ER、PR、C-erbB-2、P53及 Ki-67在乳腺癌组织中表达的相关性研究

刘 焱 陈 晨 侯传强 李宝江

(泰山医学院附属泰山医院，山东泰安 271000)

随着乳腺癌分子水平的研究进展，有些与乳腺 癌发生、发展有关的分子生物学指标逐渐被认可为乳腺癌的预后和预测因子，应用于评估患者的预后，指导乳腺癌患者的治疗。其中 ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67在临床中应用较广泛，但它们阳性表达情况及相关性文献报道不一。我们通过联合检测它们在乳腺癌组织的表达，以探讨各指标与肿瘤临床病理特征的关系以及阳性表达的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取泰安市中心医院2010年6月～2010年9月，乳腺癌组织标本138例。患者均为女性，年龄23～75岁，中位年龄49岁。患者术前均未接受过化疗、放疗等抗癌治疗。全部病例常规检查以排除远处转移。其中pTNM分期:Ⅰ期21例，Ⅱ期82例、Ⅲ期25例、Ⅳ期12例。按照 WHO乳腺肿瘤组织学类型分类标准:浸润性导管癌130例，浸润性小叶癌5例，导管内癌3例。腋窝淋巴结转移78例，无淋巴结转移60例。

1.2 试剂与方法

S-P免疫组化相关试剂盒及免疫组化染色一抗均购自北京齐松生物技术有限公司。采用S-P二步法免疫组化染色。切片厚约5 μm，脱蜡，梯度酒精水化，微波热处理进行抗原修复，PBS冲洗，3%过氧化氢阻断过氧化物酶，山羊血清封闭，加用一抗，37℃孵育1～2 h，PBS冲洗5 min×3次;加生物素标记的二抗，室温下孵育30 min后PBS充分冲洗，加入S-P复合物孵育20～30 min;PBS冲洗5 min×3次;DAB显色，苏木精复染。自来水冲洗、复染、封片。用PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性标本作为阳性对照。

1.3 结果判定

免疫组化阳性判断标准，ER、PR、Ki-67、P53阳性细胞为细胞核有棕黄色颗粒，凡5个高倍视野阳性细胞数＜10%为阴性，阳性细胞数10% ～25%为弱阳性(+)，26% ～50%为阳性(++)，＞50%强阳性(+++)。C-erbB-2阳性细胞为膜着色，不着色为阴性(-);着色阳性细胞数＞10%为阳性，其中着色弱且不连续为弱阳性(+)，着色中等部分不连续为阳性(++)，着色强且连续为强阳性(+++)。临床病理特征包括肿瘤病理类型和大小，是否有腋窝淋巴结转移。组织学分级按照WHO乳腺癌的组织学分类(2003)，根据腺管形成、细胞分化及核分裂等3项9分的评定标准，进行组织学分级，分为Ⅰ级、Ⅱ级及Ⅲ级。乳腺癌病理分期标准为2010年第7版TNM分期标准。

1.4 统计学分析

应用SPSS 13.0统计软件分析，样本率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关。

2 结果

2.1 ER、PR、C-erbB-2 、P53、Ki-67 在乳腺癌肿的表达及与乳腺癌组织病理特征的关系，见表1，2。

ER、PR、C-erbB-2、P53 和 Ki-67 阳性表达率分别为62.31% 、59.42% 、50.72% 、43.47% 、60.14%;ER、PR阳性表达与肿瘤大小，淋巴结转移无相关性，与组织学分级和临床分期相关。C-erbB-2、Ki-67与有无淋巴结转移、肿瘤病理分期相关(P均＜0.05)，Ki-67还与肿瘤组织分级显著相关。而P53与与乳腺癌组织病理特征无明显相关性。

表1 ER、PR、C-erbB-2、P53、Ki-67在乳腺癌组织中的表达

表2 ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67与乳癌病理特征的相关性(n，%)

2.2 ER、PR 与C-erbB-2、P53、Ki-67表达的相关性见表3。

ER与PR表达呈正相关，P=0.000;与P53阳性表达无明显相关性，与C-erbB-2、Ki-67表达呈负相关(P ＜0.01)。Ki-67，P53，C-erbB-2 表达呈正相关(P＜0.05)。

表3 ER、C-erbB-2、P53 和 Ki-67表达的相关性分析

3 讨论

乳腺癌是一种临床上存在差异的疾病，这种差异是因为很多基因改变和分子事件所导致的。不同的乳腺癌患者有着不同的预后，需要不同的治疗方案，因而乳腺癌患者的预后评估，及治疗的疗效评测有着重要意义。由于询证医学的缺乏和检测方法的限制，目前只有少数几种指标被确定为标准的预后因子。

正常乳腺上皮的生长和发育受雌、孕激素的调控，当上皮细胞癌变时，雌、孕激素受体(ER、PR)部分或全部缺失。如果乳腺癌细胞保留ER和PR，则表明该乳腺癌的生长和繁殖受内分泌调控，称为为激素依赖性乳腺癌，否则为非依赖性乳腺癌。Colditz［1］等认为，PR阳性无转移者比PR阴性无转移者存活期长，两者5年总生存率比较，差异有显著意义(P＜0.05)。ER、PR阳性往往和癌组织高分化，细胞增殖活性低，没有或较少出现P53，C-erbB-2的变异和扩增等因素有关［2，3］。本组138例乳腺癌患者的激素受体测定结果亦证实，ER、PR阳性表达与乳腺癌病理组织学分级、病理分期相关，高分化和早期肿瘤阳性表达率高。ER、PR阳性表达高的C-erbB-2、P53、Ki-67 阳性表达率低。

C-erbB-2基因是人类表皮生长因子受体(EGFR)家族的第2个成员，其基因位于染色体17q21，编码相对分子质量185kD的具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，在细胞信号传导中发挥重要作用，是细胞增殖、分化、移动和存活的重要调节因子。它在正常组织中不表达或低表达，在许多上皮来源的恶性肿瘤中表现为扩增或高表达［4］。C-erbB-2的预后价值早在1987年就被提出［5］，C-erbB-2高表达常提示肿瘤恶性程度高，常伴有淋巴结转移，预后差，易复发［6］。本组实验亦显示，C-erbB-2阳性与腋窝淋巴结转移、病理分期呈正相关，阳性表达率越高，淋巴结转移率越高。另外 C-erbB-2表达与P53、Ki67表达呈正相关。虽然C-erbB-2与淋巴结阴性患者预后相关性还有争议，但目前已公认，C-erbB-2与淋巴结阳性患者预后相关，是判断乳腺癌预后的独立指标。

P53基因是一种抑癌基因，分为野生型及突变型，突变型P53不仅失去了正常野生型P53抑癌功能反而促进细胞恶性转化的活性，P53基因突变可能是乳腺癌病情进展恶化的重要因素［7］。普遍认为P53基因蛋白表达与乳腺癌浸润性增生和预后不良相关。据报道乳腺癌中P53蛋白的阳性率为20% ～60%，本组P53阳性率为43.47%，且与C-erbB-2、Ki67表达呈正相关。但P53阳性表达与肿瘤的临床病理特征无显著性相关，这与国内有些文献报道不一致［8］。笔者分析认为虽然突变型P53基因作为单个生物学指标的特异性不强，但在肿瘤的生长过程中与其它因素间可能有着重要的协同和调节作用，从而影响到乳癌的发生和预后。

Ki-67抗原是一种表达增殖期细胞的核抗原基因，被视为评估肿瘤细胞增殖活性的一个标志物。由于其半衰期短，脱离细胞周期后迅速降解，故己成为检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标［9］。有报道［10］对68项研究进行meta分析，发现早期乳腺癌淋巴结阳性者Ki-67高表达比例增高，预后较差，提示Ki-67有促使肿瘤向淋巴结转移的能力。本组实验中乳腺癌组织Ki-67阳性率为60.14%，Ki-67阳性表达与淋巴结转移，组织学分级，病理分期相关，说明Ki-67的表达与肿瘤的生长和浸润密切相关。结果还显示Ki-67的表达与P53，C-erbB-2表达呈正相关，和李宝江等报道一致［11］。

ER、PR 、C-erbB-2、P53、Ki-67 检测方法相对简单，是目前临床较常用的乳腺癌分子生物学指标，不仅是预后因子，也是重要的乳腺癌疗效预测因子。通过我们的研究及文献报道，可以发现这些生物学因子之间有着复杂的关系，在乳腺癌的发生发展过程中相互作用、互相影响。虽然目前它们具体的作用机理还不明晰，通过探究它们的相互关联和作用，能更好地了解乳腺癌的发生、发展及生物学行为，为乳腺癌的个性化治疗提供依据，进一步改善乳腺癌的治疗效果。

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［11］ 李宝江，朱志华，王军业，等.Ki-67、P53、VEGF和CerbB-2在乳腺癌组织中表达的相关性研究及其临床意义［J］.癌症，2004，23(10):1176-1179.