高效液相色谱法测定注射用奥拉西坦的含量

姜卫东，卢凯旋 ，万 顺，周 玲，任荣军

(1.湖南健朗药业有限责任公司，湖南 岳阳 414000; 2.湖南省岳阳市药品检验所，湖南 岳阳 414000)

奥拉西坦为新一代脑代谢改善药，属新型吡咯烷酮类(环GABOB)衍生物，对脑血管病、脑损伤、脑瘤(术后)、颅内感染、痴呆、脑变性疾病等均有良好疗效。目前其已在欧洲、美国、日本和韩国上市并广泛应用于临床，现行药品标准采用氮测定法测定奥拉西坦含量[1]，方法专属性不强，为有效控制本品质量，笔者采用反相高效液相色谱法，建立了奥拉西坦的含量测定方法，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津L－20AT系列高效液相色谱仪(Slution色谱工作站，二极管阵列检测器);电子分析天平(梅特勒托利多仪器上海有限公司)。奥拉西坦对照品(由湖南健朗药业有限责任公司提供，纯度为99.8%);注射用奥拉西坦(湖南健朗药业有限责任公司，批号分别为20091001，20091002，20091003);甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Ultimate XB－C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(5∶95);检测波长:214 nm;流速:0.8 mL/min;进样量:10 μL。理论板数按奥拉西坦计算应不低于3 000。

2.2 溶液制备

取奥拉西坦对照品约20 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取本品约相当于奥拉西坦20 mg的量，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。取本品辅料适量，同供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 专属性试验

取注射用奥拉西坦约20 mg，置锥形瓶中，按下列方法进行处理。酸破坏性试验:加0.1 mol/L盐酸10 mL溶解后，水浴中回流30 min，冷却，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH至近中性;碱破坏性试验:加0.1 mol/L氢氧化钠溶液5 mL溶解后，水浴中加热5 min，冷却，用0.1 mol/L盐酸溶液调节pH至近中性;高温破坏试验:置105℃恒温干燥箱中5 h;氧化破坏试验:加3%过氧化氢2 mL溶解后，放置2 h;光照试验:于4 700 lx下光照破坏2 d。然后均加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，该色谱条件可将奥拉西坦与降解产物及辅料完全分离，分离度大于1.5。从二级管阵列检测器提取的色谱图上可知奥拉西坦峰的纯度角小于阈值，表明该峰为单一峰，该方法专属性良好。见图1。

图1 方法专属性考察色谱图

2.4 方法学考察

线性关系考察与定量限确定:精密称取奥拉西坦对照品16.16 mg，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取对照品贮备溶液稀释一定体积，制成质量浓度分别为 0.040 4，0.080 8，0.161 6，0.242 4，0.323 2 g/L 的对照品溶液，按上述色谱条件分别精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品质量浓度 C(g/L)为横坐标、峰面积 A为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A=7.98×106C+20 923.74，r=0.999 8(n=5)。结果表明奥拉西坦对照品质量浓度在0.040 4～0.323 2 g/L范围内与峰面积呈良好的线性关系。另精密称取奥拉西坦对照品10.1 mg，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，精密量取适量，加流动相逐步稀释至信噪比 S/N约为10，进样量为10 μL，测得奥拉西坦的最低检出限为1.28 ng。

精密度试验:取同一对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，每次10 μL。结果奥拉西坦对照品平均峰面积为1 630 382，RSD为0.64%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，8，12，24 h时进样10 μL。结果奥拉西坦峰面积的 RSD=0.4%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

表1 回收率测定结果(n=6)

重复性试验:取本品约相当于奥拉西坦20 mg，同时称取6份，分别置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取奥拉西坦对照品约20 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按上述色谱条件测定，分别精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果注射用奥拉西坦的平均含量为104.2%，RSD 为 0.6%(n=6)。

加样回收试验:称取奥拉西坦对照品约16，20，24 mg各3份，精密称定，确定分别置100 mL量瓶中，各加空白辅料适量，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液;另称取对照品约20 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取上述溶液各10 μL，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率。结果见表1。

2.5 样品含量测定

取3批不同批号的样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，按拟订的色谱条件分别进样测定。结果批号为20091001，20091002，20091003的样品中奥拉西坦含量分别为101.6，101.2，101.8 mg/g，含量平均值为101.5 μg/g。

3 讨论

奥拉西坦极性较大，易溶于水，不溶于乙腈，常规测定方法为氮测定法[1]，文献报道多采用氰基柱[2－3]、氨基柱[4]的高效液相色谱法进行测定。笔者通过考察不同的色谱柱，发现Ultimate C18柱与氰基柱均能对奥拉西坦进行分离，但对于与类似结构化合物吡拉西坦的分离及峰形对称性，前者效果更好。并且，采用Ultimate C18柱分离奥拉西坦，出峰时间快，方法耐用性较好。

奥拉西坦在紫外区无吸收，选用示差析光检测器，检测灵敏度太低;采用紫外检测器的末端吸收，经考察奥拉西坦在210～220 nm波长之间，检测灵敏度随检测波长的增长而降低，同时因流动相中甲醇在末端也有吸收，故测定波长也不宜选择过小。因此，选择214 nm作为检测波长。

[1]WS－1005(X－750)－2002，国家药品监督管理局药品标准[S].

[2]闫小燕，胡 欣，曹国颖.等.高效液相色谱法测定奥拉西坦氯化钠注射液中主药的含量[J].中国药房，2006，17(8):618－620.

[3]刘 萍，夏 钊，彭艳梅.高效液相色谱法测定奥拉西坦口服液中奥拉西坦的含量[J].中南药学，2008，6(6):304－306.