩萍，等.化痔灵片对小鼠实验性疼痛的镇痛作用［J］.山西医科大学学报，2006，37(1):19 －20.