福建野生单叶蔓荆子总黄酮与蔓荆子黄素含量分析

刘小芬，杨成梓，黄泽豪，蔡远树，陈明杰

(福建中医药大学药学院，福建福州350108)

福建野生单叶蔓荆子总黄酮与蔓荆子黄素含量分析

刘小芬，杨成梓，黄泽豪，蔡远树，陈明杰

(福建中医药大学药学院，福建福州350108)

对福建省不同地区野生单叶蔓荆子总黄酮和蔓荆子黄素含量进行测定，不同地区含量差异进行比较分析，确定福建野生单叶蔓荆子的质量水平，为进一步开发福建野生单叶蔓荆子提供基础研究数据。回流提取总黄酮，紫外分光光度法(UV法)测定总黄酮含量，高效液相色谱法(HPLC法)测定蔓荆子黄素含量。结果表明不同产地野生单叶蔓荆子总黄酮含量范围为7.081%～10.792%，平均含量9.040%;蔓荆子黄素含量范围为0.06170%～0.12578%，平均含量0.08878%。福建省不同地区野生单叶蔓荆子质量(以蔓荆子黄素含量为指标)均符合药典规定，可进一步开发利用。

蔓荆子;单叶蔓荆;总黄酮;蔓荆子黄素

蔓荆子为我国重要的药材之一，以“蔓荆实”之名始载于《神农本草经》，列为上品［1］。蔓荆子为辛凉解表常用药，传统用于治疗风热感冒头痛、齿龈肿痛、目赤多泪、头晕目眩等，现代药理研究具有镇痛、抗炎、降压、抗菌、祛痰、抗肿瘤等作用［2－3］。其来源植物为马鞭草科单叶蔓荆Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham.和蔓荆Vitex trifolia L.，主要分布于山东、江西、浙江、安徽、福建、广西、海南、台湾等省［4－5］。黄酮类化合物为蔓荆子药材的主要药效成分，主要含有蔓荆子黄素、3，6，7－三甲基槲皮万寿菊素、木犀草素等，镇痛作用突出，并具有抗菌、消炎等药理作用［6］，其中蔓荆子黄素含量作为衡量药材质量的重要依据。2005版《中华人民共和国药典》规定，按干燥品计算，样品含蔓荆子黄素不得少于0.030%［7］。本论文对10个采自福建沿海砂质海岸的野生单叶蔓荆子样品进行总黄酮含量测定，对其中8个样品进行蔓荆子黄素含量测定，旨在为明确福建野生单叶蔓荆子的总黄酮、蔓荆子黄素含量及不同地区间的含量差异，为闽产蔓荆子药材质量控制提供黄酮类化合物含量方面的参考数据。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器与试剂

1.1.1 实验材料收集与准备

福建省不同地区野生单叶蔓荆子生药材由笔者实地考察采集所得，利用全球定位系统(global positioning system，GPS)技术进行卫星定位，对分布点周边环境详细拍照、记录所在乡镇、经纬度、海拔等。各样品来源地见表1。由福建中医药大学药学院中药鉴定教研室杨成梓副教授鉴定为马鞭草科植物单叶蔓荆 Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham.的果实。采集果枝，先于室内堆放3～4 d，发汗，再摊开，阴干，标记，装袋。

1.1.2 实验主要仪器与试剂

YP202N型数字分析天平，DHG－9420型电热恒温鼓风干燥箱，H.H.S型电热恒温水浴锅，金叶RE－52型旋转蒸发仪，SHB－III型循环式多用真空泵，UV－9100型紫外可见分光光度计，ZF－2型三用紫外仪，岛津LC－10AT高效液相色谱分析仪，索式提取器等。芦丁对照品、蔓荆子黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇分析纯、色谱纯，磷酸分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1 样品取样

采用四分法。参照2005年版《中国药典》一部中的附录ⅡA药材取样法。

1.2.2 总黄酮提取与含量测定

1.2.2.1 芦丁标准曲线制作

芦丁标准液制备：取一定量芦丁样品于105℃恒温干燥至恒重，精密称取5.00 mg，甲醇定容至50 mL，得芦丁样品标准液，浓度为0.10 mg/mL。

标准曲线制备：精确吸取每毫升含0.10 mg芦丁的标液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 6只具塞试管中，各加甲醇成5 mL，加5%NaNO2液0.3 mL，摇匀，放置6min，加10%Al(NO3)3液 0.3 mL，摇匀，放置6min，加1 mol/L NaOH 液4 mL，加甲醇0.4 mL，摇匀，放置15 min。利用紫外分光光度法(05版药典附录VA)，于510 nm处测A值，以空白为对照，A值对标样含量mg/mL数作图，标准曲线(图1)为 A=1.0631X+0.0024，其线性范围为 0 ～0.05 mg，线性关系 r=0.9994。

图1 芦丁对照品标准曲线

1.2.2.2 样品总黄酮提取与供试液制备

样品粉碎，过三号筛。精密称取1 g置索式提取器中，加100 mL石油醚脱脂2 h。取出挥尽石油醚，再加100 mL甲醇，索式提取至黄酮类成分提尽，约6h(提取液加三氯化铝甲醇溶液至无荧光为止)。过滤，浓缩甲醇至10 mL，定量转移至25 mL量瓶中并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即为待测样品溶液。

1.2.2.3 样品总黄酮含量测定

精确吸取上述各样液1.0 mL于具塞试管中，按标准曲线测定方法测定，3次取平均。参照标准曲线，计算总黄酮含量。

1.2.3 蔓荆子黄素提取与HPLC法测定含量

按照05版药典蔓荆子项下，蔓荆子黄素含量测定方法进行。

1.2.3.1 对照品与供试品液制备

精密称定蔓荆子黄素对照品2.000 0 mg，加色谱纯甲醇溶解，摇匀，并定容至5 mL，得400 μg/mL对照品标准液，精密吸取1 mL，置10 mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，得40 μg/mL对照品标准液，过 0.45 μm 滤膜，备用。

取蔓荆子粉末(过三号筛)约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，离心，取上清液 5 mL，定容至 10 mL，过 0.45 μm 滤膜，备用。

1.2.3.2 实验 HPLC 条件

岛津LC－10AT高效液相色谱分析仪;Platisil(铂金)ODS 5 um C18色谱柱(250 mm×4.6mm)选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相：甲醇－0.4%磷酸(60：40);流速：1 mL/min;检测波长：258 nm;柱温：室温;保留时间约14min。对照品、供试品HPLC色谱图见图2。

图2 单叶蔓荆子HPLC图谱

1.2.3.3 线性关系

分别吸取 1 mL、2 mL、4 mL、6mL、8 mL、10 mL的40 μg/mL样液，置10 mL容量瓶，加色谱纯甲醇精密定容，制成不同浓度梯度标准品溶液，分别为4、8、16、24、32、40 μg/mL，分别吸取 20 μL，进样，标准品含量(μg/mL)为X坐标，得峰面积为Y坐标，绘制标准曲线(图3)，得回归方程Y=845 10X+15650，线性范围为 0.00 ～0.64 μg，R20=9 999。

图3 蔓荆子黄素对照品标准曲线

1.2.3.4 精密度测试

取40 μg/mL样液连续进样5次，测每次峰面积，计算平均值，RSD=0.5%。

1.2.3.5 重复性实验

按照样品测定方法，对同一产地样品进行5次平行实验，测定含量(进样3次，取平均)，平均含量为0.089 98%，RSD=1.3%。

1.2.3.6 稳定性实验

取某一产地样品，放置 0、2、4、8、24、48h，测定峰面积，RSD=1.6%，说明样品在48h内稳定。

1.2.3.7 回收率实验

精密称取某一产地样品(已知含量)1 g，共5份，分别加入40 μg/mL 样液各1 mL(含量40 μg)，按照样品提取与测定方法，测定含量，计算回收率，RSD=1.4%。

1.2.3.8 HPLC法测定样品蔓荆子黄素含量

按照上述色谱条件，测定样品，计算蔓荆子黄素含量。

2 结果与分析

2.1 福建省不同地区单叶蔓荆子样品来源

见表1。

表1 福建省不同地区单叶蔓荆子采集资料表

在本轮对福建野生单叶蔓荆分布的实地考察中，共考察了诏安、漳浦、龙海、莆田、福州、宁德、霞浦、福鼎等8个沿海县市。宁德及往北沿海较少砂质海岸，常见石头滩与滩涂，故单叶蔓荆少见，在实地考察的3地市海岸中，仅于霞浦见零星分布。闽江口以南的海岸较多出现沙滩，单叶蔓荆分布广泛，生长良好。因其植株具匐蔓性，故在沙质海岸常成片分布，成为沙岸灌丛群落的优势物种，或分布于防护林下。具体福建野生单叶蔓荆子蕴藏量有待进一步深入考察与测算。

2.2 不同地区野生单叶蔓荆子总黄酮含量

实验结果见图4。

图4 福建野生单叶蔓荆子总黄酮含量

福建省10个不同产地野生单叶蔓荆子样品总黄酮含量范围为7.081% ～10.792%，平均含量9.040%。其中于诏安洪洲村样品总黄酮含量最高，为10.792%;诏安南门向阳沙波地采集样品、诏安南门防护林下采集的熟果样品、龙海采集的青果与黄果样品、莆田采集样品，总黄酮含量均高于平均值;漳浦采集带霉果粒总黄酮含量最低，为7.081%。

不同果实成熟期总黄酮含量存在一定差异，从实验结果看，单叶蔓荆子青、黄、熟、霉4个果熟期总黄酮含量大致呈现上升再略呈下降趋势。在黄、熟果期，含量均较高，可作为采收时间的依据。

2.3 不同地区野生单叶蔓荆子蔓荆子黄素含量

实验结果见图5。

图5 福建野生单叶蔓荆子中蔓荆子黄素含量

福建省8份不同产地野生单叶蔓荆子样品蔓荆子黄素含量范围为0.061 70% ～0.125 78%，平均含量0.088 78%。其中于漳浦采集的样品蔓荆子黄素含量最高，为0.125 78%;龙海采集的成熟果实样品含量次之，为0.09645%。

所有样品蔓荆子黄素含量均超过药典规定之干燥品含量不少于0.030%，符合药典标准。

龙海采集的不同果熟期样品，蔓荆子黄素含量总体呈现上升趋势。药材采收期以黄、熟期为好。

3 结论与建议

3.1 蔓荆子黄素含量是蔓荆子药材质量评价的重要指标之一，迄今为止，对福建野生单叶蔓荆子中蔓荆子黄素的含量研究尚属空白。本研究表明，福建野生单叶蔓荆子中蔓荆子黄素含量符合国家药典规定，且为药典规定含量的2～4倍，具有较高的药用价值。可进一步开发利用野生品，扩大福建野生单叶蔓荆子在药材市场的占有率。

3.2 单叶蔓荆为福建沿海砂质海岸常见药用植物资源，常于沙滩、沙岸或沿海防护林下成片分布，对生长条件要求不高，具有良好的海岸固沙、涵养水源等生态效益，作为海西沿海岸线生态绿化物种之一，兼具经济与生态双重效益，具有较大的开发前景。

［1］ 刘红燕，彭艳丽，万鹏.蔓荆子本草学考证［J］.山东中医杂志，2006，25(2)：126－128.

［2］ 国家中药管理局《中华本草》编委会.中华本草：第十八卷第六册［M］.上海：上海科学技术出版社，1999.

［3］ 南京中医药大学.中药大辞典：下册［M］.2版.上海：上海科学技术出版社，2006：3552 －3555.

［4］ 中国科学院中国植物志编写委员会.中国植物志：第五十三卷第一分册［M］.北京：科学出版社，1984：91 －92.

［5］ 福建省科学技术委员会《福建植物志》编写组.福建植物志：第四卷［M］.福州：福建科学技术出版社，1989：538 －542.

［6］ 王冬，李秋红，周凯.蔓荆子的化学、药理与炮制研究进展［J］.中医药学报，2008，36(1)：69 －71.

［7］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京：化学工业出版社，2005：253.

Contents Analysis on Total Flavones and Vitexicarpin of Fructus Viticis of Vitex trifolia L.var.simplifolia from Different Wild Areas in Fujian

Liu Xiaofen ，Yang Chengzi，Huang Zehao，Cai Yuanshu，Chen Mingjie
(College of Pharmacy，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350818，China)

To analyze the contents of the total flavones and vitexicarpin，in order to compare the quality stand of fructus viticis from Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham.harvested from different wild areas of Fujian.Total flavones was obtained by Soxhlet extraction，contents were analyzed by UV.Contents of vitexicarpin were analyzed by HPLC.The content of total flavonids was from 7.081%to 10.792%，the average content was 9.040%.The content of vitexicarpin was 0.06170%to 0.12578%，the average content was 0.08878%.So，the quality stand of fructus viticis from Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham.harvested from different wild areas of Fujian can accord with China Pharmacopoeia，provides reference for further development and use.

Fructus Viticis;Vitex trifolia L.var.simplifolia Cham;total flavones;vitexicarpin

R284

A

1006－9690(2012)03－0032－04

10.3969/j.issn.1006－9690.2012.03.010

2011－10－18

福建中医学院服务海西重点建设项目之五(No.5)福建省药用植物资源普查

刘小芬(1977－)，女，福建东山人，讲师，硕士，主要从事中草药种质资源与化学研究。