氢溴酸右美沙芬片含量测定方法研究

范文成，叶晓红，常美玲，粘立军，张国良

(石家庄以岭药业股份有限公司，河北 石家庄 050035)

氢溴酸右美沙芬片为国家批准生产的仿制药，主药为氢溴酸右美沙芬，辅料为乳糖、淀粉、羧甲淀粉钠。该品种为镇咳类药品，用于上呼吸道感染、支气管炎等引起的咳嗽，疗效显著，各企业生产量大，检验方法多为紫外分光光度法。在检验工作中，笔者发现检验结果重复性差、波动大，有些批次含量转移率低。为此，笔者对可能影响含量测定结果的因素进行了考察，现报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(美国Waters);紫外分光光度计(日本岛津公司);AG285型电子天平(梅特勒－托利多仪器有限公司)。氢溴酸右美沙芬对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100201－200502，供含量测定用);乙腈为色谱纯，其余为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 影响因素试验

2.1.1 样品制备

按处方工艺分别制备空白样品和正常样品，样品分制粒和不制粒两种，用蔗糖代替乳糖，其他不变，制备同样的样品。共计8个样品，即乳糖空白(不制粒)、乳糖空白(制粒)、蔗糖空白(不制粒)、蔗糖空白(制粒)、乳糖样品(不制粒)、乳糖样品(制粒)、蔗糖样品(不制粒)、蔗糖样品(制粒)。

2.1.2 空白辅料对测定结果的影响

对不同辅料制备的空白样品用紫外分光光度法[1]分别进行了测定。结果见表1。可见，辅料对测定结果影响显著，最高可达16%，制粒后的吸收比不制粒高。

表1 不同辅料对测定结果的影响

2.1.3 不同检验溶剂(水)对测定结果的影响

对不同的纯化水溶解的样品用紫外分光光度法进行了含量测定。结果见表2。可见，高纯水的含量最低，乐百氏纯净水的含量最高;不制粒的蔗糖样品和乳糖样品含量无区别，制粒后蔗糖比乳糖高约6%(乐百氏水);乳糖制粒后含量降低9%蔗糖制粒后含量降低3%(乐百氏水)。试验过程中还发现，用高纯水和自制纯净水测定的2个平行样结果差异大，而用乐百氏纯净水测定的结果平行性好(RSD≤2%)，故确定用乐百氏纯净水进行含量测定。

表2 不同检验用水对含量测定结果的影响(%)

2.1.4 改进检验用水后效果

对改进检验用水后生产的8批氢溴酸右美沙芬片进行了含量测定。结果表明，所有批次含量转移率均在95.0%以上，且测定结果平行、准确性好。

2.2 含量测定(高效液相色谱法)

2.2.1 色谱条件[2]

色谱柱:C18柱(150mm×4.6mm，5μm);流动相:以含 0.007mol/L磺基丁二酸钠二辛酯和0.007 mol/L硝酸铵的乙腈－水(70∶30)溶液(用冰醋酸调节pH至3.4);检测波长:280 nm;进样量:20 μL。理论板数按氢溴酸右美沙芬计算应不低于2 000，拖尾因子不得大于 2.5。

2.2.2 溶液制备

精密称取氢溴酸右美沙芬对照品适量，用流动相溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.15 mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取氢溴酸右美沙芬片20片，研细，精密称取适量(约相当于氢溴酸右美沙芬37.5 mg)，置50 mL量瓶中，加流动相适量，超声使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5 mL，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验:按处方制备空白样品，照供试品溶液的处理方法制备阴性对照品溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪。结果见图1，表明阴性对照品溶液在氢溴酸右美沙芬色谱峰位置处无相应峰出现，表明辅料对样品含量测定无影响。

图1 高效液相色谱图

标准曲线绘制:取氢溴酸右美沙芬对照品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释成每1 mL约含1 mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密量取该溶液 5.0，2.0，1.0，0.5 mL，置 25 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。取对照品贮备液及上述稀释后溶液各20 μL，注入液相色谱仪。以质量浓度 X(g/L)对峰面积 Y作标准曲线，得线性回归方程 Y=6 644 184 X －4 745.92，r=0.999 9(n=5)。结果表明，氢溴酸右美沙芬质量浓度在0.02058～1.029 g/L范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，重复进样6次，每次20 μL，记录氢溴酸右美沙芬峰面积。结果的 RSD为0.53%(n=6)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，在 0，2，4，6，8，12 h 时分别进样 20 μL，记录氢溴酸右美沙芬峰面积。结果的 RSD为1.42%(n=6)，表明供试品溶液在室温放置12 h稳定。

回收率试验:取对照品溶液适量，按供试品制备方法制备供试品溶液，平行制备 6份，分别进样 20 μL。结果平均回收率为99.75% ，RSD 为 1.10%(n=6)。

重复性试验:精密称取同一批样品5份，按拟订的方法分别进行处理，测定。结果平均含量为99.6%，RSD为1.20%(n=5)，表明方法的重复性很好。

2.2.4 样品含量测定

取样品10批，按拟订的方法制备供试品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法按峰面积计算样品中氢溴酸右美沙芬的含量。结果含量平均值为100.5%，RSD为2.13%(n=10)，表明样品批次间差异小。

3 讨论

对2007年至2009年生产的4批氢溴酸右美沙芬片进行了重复性试验(每个批号做8个样品)，结果表明氢溴酸右美沙芬片同一批次含量的波动明显，差异超过5%，重复性差。对以往生产的19批氢溴酸右美沙芬片含量转移率进行了统计，结果19批成品中有9批含量转移率低于95.0%。

用紫外分光光度法测定含量时，辅料空白均有吸收，按主药100%投料制成片后，总体的含量转移率并未超出100%，可能在生产过程中主药与辅料发生作用，使整体的吸光度无太大变化，对不同厂家的辅料是否均有干扰有待进一步验证。

使用不同的检验用水对测定结果有明显影响，乐百氏纯净水稳定性较好，结果较高。氢溴酸右美沙芬溶解度与水的pH或水的制备工艺可能有一定关系，在现有检验方法下，用乐百氏纯净水进行检验，结果重现性好。

曾考察了用流动相和水分别溶解样品，结果表明流动相超声溶解样品，比水提取完全，故选用流动相作为溶剂。

本试验中，还建立了高效液相色谱法测定氢溴酸右美沙芬片的含量，方法可靠，结果客观、准确，不受辅料干扰，可用于该品种的质量控制。

[1]YBH19152006，国家药品标准[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:558.