通络益肾温阳方对糖尿病肾病大鼠疗效的实验研究

董正华，赵雪莲，赵延红，李小会，杨 轶，曾福海

（陕西中医学院，陕西咸阳712046）

糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）即糖尿病性肾小球硬化症，是糖尿病（diabetes mellitus，DM）最主要的微血管并发症之一，也是导致慢性肾功能衰竭的主要原因之一。其发病率在1型糖尿病中为40%～50%，2型糖尿病中约为20%，且一旦出现，多数患者将进展为终末期肾病（end stage renal disease，ESRD）。对糖尿病肾病的防治研究是目前医学界广泛关注的重要课题之一。我们用肾气丸合抵当汤化裁组成通络益肾温阳方，通过动物实验研究，证实本方对大鼠糖尿病肾病模型有一定的治疗效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SD成年雄性大鼠60只，体重（130±20）g，动物合格证号：SCXK（陕）2007-001。

1.1.2 药品与试剂 通络益肾温阳方由桃仁、水蛭、熟地、山茱萸、山药、酒大黄、炙黄芪、制附片、桂枝、泽泻、茯苓、丹皮组成，药物经常规煎煮过滤，浓缩至每毫升含生药1.438 g，置4℃冰箱备用。洛汀新（盐酸苯那普利片，批号：X1282）；糖适平（格列喹酮片，批号：070822）；链脲佐菌素（STZ，批号：S0130）。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与造模 SD大鼠适应性饲养1 w，用试纸法检测尿糖、尿蛋白阴性后，随机抽取9只作为正常对照组行假手术；其余51只作为模型组，按文献方法行左侧肾脏切除术合STZ腹腔注射复制DN模型［1］。造模72 h后，经尾静脉采血测空腹血糖，以空腹血糖≥16.7 mmol/L为糖尿病模型复制成功。造模成功后继续喂养1 w，随机抽取2只SD大鼠，测尿微量白蛋白>15 μg/mL，确定DN模型复制成功。将造模成功的47只大鼠随机分为病理对照组16只、中药治疗组16只、西药治疗组15只。

1.2.2 给药 正常对照组、病理对照组分别予以10 mL/（kg·d）蒸馏水灌胃；中药治疗组给予通络益肾温阳方煎液（1.438 g/mL），每只10 mL/（kg·d）灌胃；西药治疗组给予洛汀新（0.104 mg/mL）合糖适平（0.156 mg/mL）混悬液，每只10 mL/（kg·d）灌胃。各组大鼠灌胃药量按文献［2］折算，灌胃量根据体重变化做相应调整，每日1次，共持续10 w。各组大鼠自由摄食，饮水量不限。

1.2.3 标本采集及指标检测 实验结束前1 d，代谢笼收集24 h尿液总量，检测24 h尿蛋白定量，尿β2微球蛋白含量。开始用药前及治疗结束后，尾静脉采血，用罗康全活力型血糖仪及血糖试纸检测空腹血糖。实验结束后，心脏采血，离心血清，检测血清尿素氮、血肌酐。处死动物后，摘取所有大鼠的右侧肾脏，去包膜，电子天平称重，计算肾脏肥大指数（肾重/体重）。

1.2.4 肾脏病理学观察 于治疗第4、6、8周时病理对照组各处死1只，剖腹取出右肾，10%中性甲醛溶液固定，作病理切片。治疗第10周末，摘取各组大鼠右侧肾脏，10%中性甲醛溶液固定48 h，常规组织处理，石蜡包埋，连续组织切片4 μm，HE染色，光镜下观察肾脏病理改变。

1.3 统计学方法

各组数据采用SPSS17.0统计软件进行处理，以均数±标准差（x±s）表示，组内比较采用独立样本t检验。

2 结果

2.1 一般情况

在实验过程中，正常对照组大鼠食欲旺盛，饮水正常，精神状态良好，毛色光泽，反应灵敏，动作敏捷，体重显著增加，全部存活。病理对照组大鼠饮水量、食量显著增加，多尿，但显著消瘦，且精神萎靡不振，反应迟钝，动作缓慢，弓背蜷体，鼠毛无光泽，口唇、耳缘苍白，粪质稀溏，个别出现肢体感染和断齿，最后存活9只。中药治疗组、西药治疗组也出现上述表现，但程度较轻，各存活9只。造模后第46天，除正常对照组外其余各组大鼠尿蛋白定性检测都陆续出现阳性，结果见表1。

表1 治疗后各组大鼠尿蛋白定性比较 （只）

2.2 治疗前后各组大鼠证候评分变化比较

［3-4］制定模型大鼠中医证候评分标准，分值越高，症状越严重。结果见表2。

表2 各组大鼠证候评分变化比较 （分±s）

表2 各组大鼠证候评分变化比较 （分±s）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与病理对照组比较，2）P＜0.01

组别 n 治疗前 治疗后正常对照组 9 7.4±0.93 7.6±0.87病理对照组 16 43.2±5.391） 83.9±2.381）中药治疗组 16 42.7±5.171） 62.5±5.191）2）西药治疗组 15 42.9±2.911） 75.1±3.651）2）

2.3 治疗前后各组大鼠体重变化比较

结果见表3。

表3 各组大鼠治疗前后体重变化比较 （g ±s）

表3 各组大鼠治疗前后体重变化比较 （g ±s）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与病理对照组比较，3）P＜0.01

组别 n 治疗前 治疗后正常对照组 9 215.33±5.75 492.56±17.80病理对照组 16 205.56±5.131） 146.11±37.972）中药治疗组 16 207.25±9.331） 305.00±32.322）3）西药治疗组 15 207.47±7.471） 314.67±16.122）3）

2.4 治疗后各组大鼠24 h尿蛋白定量、尿β2微球蛋白含量比较

结果见表4。

表4 治疗后各组大鼠24 h尿蛋白定量、尿β2微球蛋白比较 （±s）

表4 治疗后各组大鼠24 h尿蛋白定量、尿β2微球蛋白比较 （±s）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与病理对照组比较，2）P＜0.01

尿β2微球蛋白（μg/mL）正常对照组 9 2.61±0.526 0.034 4±0.041 26病理对照组 9 14.52±2.7451）0.177 8±0.028 631）中药治疗组 9 10.54±1.4731）2）0.110 0±0.018 711）2）西药治疗组 9 9.55±1.4041）2）0.103 3±0.018 031）2）组别 n 24 h尿蛋白定量（mg/24 h）

2.5 治疗前后各组大鼠空腹血糖变化比较

结果见表5。

表5 治疗前后各组大鼠空腹血糖变化比较 （mmol/L±s）

表5 治疗前后各组大鼠空腹血糖变化比较 （mmol/L±s）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与病理对照组比较，2）P＜0.01

组别 n 治疗前 治疗后正常对照组 9 6.10±1.03 6.68±0.72病理对照组 16 23.38±2.681） 27.67±1.281）中药治疗组 16 22.50±2.561） 16.82±1.281）2）西药治疗组 15 21.41±2.991） 15.14±1.231）2）

2.6 治疗前后各组大鼠BUN、Scr比较

结果见表6。

表6 治疗后各组大鼠BUN、Scr比较 （±s）

表6 治疗后各组大鼠BUN、Scr比较 （±s）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与病理对照组比较，2）P＜0.01

组别nBUN（mmol/L）Scr（μmol/L）正常对照组 9 7.20±0.84 85.29±2.16病理对照组 9 17.83±1.671）210.98±7.091）中药治疗组 9 13.48±0.901）2）149.81±3.741）2）西药治疗组 9 13.44±1.141）2）153.31±2.581）2）

2.7 治疗后各组大鼠肾脏肥大指数比较

结果见表7。

表7 治疗后各组大鼠肾脏肥大指数比较 （±s）

表7 治疗后各组大鼠肾脏肥大指数比较 （±s）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与病理对照组比较，2）P＜0.01

组别 n 肾重（g）正常对照组 9 1.162 1±0.223 0病理对照组 9 1.852 0±0.273 4中药治疗组 9 1.834 9±0.391 3西药治疗组 9 2.028 3±0.331 5体重（g）肾脏肥大指数（肾重/体重）492.56±17.80 0.002 36±0.000 48 146.11±37.97 0.013 40±0.003 761）305.00±32.32 0.006 15±0.001 721）2）314.67±16.12 0.006 49±0.001 251）2）

2.8 各组大鼠肾脏病理学观察

图1 第4周末病理对照组（HE×200）

图2 第6周末病理对照组（HE×200）

图3 第8周末病理对照组（HE×200）

图4 第10周末病理对照组（HE×200）

图5 第10周末西药治疗组（HE×200）

图6 第10周末中药治疗组（HE×200）

图7 第10周末正常对照组（HE×200）

病理对照组见图1～见图4，西药治疗组见图5，中药治疗组见图6，正常对照组见图7。与正常对照组比较，病理对照组大鼠肾小球基底膜增厚，肾小球及肾间质内充血明显，肾小管内可见絮状、颗粒状或块状物，提示模型复制成功。动态观察提示病理对照组大鼠肾脏病理损害从模型建立初期已经发生，并且呈进行性加重。中、西药治疗组与病理对照组比较，其肾小球基底膜增厚性病变减轻，肾小管内絮状、颗粒状或块状物减少。提示通络益肾温阳方能延缓DN大鼠的肾脏病理损害。

3 讨 论

中医学虽无糖尿病肾病的概念，但对糖尿病演变成为糖尿病肾病已有一定认识。糖尿病肾病的原发病是糖尿病，糖尿病属中医学“消渴”范畴。因消渴病而发展为水肿，即相当于糖尿病并发糖尿病肾病［5］。如《圣济总录》云：“消渴日久，肾气受伤，肾主水，肾气衰疲，气化失常，开阖不利，水流聚于体内而出现水肿。”

消渴病是一种慢性迁延性疾患，初期以阴虚燥热为基本病机。消渴迁延多年，久病及肾，久病入络，本虚标实，肾虚络瘀是糖尿病肾病的病机特点。本“虚”是指气阴两虚，阴损及阳，阴阳两虚，“实”则是在正虚的前提下，血瘀络阻、水饮湿浊等毒邪蕴蓄［6］。根据上述病机的认识，我们提出通络益肾法辨治DN的思路。为体现中医辨证论治的特色，在前期临床及实验研究的基础上［7-10］，进一步提出通络益肾滋阴法和通络益肾温阳法，分别用于DN肾阴虚络瘀证和肾阳虚络瘀证。通络益肾温阳方以经方肾气丸合抵当汤去虻虫，加黄芪而成，全方扶正祛邪，消补兼施，具有温阳滋阴、活血通络、益肾泄浊之效，适用于DN肾亏阴阳两虚，偏于阳虚兼瘀血阻络者。

本实验显示，通络益肾温阳方治疗10 w后，DN大鼠一般状况较病理对照组明显改善，体重较病理对照组明显增加（P＜0.01）；24 h尿蛋白定量、尿 β2微球蛋白、空腹血糖、血清尿素氮、血肌酐、肾脏肥大指数均显著低于病理对照组（P＜0.01）；肾组织病理损伤亦有明显减轻。结果证实通络益肾温阳方对DN模型大鼠具有一定治疗效果。

参考文献

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［5］赵雪莲，董正华.中医对糖尿病肾病的认识及治疗现状［J］.陕西中医学院学报，2009，32（3）：75-76.

［6］李小会，董正华，丁辉，等.糖尿病肾病病因病机的探讨［J］.陕西中医，2005，26（6）：552-553.

［7］董正华，李小会，曹广顺，等.通络益肾汤对链脲佐菌素DN大鼠疗效的实验研究［J］.陕西中医学院学报，2006，29（4）：40-42.

［8］李小会，董正华，曹广顺，等.通络益肾汤对链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠血浆一氧化氮影响的实验研究［J］.时珍国医国药，2006，17（8）：1 399.

［9］董正华，李小会，曹广顺，等.通络益肾汤对链脲佐菌素DN大鼠血浆 NO 影响的实验研究［J］.陕西中医，2006，26（6）：757-759.

［10］董正华，曹广顺，曹文，等.通络益肾汤治疗糖尿病肾病30例［J］.上海中医药杂志，2007，41（9）：46.