感冒清口服液澄清工艺的研究*

卫世杰，霍务贞

1广东药学院药科学院；2广东药学院中药开发研究所，广州 510006

感冒清验方是由板蓝根、昆布、螺旋藻等5味中药组成，具有辛凉解表、疏风清热、利咽解毒等功效，用于治疗风热感冒。制成口服液具有吸收好、疗效迅速、服用方便的特点，易为幼儿和老年患者所接受。但由于方中昆布和螺旋藻提取液中含有较多的植物蛋白和藻体蛋白，得到的浸膏粘稠，杂质多，滤过困难，且制备的口服液澄清度差。为吸附杂质，并尽可能保留有效成分，本文对昆布和螺旋藻的提取液的澄清工艺进行了研究，以期达到减少服用量，提高澄清度的目的。

1 仪器和试药

UV-260型紫外分光光度计（日本岛津）；高速冷冻离心机CR-21G（日本日立）；Mettler AE240型电子天平（德国）；HH恒温水浴锅（江苏金坛中大仪器厂）。

壳聚糖（脱乙酰度＞80%，80目，浙江磐安县壳聚糖厂）；无水葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，批号 110833－20050）；苯酚（上海试剂一厂）。

2 方法与结果

2.1 总多糖的含量测定

多糖为本制剂有效成分之一，总多糖的含量测定采用经典的硫酸-苯酚比色法[1]。精密称取18.9 mg葡萄糖置于100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取25 mL置50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、1.1、1.2 mL 置离心管中，加水至 2.0 mL，加入苯酚溶液1.0 mL，摇匀，快速加入硫酸5.0 mL，摇匀，沸水中加热15 min，取出后立即放冷。在486 nm的波长处测定吸收度。得线性方程为A=0.0064C+0.0498（r=0.9993）。 专属性试验表明，辅料对测定无干扰，测得的平均回收率为99.2%，方法准确简便。

2.2 水浸出物量的测定[2]

精密量取昆布和螺旋藻提取液50 mL，置于干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，放入烘箱干燥4 h，至恒重，迅速置干燥器中冷却，称重并计算水浸出物的量。

2.3 澄清方法的选择

2.3.1 澄清方法的筛选根据文献[2-3]，对5种不同澄清工艺进行比较, 并以总多糖含量、水浸出物的量和外观澄清度为指标，采用综合评分法（权重系数分别为 0.4、0.4、0.2）选择澄清工艺。

由表1可见，低温沉降法总多糖含量较高，但水浸出物含量、外观等均较差；高速离心法澄清效果较好，但操作较麻烦，且对水浸出物含量影响不大；水醇法总多糖含量较低，且醇浓度越高，含量越低；101果汁沉降剂法对多糖含量影响较大；脱乙酰壳聚糖法对多糖含量影响较少，且水浸出物含量较低，外观也澄清，效果较佳。因此选择脱乙酰壳聚糖法做为昆布螺旋藻提取液的澄清方法。

2.3.2 澄清剂的筛选澄清剂的用量太少会造成除杂不完全，太多又会造成浪费，且对口服液中其他成分的含量有影响。因此需对其用量进行筛选[4]。具体方法为：取螺旋藻与昆布共同提取后的上清液适量，按表2加入澄清剂后，60℃水浴加热，观察澄清效果。

表1 澄清方法选择（n=3）

从表2可知，加澄清剂5%以上均可以取得良好效果, 但加入10%的澄清剂时,有少量澄清剂胶体悬浮于液体中，可能为过量，因此，采用5%用量较好。

表2 澄清剂用量筛选

2.3.3 澄清剂pH值筛选[5-6]由表3可知，溶液pH值对澄清效果有较大的影响，其值在3～5时对澄清剂的澄清效果影响不大，从口服液的整体稳定性考虑，选择pH 5较为合适。

表3 最佳pH值筛选

2.4 澄清剂残留量的测定

残留的壳聚糖会吸附口服液中其他有效成分，造成含量降低，且会在长期放置后出现沉淀，因此需对其残留量进行测定。参照文献方法[7]，采用溴甲酚绿比色法测定壳聚糖的含量

2.4.1 线性范围以0.167 mol·L-1的乙酸溶液分别配制一系列浓度的壳聚糖溶液，分别加入0.02 mmol·L-1的溴甲酚绿 2.0 mL， 于 37℃水浴加热 5 min，以空白管为参照，在620 nm处测定吸收度。结果表明，壳聚糖浓度在1～10 mg·L-1的范围内，本法线性关系较好，回归方程为:A=7.17×10-3C+6.92×10-3（r=0.9995）。

2.4.2 专属性及回收率考察分别量取样品溶液及不加壳聚糖的样品溶液0.5 mL，各加入0.02 mmol·L-1的溴甲酚绿 2.0 mL， 于 37℃水浴加热 5 min，在400～800 nm间进行扫描。结果阴性样品在620nm处基本无干扰。平均回收率为103.2%。结果表明该方法准确、可靠。

2.4.3 样品含量的测定取3个批次的样品溶液各20 mL进行测定，壳聚糖含量为4.3 μg·mL-1。由于含量很低，对其他成分基本无影响，表明澄清的壳聚糖的用量较为合理。

3 讨 论

感冒清处方中含有昆布和螺旋藻，提取液含有较多杂质，影响口服液的澄清度，因此在筛选澄清工艺时，以有效成分含量为指标，同时考虑杂质量及外观澄清度，综合考察各种澄清方法的优劣。实验结果表明，常用的水醇法不适合本制剂的澄清，对多糖含量影响较大[8]；壳聚糖吸附法制得的成品澄清度好，且在长时间放置中未产生沉淀，稳定性较好，对有效成分的保留高于其他方法，能缩短生产周期，降低成本，可用于制备感冒清口服液。

处方中含有板蓝根，其有效成分为靛玉红等脂溶性成分，据文献报道，用壳聚糖作澄清剂，对靛玉红等脂溶性成分有影响，因此本实验对壳聚糖的残留进行了测定。与文献报道的壳聚糖直接加入到板蓝根的提取液不同，本工艺是将壳聚糖加入昆布螺旋藻提取液中，壳聚糖絮凝后沉淀基本除去，且测得的残留量极低，因此按本工艺方法各提取液混合后壳聚糖对靛玉红的吸附沉淀作用很少，对靛玉红的含量基本无影响，达到了既去除杂质、使溶液澄明，又能保留有效成分的目的。

[1] 庄筱葳，刘秀芳，毛贵元，等.西藏红雪茶多糖含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（4）：103-6.

[2] 李 静，王晓义，蒲宇红，等.健儿消食口服液澄清工艺的实验研究[J]. 中成药，2011，33（1）：158-60.

[3] 陈以新，盛华刚，林桂涛，等.壳聚糖絮凝沉降法与乙醇沉淀法对二冬汤精制的对比研究 [J].中成药，2011，33（4）：612-5.

[4] 高 燕，林桂涛，盛华刚，等.壳聚糖絮凝沉降法精制抗疲劳颗粒的研究[J].山东中医药大学学报，2011，35（6）：545-8.

[5] 官东秀，冯祚臻，黄卡夫，等.鲲鹏口服液制备工艺的优选[J]. 江苏药学与临床研究，2004，12（2）：59-60.

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[7] 郑铁生，王亚娜，宗爱萍.溴甲酚绿法测定壳聚糖的含量[J]. 中国药科大学学报，2005，36（6）：543-5.

[8] 胡 勇.壳聚糖用于澄清中药提取液的研究[J].江苏药学与临床研究，2002，10（2）：23-5.