中华真地鳖对兔骨折断端局部骨密度的影响

李慧丽，吕程云

（太原市中心医院，山西太原030009）

1 材料与方法

1.1 实验材料

中华真地鳖煎液（浓度0.5 mg/mL，由太原市中心医院中药房提供），X线摄片仪（德国西门子公司），双能X线骨密度仪（美国Lunar公司），全自动石蜡包埋机（EG-1140H，LEICA BioMED），轮转式切片机（RM2125，LEICA BioMED），图像摄影成像系统（020-507010，LEICA BioMED），新西兰白兔（太原市畜牧所）。

1.2 实验方法

1.2.1 新西兰白兔骨折模型的构建及分组 新西兰白兔24只，体重3 kg～4 kg，雌雄不限，造双侧前肢桡骨中段骨缺损，按组间均衡一致原则随机分为2组，每组12只。对照组每天给予生理盐水灌胃，实验组每天给予中药土元煎液1 mL/（kg·d）灌胃。

1.2.2 X线摄片 术后第20天、第35天、第60天，每组随机取4只兔子，处死后取出前臂尺桡骨，肉眼观察血肿转化及断端大体情况，行X线摄片，观察骨折愈合及骨折线处骨痂生长情况。

1.2.3 骨密度测量 应用双能X线骨密度仪对包括骨折处两端各0.5 cm骨质进行骨密度测量。各组、各时间点数据进行统计学分析。

1.2.4 HE染色 苏木素染液染色5 min，自来水洗1 min。盐酸酒精中分化30 s，自来水洗1 min。稀氨水反蓝30 s，自来水洗1 min。切片浸入伊红染液内复染4 min，自来水洗1 min。梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察。

1.3 统计学方法

采用SPSS13.0软件进行统计学处理，所有计量资料用均数±标准差表示，同一时间计量资料组间比较采用t检验，组内各时间点比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK检验，P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 X线摄片结果

结果见图1。

术后第15天：对照组骨折断端骨折线较清晰，周围骨痂生长较少；实验组骨折线较模糊，骨折处及周围密度影高，骨痂较多。术后第30天：对照组骨折断端骨折线仍清晰可见，周围骨痂生长少；实验组骨折处连续，骨折线较模糊，有大量的连续骨痴生长。术后第60天：对照组骨折断端骨折线模糊，断端有大量骨痴生长；实验组骨折线消失，骨皮质连续，周围有少许外骨痂，髓腔已通。

2.2 各组不同时间点骨密度测量结果比较

各组标本用双能X线骨密度仪测定，术后第15天、第30天时，实验组骨密度值高于对照组，差异比较有统计学意义（P<0.05）；术后第60天时，对照组骨密度值高于实验组（P<0.05）；在实验组中，与其他时间段比较，第30天时骨密度值最高（P<0.05）。结果见表1。

表1 各组不同时间点骨密度测量结果 （g/cm2± s）

表1 各组不同时间点骨密度测量结果 （g/cm2± s）

注：与对照组比较，1）P<0.05

组别 n对照组 12实验组 12第15天 第30天 第60天0.093±0.005 0.101±0.010 0.167±0.022 0.142±0.0111） 0.193±0.0191） 0.096±0.0081）

2.3 HE染色结果

结果见图2。术后第15天：对照组骨折断端髓腔内可见少量红细胞，较多的纤维组织增生和骨小梁；实验组骨折断端处可见大量骨小梁形成。术后第30天：对照组骨折断端处有较多的骨小梁，骨小梁边缘处散在骨基质形成，可见少量小血管增生；实验组骨折断端处大量骨小梁融合成片，较多骨基质形成。术后第60天：对照组骨折断端处骨小梁的边缘有成片的骨基质形成；实验组骨折断端处可见成熟的板层骨。

图2 HE染色结果

3 讨论

地鳖虫功效始载于《神农本草经》，具有破瘀血、续筋骨的功效，现代中药学已证实其主要含有正己烷与正丁醇提取物［3］［如β-谷甾醇（Ⅱ）、鲨肝醇（Ⅲ）、尿嘧啶（IV）、尿囊素（VI）］、石油醚提取物，（如胆甾醇、棕榈酸、5，4-二羟基-7-甲氧基黄酮）［4］、脂溶性维生素、氨基酸与蛋白质和矿物元素等其他成分［5-6］。

本研究结果表明，实验组骨痂生成量、骨折端修复及髓腔再通等方面明显优于对照组，特别是表现早、中期，其骨痂生成量明显多于同时期的对照组，间接表明地鳖虫可显著增加早、中期骨折断端髓腔内外骨痂生成。HE染色结果提示实验组胶原纤维、软骨组织、骨小梁及骨基质的形成时均早于对照组。

双能X线吸收测定法（DEXA）可精确地测量出全身任何部位的骨量，反映局部骨矿物质的含量，精准地预测骨折断端愈合程度。术后第15天、第30天时，实验组桡骨骨折愈合程度优于对照组。第60天时，对照组骨密质值高于实验组（P<0.05），但并不表示对照组桡骨骨折愈合程度要优于实验组，因为实验组骨折愈合端的髓腔已通，骨小梁的重建基本已完成，而对照组正处于骨痂生成的高峰期，因此表现出实验组“相对地”骨密度低，而实际上骨折已经愈合。

进一步了解中华真地鳖促进骨折愈合的机制，需要利用分子生物学及组织工程学等现代医药学技术从蛋白质水平，甚至基因水平来研究地鳖虫的成分及其作用机制。

［1］李长福，唐庆峰，张瑞昌，等.中华真地鳖生物学特性初步研究［J］.昆虫知识，2003，40（3）：258-261.

［2］付英杰，田景振，郭之平.土鳖虫化学成分制取方法及药理作用研究概况［J］.食品与药品，2005，7（4A）：28-30.

［3］卢颖，江佩芬.土鳖虫化学成分的研究［J］.中国中药杂志，1992，17（8）：487.

［4］金向群.土鳖虫脂溶性成分的研究［J］.中国中药杂志，1993，18（6）：355-366.

［5］杨耀芳.土蟞虫药效的实验研究进展［J］.中药材，2002，25（2）：150-152.

［6］Zhang Y Y，Xuan W J，zhao J L，et al.The complete mitochondrial genome of the cockroach Eupolyphaga sinensis（Blattaria：Polyphagidae）and the phylogenetic relationships within the Dictyoptera［J］.Mol Biol Rep，2010，37（7）：3 509-3 516.