高效液相色谱法测定蜂王浆含片中10－羟基-2-癸烯酸的含量

刘 蔚，宋卫中，宋景芳

（1.河南大学附属东京医院 药房，河南 开封475001；2.河南大学 中药研究所，河南 开封475001）

蜂王浆含片是由鲜王浆经冷冻干燥精制而成，具有抗疲劳、增强机体免疫力、养颜护肤［1］的功效。为更好地控制蜂王浆制剂中主要有效成分含量，采用高效液相色谱法，测定蜂王浆含片中的10－羟基-2-癸烯酸的含量［2－4］。

1 仪器、试药与试剂

高效液相色谱仪（美国 Beckman）；10-羟基-2-癸烯酸对照品（中国药品生物制品检定所）；蜂王浆含片（自制）；其他试剂均为分析纯。

2 含量测定

2.1 对照品溶液的制备

精密称定对照品10－羟基-2-癸烯酸适量，加无水乙醇制成质量浓度为0.05g／L溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取蜂王浆含片10片，研细，取细粉约1.0g，精密称定，置25mL锥形瓶中，加入预先混合的溶液（0.03mol／L 盐酸溶液1mL＋水2mL＋乙醇7mL），充分振摇，超声处理10min，过滤，移入50mL容量瓶中，用乙醇定容，作为供试品溶液。

2.3 色谱条件与系统适用性实验

选用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲醇－0.03mol／L盐酸溶液－水（55∶10∶5）为流动相，ODS柱（5mm×245mm，5μm），流量为1.0mL／min，检测波长为210nm，理论板数按10-羟基-2-癸烯酸峰计算不低于2 500。

2.4 线性关系实验

精密吸取10－羟基-2-癸烯酸对照品乙醇溶液2、6、10、14、18μL，按上述色谱条件测定，记录峰面积积分值，以积分值为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，求得回归方程：Y＝45.646 1 X＋0.136 3，r＝0.999 6。10-羟基-2-癸烯酸在0.110～0.660μg范围内线性关系良好。由于所得标准曲线系一条近乎过原点的直线，可采用外标一点法进行样品的含量测定。

2.5 精密度实验

按样品测定方式对同一供试品溶液重复测定5次，记录峰面积，RSD＝2.2%。

2.6 稳定性实验

分别于0.5、1、3、6、10h进行稳定性测定，结果表明，于10h内测定结果稳定，RSD为0.87%。

2.7 空白实验

取不含蜂王浆的空白片，按样品测定法测定，结果在含10-羟基-2-癸烯酸对照品吸收峰位置无干扰。

2.8 样品测定

取本品10片，研细，取细粉约1.0g，精密称定，置25mL锥形瓶中，加入预先混合溶液（0.03mol／L盐酸溶液1mL＋水2mL＋乙醇7mL），充分振摇，超声处理10min，过滤，移入50mL容量瓶中，用乙醇定容，作为供试品溶液。另取10－羟基-2-癸烯酸对照品适量，加乙醇制成质量浓度为0.05g／L的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，依法测定。3批蜂王浆含片测定结果表明，每片10-羟基-2-癸烯酸含量均在3.855mg以上，所以，本品蜂王浆含量（以10-羟基-2-癸烯酸计）不得少于3.5mg／片，结果见表1。

表1 样品含量测定结果（n＝3）

2.9 重复性实验

按照“样品测定”项下的方法，对同一样品进行多次测定，10-羟基-2-癸烯酸平均含量为3.867mg，RSD＝3.3%，n＝5。

2.1 0 加样回收率实验

精密称取本品10片，研细，取细粉约0.25g，精密称定，置25mL锥形瓶中，加入适量10-羟基-2-癸烯酸对照品，依“样品测定”法测定，计算回收率。实验结果显示，平均回收率为100.12%，RSD 为1.36%。

3 讨论

本文对蜂王浆含片中的主要有效成分10-羟基－2－癸烯酸建立了含量测定方法，结果可靠，对完善蜂王浆制剂的质量标准有一定意义［5］。在选定的色谱条件下，主要有效成分10－羟基-2-癸烯酸与杂质得到很好分离，操作方法简便、快速、准确、精密度高，可作为蜂王浆制品的一种定量方法。

［1］宋卫中，宋晓勇，刘蔚.蜂王浆的研究与临床应用［J］.中华实用中西医杂志，2005，18（6）：917.

［2］刘晓华，孙文基.王浆酸的研究进展概况［J］.亚太传统医药，2006，2（11）：51－54.

［3］蔡柳，林亲录.蜂王浆中10-HDA的研究现状及前景展望［J］.农产品加工，2007（5）：23－25.

［4］农业部蜂产品质量检验测试中心.蜂产品检测实用技术［M］.北京：中国农业出版社，2006：69－71.

［5］张敏，孙利华.我国保健品营销的短视行为［J］.中国药房，2005，16（13）：973.