高效液相色谱法测定麻仁润肠丸中橙皮苷含量

姜雪敏，杨立志，许世伟，李延雪

(黑龙江省鸡西市药品检验所，黑龙江 鸡西 158100)

麻仁润肠丸由大黄、火麻仁、炒苦杏仁、木香、白芍、陈皮组方，具有润肠通便的功效，用于肠胃积热、胸腹胀满、大便秘结。其质量标准[1]中无橙皮苷的含量控制。为更好地控制麻仁润肠丸的质量，笔者参考相关文献[2－4]，采用高效液相色谱(HPLC)法测定了制剂中橙皮苷的含量，报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－2010A型高效液相色谱仪;AG285型电子分析天平;KQ－400KDE型超声波清洗器。橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100721－200512);麻仁润肠丸(批号为0013278，0013282，0013296);水为纯化水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Extend－C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 － 0.1%磷酸溶液(18∶82);流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量:10 μL;检测波长:283 nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000。

2.2 溶液制备

精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含橙皮苷0.106 0 mg的溶液，即得对照品溶液。取样品10丸，精密称定，研细，精密称取0.509 7 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率400 W，频率40 kHz)30 min，取出，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失质量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方量并以相同工艺制备不含陈皮的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取2.2项下3种溶液，按2.1项下色谱条件测定。结果阴性对照品溶液色谱图中，在橙皮苷色谱峰相应位置无干扰峰出现，表明阴性样品的其他组分对橙皮苷的测定无干扰(图1)。

线性关系考察:精密吸取橙皮苷对照品溶液 2，5，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以橙皮苷进样量为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得回归方程 Y=1.830 686×106X+2.074449 ×104，r=1.0000(n=5)。结果表明，橙皮苷 进 样 量 在 0.212 0～2.1200μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样6次。结果峰面积的 RSD=0.24%(n=6)，表明方法精密度良好。

重现性试验:取同一批样品(批号为0013278)，分别依法制备6份供试品溶液并测定含量。结果的 RSD=1.02%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一份供试品溶液，分别在配制后0，2，4，6，8，10，16 h时依法测定。结果峰面积的 RSD=0.26%(n=7)，表明橙皮苷在供试品溶液中16 h内稳定。

加样回收试验:称取已知含量的同批样品(批号为0013278，含量为5.84 mg/g)6份，每份约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，以两份为一组，共 3 组，每组分别精密加入 1.060，1.431，1.590 mg橙皮苷对照品，按供试品溶液的制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

2.4 样品含量测定

取3批样品，按拟订的含量测定方法测定。结果批号为0013278，0013282，0013296 的样品中橙皮苷含量分别为 5.84，5.08，5.96 mg/g。

表1 橙皮苷加样回收试验结果(n=6)

3 讨论

橙皮苷的提取是影响其含量测定的关键之一。本试验曾以甲醇、50%甲醇、稀乙醇为提取溶剂，结果以甲醇为提取溶剂时橙皮苷含量明显较高。还比较了超声提取20，30，40 min，结果表明超声30 min橙皮苷提出率高于20 min，与40 min提出率基本相同，故本试验采取超声30 min的方法提取。对甲醇－水、乙腈－0.1%磷酸溶液、甲醇－冰醋酸－水等流动相进行了考察，结果发现乙腈－0.1%磷酸溶液能很好地改善分离度和柱效，经过条件优化选择，确定了乙腈－0.1%磷酸溶液(18∶82)为流动相，橙皮苷峰与其他组分能实现完全分离。

[1]国家药典委员会.中华人民国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:1 094－1 095.

[2]廖厚知，粟华生，梁山丹，等.HPLC测定银芒止咳片中橙皮苷的含量[J].中成药，2007，29(7):附 22 －23.

[3]庞小雄，梁松庆，钟兆健，等.HPLC法测定拈痛丸中橙皮苷的含量[J].中药材，2007，30(6):734 －735.

[4]王 薇，丁东平，刘祖雄，等.二陈颗粒的制备与质量控制[J].中国药房，2006，17(23):1 782 －1 784.