复方乳酸钠注射液3号细菌内毒素检查方法的研究

付 聪，高 锦，嵇 杨，聂渝琼，程 洋，付晓菲

(1.解放军第307医院药学部,北京 100071；2.总后勤部卫生部药品仪器检验所,北京100071)

·药剂学·

复方乳酸钠注射液3号细菌内毒素检查方法的研究

付 聪1，高 锦2，嵇 杨2，聂渝琼2，程 洋2，付晓菲2

(1.解放军第307医院药学部,北京 100071；2.总后勤部卫生部药品仪器检验所,北京100071)

目的建立军队医院制剂复方乳酸钠注射液3号细菌内毒素检查方法。方法采用2005年版中国药典附录细菌内毒素检查法，以不同厂家的鲎试剂对2批复方乳酸钠注射液3号分别进行干扰试验。结果将复方乳酸钠注射液3号稀释为2倍稀释液后，用灵敏度为0.25 EU/ml的鲎试剂进行干扰试验，结果对鲎试剂与细菌内毒素的凝胶反应无增强、抑制干扰。结论内毒素限值确定为 0.5 EU/ml时，可应用鲎试剂进行细菌内毒素法检查。该方法准确、可靠，可代替家免法检查该注射剂的热原。建议《中国人民解放军医疗机构制剂规范》再版时将家兔法改为细菌内毒素法。

复方乳酸钠注射液3号；细菌内毒素；干扰试验

复方乳酸钠注射液3号为军队医院临床常用注射剂，其具有扩充血容量，补充电解质，用于术后、外伤及失血，防止或纠正酸中毒，休克作用。其所含的电解质成分比生理盐水和复方氯化钠注射液与血浆更接近，输入后可基本保持细胞外液的原组成比例，使水和电解质处于平衡状态。该药是2002年版《中国人民解放军医疗机构制剂规范》[1]收载的品种，原质量标准为家兔热原检查法。为了使军队医院更方便、快速、准确地对该注射剂进行质量控制，本文参照2005年版中国药典附录细菌内毒素检查法及有关文献[3]，对军队医院生产的2批复方乳酸钠注射液3号应用鲎试剂进行细菌内毒素检查的可行性做了研究。

1 药品和试剂

复方乳酸钠注射液3号(沈阳军区总医院，规格：500 ml：乳酸钠1.55 g、氯化钠3.0 g、氯化钾0.15 g、氯化钙0.1 g，批号2009022609；广州军区总医院，规格500 ml：乳酸钠1.55 g、氯化钠3.0 g、氯化钾0.15 g、氯化钙0.1 g，批号090123221)；鲎试剂(以下简称TAL，福州新北生化工业有限公司，批号08111012，规格0.1 ml，灵敏度：0.25 EU/ml；湛江博康海洋生物有限公司，批号0812090，规格0.1 ml，灵敏度：0.25 EU/ml)；细菌内毒素工作标准品(以下简称WSE，中国药品生物制品检定所，批号150601-200758 ，效价140 EU/支)；细菌内毒素检查用水(以下简称BET水，中国药品生物制品检定所，批号200804，规格10 ml)。

2 方法和结果

2.1细菌内毒素限值(L)的确定 根据复方乳酸钠注射液3号说明书得知本品最大用量为500 ml/(60 kg·h )。根据公式：L=K/M，其中 M为人用每公斤每小时的最大供试品量本品为500 ml/(60 kg·h )，K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂为 5 EU/(kg·h) ，则限值L=0.6 EU/ml，考虑到可能联合用药，最终确定限值为0.5 EU/ml。

2.2鲎试剂 灵敏度复核实验 按照2005年版中国药典[2]细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核，结果见表1。

表1 鲎试剂灵敏度复核

2批鲎试剂经细菌内毒素工作标准品检查λC在0.5λ～2.0λ之间，结果均符合规定，2批鲎试剂的灵敏度均为0.25 EU/ml。

2.3干扰试验预试验

2.3.1复方乳酸钠注射液3号最大有效稀释倍数(MVD)的计算 计算公式为MVD=CL /λ，其中L为复方乳酸钠注射液3号的细菌内毒素限值0.5 EU/ml， λ为鲎试剂标示灵敏度，C为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则C等于1.0 ml/ml。目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.5～0.03 EU/ml则复方乳酸钠注射液3号的对应最大有效稀释倍数为：MVDλ0.5=1倍；MVDλ0.25=2倍；MVDλ0.125=4倍； MVDλ0.06=8倍；MVDλ 0.03=16倍。

2.3.2实验操作 将2批复方乳酸钠注射液3号(原液)用BET水分别稀释为2倍、4倍、8倍、16倍稀释液，将此系列浓度溶液记为NPC(negative product control)。另制备同样系列浓度的供试液，并使原液、2倍、4倍、8倍、16倍稀释液的供试液中均含有2 λ浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC(positive product control)。取2个厂家灵敏度为0.25 EU/ml的鲎试剂， 分别与上述PPC和NPC进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性对照记为PC(positive control)和阴性对照记为NC(nagative control)，混匀后封口，置37 ℃恒温水浴60 min，结果见表2。

表2 复方乳酸钠注射液3号干扰预试验

注：NPC-用细菌内毒素检查用水稀释的复方乳酸钠注射液3号；PPC-含有2λ浓度细菌内毒素的复方乳酸钠注射液3号。

干扰试验预试验结果表明：用灵敏度为0.25 EU/ml的2个厂家鲎试剂分别对2批复方乳酸钠注射液3号进行细菌内毒素试验，结果原液、2倍、4倍、8倍、16倍稀释液均无干扰。

2.4正式干扰试验 为了最终确认是否存在抑制因素的影响，进行正式干扰试验。取2批复方乳酸钠注射液3号用BET水分别稀释为2倍稀释液，用该2倍稀释液和BET水分别将WSE稀释为含内毒素0.5(2 λ)、0.25(λ)、0.125(0.5 λ)、0.06 (0.25 λ)EU/ml的溶液，与2个厂家灵敏度为0.25 EU/ml的鲎试剂反应，每一浓度重复4管，并设阴性对照，按2005年版中国药典[2]细菌内毒素检查供试品干扰试验项进行实验，结果见表3。

正式干扰试验结果表明：2批复方乳酸钠注射液3号的2倍稀释液用2个厂家灵敏度均为0.25 EU/ml鲎试剂进行试验，结果ES均在0.5～2.0 λ及Et均在0.5～2.0 ES范围之内，符合药典规定，确认无干扰影响。

2.5样品细菌内毒素检查 按2005年版中国药典[2]细菌内毒素检查法，将2批复方乳酸钠注射液3号(用BET水稀释为2倍稀释液)，用2个厂家灵敏度为0.25 EU/ml的鲎试剂分别进行细菌内毒素检查，结果见表4 。

2.6样品热原(家兔法)检查 按《中国人民解放军医疗机构制剂规范》2002年版[1]，将2批复方乳酸钠注射液3号进行热原(家兔法)检查，结果均符合规定。

表3 复方乳酸钠注射液3号的干扰试验

表4 复方乳酸钠注射液3号细菌内毒素检查

3 讨论与结论

3.1由预干扰试验结果可知复方乳酸钠注射液3号原液、2倍、4倍、8倍、16倍稀释液与2个厂家灵敏度为0.25 EU/ml的鲎试剂反应均无抑制、增强干扰。 正式干扰试验用2倍稀释液样品，2个厂家灵敏度为0.25 EU/ml的鲎试剂，结果ES均在0.5～2.0 λ及Et均在0.5～2.0 ES范围之内，确认无干扰影响。对2批复方乳酸钠注射液3号依法检验(2005年版中国药典[2]附录细菌内毒素检查法)，结果均符合规定。

3.2实验结果证实，复方乳酸钠注射液3号细菌内毒素限值确定为 0.5 EU/ml，可应用鲎试剂进行细菌内毒素法检查，且鲎试剂法与家兔法检查结果一致。为了使医院更方便、快速、准确地对该注射剂进行质量控制，可用所建立的细菌内毒素检查法代替家兔法检查其热原。由于各单位该品种的生产工艺不同，建议生产该品种的军队医院对其进行细菌内毒素方法适用性研究，若适用性均良好，建议《中国人民解放军医疗机构制剂规范》再版时将家兔热原检查法改为细菌内毒素法。

[1] 中国人民解放军总后勤部卫生部.中国人民解放军医疗机构制剂规范2002年版[S].北京：人民军医出版社，2002：302.

[2] 中国药典.2005年版二部[S]. 化学工业出版社，附录,2005：85,88.

[3] 高 锦，付 聪，嵇 扬，等.甲硫酸新斯的明注射液细菌内毒素检查方法的研究[J].药物分析杂志，2008，28(7)：1141.

2010-12-22

[修回日期] 2011-01-18

ResearchonbacterialendotoxintestforcompoundsodiumlactateinjectionNo.3

FU Cong1，GAO Jin2，JI Yang2，NIE Yu-qiong2，CHENG Yang2，FU Xiao-fei2

(1．No. 307 Hospital of PLA ,Beijing 100071,China; 2. Institute for Drug and Instrument Control of Health Department of PLA ,Beijing 100071,China)

ObjectiveTo establish the method of bacterial endotoxin test for compound sodium lactate injection No.3.MethodsThe method based on the bacterial endotoxin test in Chinese pharmacopoeia 2005 edition was used.ResultsNeither inhibition nor enhancement was found in the bacterial eddotoxin interfere factors test after the drug was diluted and the sensitivity of TAL was 0.25 EU/ml.ConclusionThe results suggested that bacterial endotoxin test was suitable for the detection of endotoxin in compound sodium lactate injection No.3 and the bacterial endotoxin limit is 0.5 EU/ml.

compound sodium lactate injection No.3; bacterial endotoxin test; interfere factors test

付 聪(1983-)，女，药师 .

高 锦. Tel：(010)66949079,13683113004 ， E-mail:angelgaojin@163.com.

R927.12

A

1006-0111(2011)02-0120-03