不同穴位简易穴位埋线对哮喘大鼠肺组织ICAM-1和NF-κB表达的影响*

陈盼碧，崔 瑾，杨孝芳

贵阳中医学院针灸推拿系贵阳550002

(2011-01-04收稿 责任编辑 王 曼)

哮喘一证，大多病在肺，其本在肾。作者通过临床观察及治疗经验发现，哮喘患者无论临床有无肾虚之证，皆存在隐藏性肾虚。已证实［1］简易穴位埋线可抑制哮喘大鼠气道炎症，其机制可能与抑制哮喘大鼠核转录因子-κB(nuclear transcription factorκB，NF-κB)活性和下调受 NF-κB 调控的细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)的表达，从而减少肺组织中炎性细胞的募集、浸润有关。但是简易穴位埋线对于哮喘的防治是从标治疗效果好还是从本治疗效果好或者标本兼治效果更好，还不清楚。作者从标、从本、从标本兼治不同角度选取穴位观察简易穴位埋线对哮喘模型大鼠肺组织ICAM-1和NF-κB表达的影响，为进一步研究和临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器 ①试剂:卵蛋白(GradeⅡ，美国Sigma公司)，地塞米松磷酸钠注射液(批号0509302，贵州光正制药有限责任公司)，兔抗鼠NF-κB、兔抗人 ICAM-1、SP试剂盒、DAB 显色剂等(武汉博士德生物工程有限公司)。②仪器:AR2140型电子分析天平(美国奥豪斯有限公司)，BI-2000医学图像分析系统(成都泰盟电子有限公司)，生物显微镜(日本OLYMPUS光学仪器有限公司)，402型超声雾化器(上海四菱医疗器械厂)。

1.2 动物及分组 Wistar雄性大鼠48只，质量(300±50)g，由贵阳医学院实验动物研究中心提供(合格证号:0003474)。随机分为肺俞膻中组、肾俞组、肺俞膻中肾俞组、地塞米松组、模型组、对照组，每组8只。除对照组外，其余各组大鼠参照文献［2］复制哮喘模型:于实验第1天和第8天分别腹腔注射111 g/L卵蛋白和氢氧化铝溶液1 mL致敏，于实验第15天起开始雾化吸入11 g/L卵蛋白溶液20 min诱喘，雾化流量3 mL/min，1次/d，连续2周。对照组用注射用水代替卵蛋白液进行注射和雾化吸入。地塞米松组、模型组分别于实验第15天起腹腔注射地塞米松1.5 mg/kg、注射用水20 mg/kg，1次/d，连续2周。对照组不作任何处理。余3组进行埋线处理。

1.3 简易穴位埋线 依据文献［3］，肺俞膻中组选取“肺俞”、“膻中”，肾俞组选取“肾俞”，肺俞膻中肾俞组选取“肺俞”、“膻中”、“肾俞”进行简易穴位埋线。具体操作:实验第1天埋线直到实验结束。先将羊肠线置于消毒弯盘中，倒入生理盐水冲洗，并剪成0.3～0.5 cm小段若干。将肠线从无菌9号注射针针尖穿入，再将预先剪去针尖的毫针从注射针针尾部穿入，组成一套。埋线时一穴一针，两人配合，一人左手捉拿大鼠，右手牵拉大鼠后肢，另一人穿刺埋线。先用乙醚雾化吸入麻醉大鼠，碘伏、乙醇消毒埋线穴区皮肤，“肺俞”、“肾俞”直刺6 mm，“膻中”平刺6 mm。右手拇指抵住毫针针尾作注射状，缓慢将肠线挤入穴内，觉注射针内有空虚感时方可出针，并确认肠线已埋入鼠体内，埋线完后，大鼠穴区无需任何处理。

1.4 肺组织NF-κB、ICAM-1检测 在末次诱喘后2～4 h内股动脉放血处死大鼠，开胸，结扎右肺，常规留取右肺中下叶组织，多聚甲醛固定，常规石蜡包埋和切片(片厚4μm)。采用免疫组织化学染色SP法检测肺组织 NF-κB、ICAM-1。肺组织切片脱蜡，热抗原修复。NF-κB、ICAM-1一抗均按1-150稀释，按SP试剂盒说明书操作。每张切片随机选取结构较完整的支气管壁，采用BI-2000医学图像分析系统检测支气管上皮阳性细胞的平均光密度值，分别代表NF-κB、ICAM-1的相对表达量。

1.5 统计学处理 采用SPSS11.5进行统计学处理，6组大鼠肺组织NF-κB、ICAM-1相对表达量的比较采用单因素方差分析和SNK-q检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 6组大鼠肺组织ICAM-1蛋白的表达 见图1、表1。ICAM-1阳性表达在胞质。对照组大鼠支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、肺小血管内皮细胞等有少量ICAM-1表达，平滑肌细胞未见其表达;模型组大鼠肺组织上述各部位呈强阳性表达;4个治疗组ICAM-1表达较模型组减少，尤以地塞米松组、肺俞膻中肾俞组、肺俞膻中组最明显。

2.2 6组大鼠肺组织NF-κB的表达 见图2、表1。NF-κB阳性表达在胞核。对照组大鼠气道壁可见少许NF-κB表达;模型组气道壁NF-κB表达显著增高;地塞米松组、肺俞膻中肾俞组、肾俞组NF-κB表达均较模型组降低，而肺俞膻中组与模型组间无差异性。

表1 6组大鼠肺组织ICAM-1和NF-κB相对表达量

3 讨论

支气管哮喘是临床常见病、多发病，也是一种难治病。历代医家认为，该病病理变化的主要脏器以肺为主，涉及脾、肾，后期累及心脏。因此，哮喘一证，大多病在肺，其本在肾。而根据作者的临床观察及治疗经验发现:哮喘患者无论临床有无肾虚之证，皆存在隐藏性肾虚。从查阅到的文献资料［4］中也证实了这一观点。

作者从目前国内现存有关哮喘病并能检索出针灸处方文献的中医古籍共81部中，检索出针灸处方文献991条，其中单穴处方503条，多穴处方488条。哮喘古代针灸处方中腧穴、天突、膻中、肺俞、足三里、气海、俞府、太渊、期门、昆仑、肾俞、廉泉、中腕、璇玑及华盖频次均＞42次。而在对查阅到的近代穴位埋藏疗法治疗哮喘的近50多篇相关文章进行统计后发现，选用率最高的是定喘、膻中以及肺俞。肺俞、膻中所处的节段位置正好与肺相应，并前后呼应;从穴位的功能、主治来看:肺俞是肺的背俞穴，能疏风解表，宣肺理气，是调理肺脏功能，治疗肺脏疾病的首选穴。针刺肺俞等穴，无论吸气或呼气阶段的气道阻力，都从增高状态明显下降，特别是呼气时的气道阻力下降最为明显［5］。膻中穴为人身之气所汇之处，是气会，又为任脉穴，并通过列缺与手太阴肺相通，具有宽胸利膈、清肺降气之功效。在临床中作者也发现哮喘患者膻中穴处有明显压痛。但只肺俞、膻中两穴配用意在驱邪为主，主治肺，故为治标之法。肾俞所处的节段位置也正好与肾相应，是肾脏原气输注的部位，具有益肾助阳，强腰利水之功，是治疗肾脏疾病的首选穴位，且可补一身之元气。但单用肾俞旨在扶正为主，主治肾，故为治本之法。临床上治疗哮喘一般宜先祛邪后扶正，但不能只顾标而不顾本，或者只扶正而不及标，由于哮喘患者无论临床有无肾虚之证，皆存在隐藏性肾虚，因此治疗必须标本兼顾。

该研究中肺俞膻中肾俞组既有肺俞、膻中的治标之法，又集肾俞治本之法于其中，故为标本兼治之法的组合。实验结果显示:肺俞膻中肾俞穴位埋线可降低哮喘大鼠肺组织ICAM-1、NF-κB的表达且作用强于肾俞组、肺俞膻中组，与地塞米松效果相似。提示标本兼治，诸穴合用，前后呼应，且补肾纳气、培土化元、调理肺气、扶正祛邪，使“正气存内，邪不可干”，哮喘得以控制。故而得出结论:集标本兼治于一体的肺俞膻中肾俞简易穴位埋线对于哮喘大鼠的治疗效果较好。

［1］崔瑾，陈盼碧，杨孝芳，等.简易穴位埋线对哮喘大鼠ICAM-1和NF-κB表达及气道炎症的影响［J］.中国针灸，2010，3(2):141

［2］王妍，金先桥.支气管哮喘实验模型的研究进展［J］.国际呼吸杂志，2006，26(1):70

［3］李忠仁.实验针灸学［M］.北京:中国中医药出版社，2003:326

［4］许得盛.“温阳片”防治支气管哮喘远期疗效观察［J］.上海中医药杂志，1989(12):4

［5］贺志光.中医学［M］.3版.北京:人民卫生出版社，1995:500