环氧合酶-2表达水平和前列腺癌进展相关关系的研究

杨子红 石会刚

[摘要] 目的 检测环氧合酶-2在前列腺癌中的表达，并探讨其与前列腺癌临床病理因素及预后的关系。 方法 采用免疫组织化学SP法，检测120例前列腺癌及20例前列腺增生组织（对照组）中环氧合酶-2的表达，分析检测指标与前列腺癌发病情况的相关性。 结果 前列腺癌组织中环氧合酶-2表达阳性率明显高于对照组。 结论 环氧合酶-2具有促进肿瘤细胞转化、增殖、迁移的作用，对于环氧合酶-2的检测有助于前列腺癌患者的预后评估。

[关键词] 环氧合酶-2；前列腺癌

[中图分类号] R737.25???[文献标识码] A???[文章编号] 2095-0616（2012）15-33-02

Research on the relations between expression level of COX-2 andprognosis of prostatic carcinoma

YANG?Zihong1，2??SHI?Huigang2

1.Basic Medical College of Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510080,China;2.Guangzhou Guiyi Biotech Co.，LTD.,Guangzhou 510600,China

[Abstract] Objective To detect the expression of COX-2 in prostatic carcinoma and in normal hyperplasia of prostate,and to discuss the relations between its expression level and the prognosis of prostatic carcinoma. Methods By using immunochemistry staining,we detected 120 samples of prostatic carcinoma and 20 samples of normal hyperplasia of prostate. Results In the prostatic carcinoma,the expression of COX-2 was significantly higher than the one's in hyperplasia prostate group. Conclusion COX-2 may induce cancer cell translocation,proliferation,and invasion. Detecting COX-2 level was helpful for diagnosis of prostatic carcinoma.

[Key words] COX-2;Prostatic cancinoma

前列腺癌（prostatic carcinoma）是男性生殖系最常见的恶性肿瘤，发病随年龄而增长，其发病率有明显的地区差异，欧美地区较高。据报道其仅次于肺癌，在男性是癌症死亡的第2位[1]。我国目前前列腺癌患者人数在逐年增加。环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）基因在绝大多数组织细胞中不表达，只有在细胞受到刺激时才诱导性表达，参与各种病理生理过程，包括炎症过程及肿瘤发生、发展[2-4]。

Shirakawa等[5]报道，COX-2在人类许多良性癌前病变和恶性肿瘤中均有高表达，提示COX-2可能参与了恶性肿瘤的发生、发展。本研究通过病理切片染色的方法，探讨COX-2在前列腺癌中的表达情况。

1?材料与方法

1.1?一般材料

选取前列腺癌石蜡包埋标本75例（2004年5月～2010年9月于笔者所在医院行手术切除），年龄50～75岁，中位年龄63岁。术后均经病理证实。临床分期依VICC-TNM标准，A期30例、B期20例、C期15例、D期10例。同时收集医院2009年开放手术切除良性前列腺增生标本20例作为对照，年龄56～75岁，中位年龄68岁。所有标本用10%甲醛固定，常规石蜡包埋，每个标本制成4 μm厚连续切片3张。COX-2鼠抗人单克隆抗体（北京中杉生物技术有限公司）；即用型SP免疫组化试剂盒、DAB底物试剂盒均购自福州迈新公司。

1.2?实验方法

石蜡包埋组织后4?m连续切片，采用免疫组化SP法染色，步骤如下：68℃烤片20 min，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；3% H₂O₂ 37℃孵育10 min灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗3次，每次5 min；抗原修复：置0.01M枸橼酸缓冲液（pH 6.0）中煮沸（95℃，15～20 min），自然冷却20 min以上，PBS冲洗3次，每次5 min；正常羊血清工作液封闭，37℃ 10 min；滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3次，每次5 min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；滴加生物素标记二抗，37℃孵育30 min，PBS冲洗3次，每次5 min ；滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min PBS冲洗3次，每次5 min；DAB/H₂O₂反应染色，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。

1.3?结果判断

COX-2阳性表达定位于细胞浆及核膜出现棕黄色颗粒，每例分别由两人独立阅片，然后核对所得结果。每片随机观察5个视野，计数1 000个细胞中染色阳性细胞数，按阳性细胞数占肿瘤细胞的比例进行分级：0级为无棕黄色染色或染色阳性肿瘤细胞数≤10%，也就是阴性；阳性细胞数11%～25%为1级，相当于弱阳性；阳性细胞数26%～50%为2级，相当于中等阳性；阳性细胞数＞50%为3级，相当于强阳性。

1.4?统计学方法

前列腺癌与良性前列腺增生之间的比较用Mann-Whitney检验。使用Spearman等级相关分析临床病理资料与免疫组化的结果及COX-2之间的相关性。应用SPSS11.5统计分析软件，P＜0.05为差异有统计学意义。

2?结果

COX-2蛋白在前列腺癌和良性前列腺增生组织中的表达。COX-2蛋白在前列腺癌癌细胞胞核部位染色阳性，低分化或转移灶的癌细胞常出现COX-2蛋白染色强阳性，而在良性前列腺增生组织中的基底细胞和腔面腺细胞偶尔可见胞核COX-2阳性（图1）。在前列腺癌中的COX-2蛋白染色阳性率显著高于良性前列腺增生（P＜0.05）。

3?讨论

我国前列腺癌的临床发病率虽然低于欧美国家，但近年来其发病率呈迅速上升趋势。随着检查技术手段的增加和改进，以及对病理诊断标准认识的提高，前列腺癌的检出率也有所提高。现在，前列腺癌的诊断和鉴别已成为我国一个重要的研究课题[6-7]。

通过免疫组化检测发现，COX-2蛋白在前列腺癌细胞中表达显著，而在良性前列腺增生组织中表达很低，这说明COX-2蛋白在前列腺癌中应该具有重要意义。Oshima M等[8]证实在肿瘤形成过程中，COX-2可能通过影响癌基因或抑癌基因的表达而起到直接或间接的作用。现有资料表明，COX-2过度表达与肿瘤新生血管形成密切相关，而COX-2选择性抑制剂可阻断其在血管生成中的作用。进一步研究发现，COX-2可能会诱导以血管内皮生长因子（VEGF）为代表的促血管生成因子的表达，同时抑制血管内皮细胞的凋亡而促进肿瘤血管形成[9-12]。笔者的检测结果与上述结论相符。

Tsujii等[13-15]的研究证实COX-2可能通过各种机制上调基质金属蛋白酶2（MMP2）、VEGF等的表达，促进肿瘤细胞的侵润及转移。本研究发现，和前列腺正常增生的组织相比，COX-2在前列腺癌组织中的表达明显增加，这同样提示COX-2可能通过作用于一些下游作用分子的信号调控而促进前列腺癌向侵袭性方向发展， 这对于预测前列腺癌进展、转移，特别是术前治疗方案的确定有着重要的实际意义。进一步研究COX-2在前列腺癌转移中作用及其机制可使其成为预防和治疗前列腺癌靶标，防止肿瘤向激素非依赖型前列腺癌转移。

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（收稿日期：2012-04-19）