不同激素对银斑百里香愈伤组织培养的影响

张春梅，闫 芳，张亚萍

(河西学院农学与生物技术学院，甘肃张掖734000)

不同激素对银斑百里香愈伤组织培养的影响

张春梅，闫 芳，张亚萍

(河西学院农学与生物技术学院，甘肃张掖734000)

以银斑百里香种子为试材，比较了不同浓度的NAA和2，4－D与6－BA对百里香愈伤组织诱导效果的影响。结果表明：NAA在0.15(mg/L)和2，4－D在0.9(mg/L)是诱导银斑百里香种子产生愈伤组织的最佳浓度;MS+NAA(0.15mg/L)+6－BA(0.6mg/L)和 MS+2，4 －D(0.9mg/L)+6－BA(0.6mg/L)诱导的效果最佳，建立了百里香愈伤组织培养的实验体系。

百里香;激素;组织培养

百里香(Thymus mongolicus)，俗称“地椒、地姜、地花椒、麝香草”，是唇形科半灌木芳香植物。原产于地中海南岸，全球约300～400个种，我国有11个种，2个变种，主要分布于西北高原，包括甘肃、陕西、青海、宁夏、新疆、北京、东北及河北、山西北部、内蒙古多石山地、黄土丘陵和沙地上［1］，是世界许多国家承认的香辛料之一［2］，不但可以鲜食、做调味保健品［3］，而且，因含有黄酮类成分而全草入药，是一种广谱性药物，具有行气止痛、防暑避暑、补肝明目、滋胃润肺、利尿排水、抗病毒、杀菌、通经、抗痉挛、驱蠕虫、升血压、刺激白血球等功效，是强力的天然“抗生素”［4］，在医药、传统日用化工及精细化工等领域得到广泛应用，具有极好的开发利用价值。通过植物组织培养方法快速繁殖百里香，不但加速品种繁殖速度，还可扩大种质资源，保持优良品种的种性。种子是建立植物无菌体系的良好外植体［5］，但百里香结实量低，种子败育多［6］。本研究采用银斑百里香种子做为实验材料，探讨百里香培养基中不同种类、浓度的生长激素配合使用对百里香愈伤组织培养的影响，成功建立了百里香愈伤组织培养的实验体系。

1 材料与方法

1.1 实验材料

银斑百里香(T.mongolicus)种子，采自张掖市大满乡。

1.2 实验方法

以MS培养基为基本培养基，NAA设0.1 mg/L、0.15 mg/L、0.2 mg/L、0.25 mg/L 4 个浓度，6－BA 设 0.4 mg/L、0.6mg/L、0.8 mg/L、1.0 mg/L 4个浓度，2，4 －D 设0.3 mg/L、0.6mg/L、0.9 mg/L、1.2 mg/L 4个浓度。研究不同种类、浓度的生长激素配比对百里香愈伤组织培养的影响。每处理接种30瓶。接种7 d后检查，移除被污染培养基，统计生长情况。

1.3 接种条件及培养条件

将百里香种子用纱布包好，至于自来水冲洗10 min，沥干水分后置于超净工作台上。取250粒种子放入三角瓶中，75%酒精消毒45 s，无菌水冲洗3次，再用活性氯含量为8% ～9%的NaClO2消毒4 min，再将包好的种子在无菌水中摇动使与水充分接触，重复冲洗5次，沥干置于接种盘上备用。

在无菌操作室中，将灭菌好的百里香种子，接种到含有不同浓度NAA和6－BA配比的MS培养基中，25个处理，3次重复。各培养基中蔗糖浓度6%，琼脂4%，培养基灭菌前pH调至5.8。培养温度(25±2)℃，光照时间为24 h/d，光照强度为2 000 lx，培养30 d后调查其生长状况。

2 结果与分析

2.1 NAA与6－BA配比对百里香组培苗生长状况的影响

以MS为基本培养基，使用不同浓度的NAA和6－BA做比较试验，15 d后调查外植体萌发情况。

表1 NAA对百里香组培苗生长状况的影响

表2 不同浓度的NAA和6－BA配比对百里香组培苗生长状况的影响

表3 NAA和6－BA交互作用效果方差分析结果

如表1、2、3所示，0.15(mg/L)NAA 处理与其他浓度间均达到极显著水平，组培苗生长状况为最好;NAA和6－BA各组合间均达到极显著水平，结果表明，MS+NAA(0.15 mg/L)+6－BA(0.6mg/L)诱导的效果最佳。

2.2 不同浓度的2，4－D和6－BA配比对百里香组培苗生长状况的影响

以MS为基本培养基，不同浓度的2，4－D和6－BA配比对百里香愈伤组织有不同影响(结果见表 4、表5)。

表4 2，4－D对百里香组培苗生长状况的影响

表5 不同浓度的2，4－D和6－BA配比对百里香组培苗生长状况的影响

表6 NAA和6－BA作用效果方差分析结果显示

如表4、5、6所示，2，4 －D(0.9 mg/L)处理与其他浓度间均达到极显著水平，诱导效果最佳;2，4－D和6－BA各组合间均达到极显著水平，结果表明，MS+2，4－D(0.9 mg/L)+6－BA(0.6mg/L)诱导的效果最佳。

3 结论与讨论

在 20世纪 80年代，Furmanowa等对 Th.vulgaris进行了百里香的组织培养，并获得了再生植株。Mendes等［7］研究了百里香的生根。我国的学者在百里香属植物的组织培养方面也取得了一定的进展［5，8－9］。但与本试验中配制的培养基不同，说明百里香愈伤组织的诱导对培养基中生长素和细胞分裂素的含量要求不高，此方法成功建立了一个百里香愈伤组织培养的实验体系。愈伤组织的形成过程是一个培养基成分、外植体的生理状态、光照条件及植物基因型等诸多因素之间相互作用的复杂过程。其中，生长调节物质的种类、含量及配比是调控植物器官产生愈伤组织的主导因素。因此，诱导培养基中生长调节剂的种类、浓度与组合对愈伤组织形成起着至关重要的作用。综上所述，在NAA为0.1～0.25(mg/L)和2，4－D 为0.3～1.2(mg/L)之间的浓度范围分别和6－BA互作，银斑百里香种子均能发芽，其中MS+NAA(0.15 mg/L+6－BA(0.6mg/L)和MS+2，4－D(0.9 mg/L)+6－BA(0.6mg/L)诱导的效果最佳，NAA 0.15(mg/L)和2，4－D 0.9(mg/L)的浓度为银斑百里香种子诱导愈伤组织的最佳激素浓度。

而在6－BA对百里香种子萌芽生长的影响分析中并不是很明确，有待进一步的研究。

［1］ 刘云斌.百里香天然资源及其园林应用［J］.林业实用技术，2005(2)：43 －44.

［2］ 樊明涛，陈锦屏.百里香提取物抑菌特性的研究［J］.微生物学报，2001，41(4)：499 －504.

［3］ 刘军.亚洲百里香不定芽和愈伤组织的诱导［J］.内蒙古科技与经济，2010(5)：56－57.

［4］ 赵颖，武玲.百里香的组织培养与快速繁殖技术［J］.内蒙古林业科技，2009(5)：44 －45.

［5］ 魏春雁.百里香研究［M］.长春：吉林科学技术出版社，2004.

［6］ 周俊辉，周厚高，刘花全.植物组织培养中的内生细菌污染问题［J］.广西植物，2003，23(1)：4147.

［7］ Mendes M L.In vitro cloning of Thymus mastichina L.［J］.Fieldgrown Plants Acta Horticulture，1999，502：213.

［8］ 赵庆臻，阎华超，程霜，等.地椒的组织培养及植株再生［J］.植物生理学通讯，2002，38(4)：357.

［9］ 沙红.几种药用芳香植物组织培养快速繁殖的研究［D］.乌鲁木齐：新疆农业大学，2004.

Effects on Different Composed Hormones on the Thymus mongolicus Callus Culture

Zhang Chunmei，Yan Fang，Zhang Yaping
(College of Agriculture and Biology Technology，Hexi University，Zhangye 734000，China)

The study compared the effect of various concentration of plant－growing hormones such as NAA，2，4－D and 6－BA on seeds of Thymus mongolicus for inducing and propagating callus.The results showed that MS+NAA 0.15 mg·L－1+6－ BA 0.6mg·L－1and MS+2，4 － D 0.9 mg·L－1+6－ BA 0.6mg·L－1were suitable for inducing and propagating callus .In addition，NAA 0.15 mg·L－1and 2，4 － D 0.9 mg·L－1were optimum concentration for inducing the callus of Thymus mongolicus，We have established the experimental system of the Thymus mongolicus callus culture.

Thymus mongolicus;plant growth hormones;callus culture

S567

A

1006－9690(2012)03－0029－03

10.3969/j.issn.1006－9690.2012.03.009

2011－11－15

甘肃省高校河西走廊特色资源利用省级重点实验室项目(2010XZ1003)

张春梅(1978－)，女，博士，副教授，主要从事设施园艺与植物逆境生理和种苗繁育技术方面的研究。E－mail：zazcm197828@163.com