食管鳞状细胞癌组织中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表达

赵富周，杨鲲鹏，庞志刚，张 典，谷 博

郑州大学第二附属医院胸外科郑州450014

(2011-01-07收稿 责任编辑 徐春燕)

食管癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，早期即可发生淋巴管转移［1］。迄今为止，关于食管癌淋巴管的生成和淋巴结转移的具体机制尚不十分清楚。缺氧是不同来源的实体肿瘤的常见现象，缺氧环境下肿瘤细胞可通过缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor，HIF)提高其对缺氧的耐受性并刺激下游基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表达，从而促进血管淋巴管的生成;趋化因子受体(chemokine receptor，CCR)与其配体结合可以促进肿瘤细胞的增殖，肿瘤血管、淋巴管的生成以及肿瘤细胞定向迁移［2-4］。作者应用免疫组化法检测了食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)组织及癌旁正常食管黏膜组织中HIF-1α、CCR7及VEGF-C的表达，探讨3者与ESCC侵袭和淋巴结转移的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 45例ESCC标本均为郑州大学第二附属医院手术切除且经病理证实。45例患者中男24例，女21例;年龄41～73岁，中位年龄58.3岁。肿瘤直径＜3 cm 23例，≥3 cm 22例;高、中分化24例，低分化和未分化21例;病理分期:Ⅰ、Ⅱ期14例，Ⅲ、Ⅳ期31例;伴有淋巴结转移30例。每例标本均同时取癌旁正常食管黏膜组织作为对照。

1.2 2种组织中 HIF-1α、CCR7和 VEGF-C 蛋白的检测 采用免疫组化SP法。鼠抗人HIF-1α单克隆抗体购自BD公司，羊抗人CCR7多克隆抗体购自Santa Cruz公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，SP试剂盒和DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。切片常规脱蜡，微波抗原修复，HIF-1α抗体和CCR7抗体按1-100稀释，VEGF-C抗体按1-200稀释，操作按试剂盒说明进行。用已知的ESCC阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定 ①HIF-1α和 CCR7:参照 Zhong等［5］的方法，HIF-1α 以胞质和(或)胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞。CCR7以胞质和(或)胞膜中出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。先按整张切片中阳性细胞百分比评分，阳性细胞百分比为0%、1% ～ 、5% ～、25% ～及75% ～100%分别计为0、1、2、3和4分。再按整张切片中细胞染色深度评分，无色、浅黄色、棕褐色分别计为0、1、2分。2项评分相乘，积分 ＜4分判为阴性，≥4分判为阳性。②VEGF-C:以胞质中出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。每张切片于高倍镜下选取5个视野，每个视野计数200个细胞，计算阳性细胞百分比，＜20%为阴性，≥20%为阳性［6］。

1.4 统计学处理 采用SPSS 10.0进行分析。应用配对χ2检验比较2种组织中3种蛋白表达的差异，应用χ2检验分析ESCC组织中3种蛋白的表达与临床病理特征的关系，采用列联系数分析ESCC组织中3指标的关联性，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 2种组织中 HIF-1α、CCR7和 VEGF-C 蛋白的表达 见图1，表1～3。ESCC组织中 HIF-1α、CCR7及VEGF-C蛋白的阳性表达率分别为55.6%、71.1%和64.4%，高于癌旁正常食管黏膜组织的11.1%、17.8%和 35.6%。

图1 癌旁正常食管黏膜(A)和ESCC(B)组织中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表达(SP，×400)1:HIF-1α蛋白;2:CCR7蛋白;3:VEGF-C蛋白。

2.2 ESCC 组织中 HIF-1α、CCR7 和 VEGF-C 蛋白的表达与临床病理特征的关系 见表4。

2.3 ESCC 组织中 HIF-1α、CCR7 和 VEGF-C 蛋白表达的关联性 见表5。

表1 2种组织中HIF-1α蛋白的表达 例

表2 2种组织中CCR7蛋白的表达 例

表3 2种组织中VEGF-C蛋白的表达 例

表4 不同人口学与临床病理特征的ESCC组织中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表达比较

续表4

表5 ESCC组织中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白表达的关联性 例

3 讨论

侵袭转移是恶性肿瘤的生物学特征之一，是肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤细胞通过诱导HIF的合成来适应缺氧。CCR7是CC类趋化因子受体的成员之一，研究［7］证实CCR7在多种不同类型的肿瘤组织中有表达，并且CCR7与其配体相互作用与这些肿瘤的淋巴结转移密切相关。有学者［8］发现，胃癌细胞产生的VEGF-C可诱导肿瘤淋巴管增生和扩大。动物模型［9］也证实VEGF-C参与肿瘤淋巴管生成的重要环节。在许多人类肿瘤中，肿瘤细胞可以通过表达VEGF-C诱导淋巴管生成，促进肿瘤细胞发生淋巴转移［10］。

该结果证实，与癌旁正常食管黏膜组织相比，ESCC组织中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表达明显增高，且ESCC组织中HIF-1α、CCR7和VEGFC蛋白的表达与肿瘤病理分期和淋巴结转移关系密切，而与性别、年龄、肿瘤大小及分化程度无关。关联性分析的结果显示ESCC组织中CCR7和HIF-1α蛋白的表达及CCR7和VEGF-C蛋白的表达有关联性，说明3者在肿瘤淋巴管的形成及淋巴结的转移中可能有协同作用。

总之，HIF-1α、CCR7和 VEGF-C蛋白在 ESCC组织中高表达，调控ESCC的侵袭和淋巴结转移，它们可能成为新的预测ESCC淋巴结转移的指标和淋巴转移途径干预治疗的靶点。

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