慢性乙型肝炎患者细胞免疫状态分析

宋慧萍 曾祥铨

[摘要] 目的 研究慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化及其临床意义。 方法 对200例慢性乙型肝炎患者和80例健康者，采用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群的改变。 结果 HBeAg阴性慢性乙肝患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+显著高于HBeAg阳性患者，分别为（36.70±3.58）、（32.16±4.51）、（1.72±0.37）和（31.21±4.25）、（28.72±3.23）、（1.54±0.45）（P＜0.05）。慢性乙型肝炎患者轻度组、中度组、重度组CD4+ T分别为（40.21±5.26）、（36.25±4.53）、（27.51±4.36），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），CD8+ T分别为（31.25±4.55）、（27.19±3.38）、（15.27±2.63），CD4+/CD8+分别为（1.63±0.42）、（1.29±0.32）、（0.75±0.23），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 慢性乙型肝炎患者机体T淋巴细胞功能有不同程度降低，HBeAg阴性的慢性乙肝患者具有相对较强的细胞免疫状态，随病情程度加重，细胞免疫功能状态亦逐级下降。

[关键词] 慢性乙型肝炎；细胞免疫；T淋巴细胞亚群

[中图分类号] R512.6+2???[文献标识码] A???[文章编号] 2095-0616（2012）15-16-03

Anaysis of the cellular immune status in chronic hepatitis B patients

SONG?Huiping??ZENG?Xiangquan

Department of Infectious Diseases, Sanming First Hospital Affiliated Fujian Medical University,Sanming 365000,China

[Abstract] Objective To study the possible cause of the difference in cellular immue status in patiens chronic hepatitis B. Methods 200 patients with hepatitis B hospitalized from 2010 to 2011 and 80 cases of healthy subjects were investigated and peripheral T lymphocybe subsets were examined by flow cytometry. Results The quantity of CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+ in HbeAg-negative group was higher than that in HBeAg-positive group,their values were (36.70±3.58)、(32.16±4.51)、(1.72±0.37) and (31.21±4.25)、(28.72±3.23)、(1.54±0.45)(P＜0.05)，the counts of CD4+、CD8+ and the ratio of CD4+/CD8+ were reduced by in patients with chronic hepatitis B in light group,meidium group and serious group.There was significant difference between the three groups. Conclusion The celllular immune was lower than that in the healthy subjects,cellular immune status was stronger than that in patients with HBeAg-positive,with the worsening of illness,cellular immune status was lower and lower.

[Key words] Chronic hepatitis B;Cellular immunity;T lymphocybe subsets

慢性乙型肝炎（HBV）感染的自然病程分为免疫耐受期、免疫清除期、非活动或低复制期三个阶段，在免疫清除阶段出现慢性乙型肝炎临床表现，如乏力、纳差、呕吐、黄疸等及ALT升高、HBV-DNA滴度下降、肝组织的坏死炎症。慢性乙型肝炎患者的细胞免疫反应在清除病毒的同时，亦可导致肝细胞损伤，而患者机体免疫反应的不同导致不同的临床表现。笔者应用流式细胞仪检测慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞亚群水平，研究其临床意义。

1?资料与方法

1.1?一般资料

患者来源于2010年4月～2011年5月福建医科大学附属三明第一医院感染科住院的200例慢性乙肝患者，其中慢性轻度组60例，中度组80例，重度组60例；男140例，女60例；年龄16～72岁，平均（42.5±4.3）岁。正常对照组80例为同一医院健康体检者，肝功能正常，甲、乙、丙、戊病毒性肝炎血清标志物为阴性。

1.2?诊断标准

慢性乙型肝炎的诊断符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》标准，HBeAg阴性、阳性慢性乙型肝炎的诊断及慢性乙型肝炎轻度、中度、重度诊断根据2005年我国《慢性乙型肝炎防治指南》标准执行。

HBeAg阴性慢性乙型肝炎：即患者血清HBsAg和HBV DNA阳性，HBeAg持续阴性，抗-HBe阳性或阴性，血清丙氨酸转氨酶ALT持续或反复异常或肝组织学检查有肝炎病变。轻度：病情较轻，可反复出现乏力、头晕、食欲减退、厌油、尿黄、肝区不适、睡眠欠佳、肝稍大有轻触痛，可有轻度脾大。部分症状、体征缺如。肝功能指标仅1或2项轻度异常。中度：症状、体征、实验室检查介于轻度和重度之间。重度：有明显或持续的肝炎症状，如乏力纳差、腹胀、尿黄、便溏等，伴有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣、脾大、ALT和（或）AST反复或持续升高，白蛋白降低、丙种球蛋白明显升高。

1.3?研究方法

所有检测对象均在入院次日清晨空腹肘静脉采血3 mL，其中1 mL EDTA.K2抗凝作为T淋巴细胞亚群测定。使用美国Coulter公司制造BECKmancoulter EP2cs XL/FC500/Altra的流式细胞分析仪，BECKmancoulter公司生产的原装试剂对所取标本作T淋巴细胞亚群的检测,同一标本重复操作2次，记录结果后取平均值。

1.4?统计学处理

数据使用PEMS 3.1统计软件进行统计分析，实验数据以（）表示，各组间变量比较采用单因素方差分析，多个均数间两两比较采用q检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2?结果

2.1?HBeAg阴、阳性两组慢性乙肝患者的T细胞亚群及CD4计数分类比较

HBeAg阴、阳性组的总T、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD4绝对计数、CD8绝对计数与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。组间比较，HBeAg阴性组较HBeAg阳性组具有更高的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+计数，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2?慢性乙型肝炎患者轻度、中度、重度T细胞亚群及CD4计数分类比较

慢性乙型肝炎患者轻度组、中度组、重度组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+计数均低于正常对照组（P＜0.05），组间比较，轻度组、中度组、重度组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例和CD4+、CD8+计数逐级下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3?讨论

人体成熟T细胞按表型不同可分为CD3+ CD4+和CD3+ CD8+ T细胞, 这两类细胞又简称CD4+ T细胞和CD8+ T细胞；按功能不同可分为辅助性T细胞（Th）、细胞毒T细胞（Tc）、介导迟发型超敏反应T细胞（TDTH）及抑制性T淋巴细胞（Ts）。其中CD4+ T细胞主要是Th细胞，而CD8+ T细胞主要是Tc细胞，因此CD4+/CD8+的比值常被临床上作为评估机体免疫状态的指标[1]。

HBV感染者的细胞免疫状态在其病情发展中发挥着重要作用，不同的免疫状态造成不同的临床表现及病理类型。当机体细胞免疫功能正常时，可彻底清除病毒；多表现为急性肝炎，当机体细胞免疫功能低下时，病毒不能完全清除，导致慢性肝炎；当机体细胞免疫处于超敏状态时，导致大量肝细胞坏死，发生重型肝炎。T细胞分类与机体的细胞免疫状态有密切联系，研究表明[2-3]，如果CD4+ T细胞的分化以Th2亚群为主，将促进体液免疫反应，并抑制细胞免疫反应，减弱CD8+ T细胞的活性，抗病毒反应被弱化，这是造成乙肝病毒感染慢性化的主要原因。进一步的研究表明[4-5]，在慢性乙型肝炎患者中，机体的免疫状态特别是细胞免疫水平，和HBV复制活跃程度密切相关。

笔者研究发现，HBeAg阴性患者、HBeAg阳性患者与健康对照组比较均有不同程度的细胞免疫功能下降，而前两者在CD4+细胞比例、绝对数及CD4+/CD8+比例上比较差异均有统计学意义，表现为HBeAg阴性患者具有更高的CD4+T细胞活性，且HBeAg阴性患者比HBeAg阳性患者具有更高的CD4+/CD8+ T淋巴细胞活性。因此，临床上表现为HBeAg阴性患者病毒清除能力较强、病毒复制水平比HBeAg阳性患者明显减弱。有研究发现[6-7]，在慢性乙型肝炎患者中，HBeAg具有特殊的免疫耐受性，它的存在是宿主对乙肝病毒形成免疫耐受的重要因素。HBeAg能诱导相关免疫细胞凋亡下调Th1细胞活性，同时激活Th2细胞反应，导致机体的细胞免疫功能下降，从而削弱宿主对HBV的抗病毒应答，影响HBV复制水平。因此笔者推测，HBeAg阴性患者可能由于缺乏免疫耐受因子HBeAg，从而诱导了相对较高的细胞免疫状态，使得HBV DNA复制活动受到抑制。

CD4+细胞的数量和功能下降，直接导致细胞免疫功能低下。CD8+细胞毒性T细胞对清除病毒感染有重要作用，其产生依赖CD4+淋巴细胞的存在，而且CD4+细胞中的Th1通过直接对肝细胞的溶解或通过细胞因子的产生而间接使病毒清除，同时使肝脏损伤加重。本组研究结果表明，慢性乙型肝炎患者外周血总CD3+、CD4+、CD8+细胞百分比、绝对计数和CD4+/CD8+比值均低于正常对照组，并且随病情程度加重，以上指标亦逐渐降低，提示慢性乙型肝炎患者均存在不同程度的细胞免疫功能低下，且慢性乙型肝炎患者轻度、中度、重度随着病情程度逐渐加重，细胞免疫功能逐级下降，其中以慢性乙型肝炎（重度）下降最为显著。有研究表明，慢性重型肝炎发病前均存在不同程度的免疫抑制，肝功能衰竭时，患者外周血T淋巴细胞发生T

细胞活化凋亡的数量明显低于慢性乙型肝炎轻中度患者[8]，且CD8+细胞毒细胞过度活化，导致严重肝组织破坏。

总之，通过本研究表明T淋巴细胞亚群可反映慢性乙型患者免疫状态，对指导免疫调节剂的使用有一定的参考价值。目前临床上所使用的抗病毒药物大多只能抑制病毒复制，清除病毒必须依赖机体正常免疫功能，因此消除慢性HBV感染后免疫耐受状态，重建有效的T细胞免疫，是治疗慢性乙型肝炎的关键。在对患者进行抗病毒治疗的同时，适时辅以积极有效的免疫调节治疗,可能会提高抗病毒治疗疗效，并且减少停药后的复发。

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（收稿日期：2012-03-21）