石榴不同品种及部位总黄酮含量分析

郭永谊，黄 汉，黄晓丹

（1.中山大学第五附属医院，广东 珠海 519000；2.广州天心制药厂，广东 广州 51000）

石榴（Punica granatumL.）为石榴科Punicaceae石榴属（Punica L.）落叶灌木或小乔木［1］，全世界共有1属［石榴属（Punica L.）］，2种，在我国各地区均有种植，种质资源丰富。它分为观赏与食用两种，营养价值高，同时也是珍贵的蜜源、药用和化工产品原材料，应用十分广泛［2］。根据口味不同分为酸石榴和甜石榴。石榴中的主要化学成分有：黄酮类、氨基酸、矿物质、鞣花酸、脂肪酸、多酚、维生素等［3］。其中黄酮类化合物的生理活性较广泛，具较强的抗氧化作用，但在石榴不同部位的对比研究较少。本实验旨在探讨石榴不同品种及部位中总黄酮含量差异，为进一步充分利用石榴不同部位奠定理论基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AL204电子分析天平（梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司）；

SHB－3循环水多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）；721可见分光光度计（上海欣花仪器有限公司）；DK－600A型电热恒温水箱（上海一恒科技有限公司）；RE－52B旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

1.2 试药

酸石榴、甜石榴（均采自新疆喀什当年产的新鲜石榴）；芦丁（中国药品生物制品检定所，批号100080－200306）；乙醇（乌鲁木齐化学试剂厂），5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，4%氢氧化钠溶液均由天津市海光化学试剂厂提供；以上试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 芦丁对照液的制备

精密称取120℃下恒温干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置100mL容量瓶中，加70%热乙醇适量使其溶解，后用70%乙醇定容至100mL，摇匀，制成0.1mg·mL－1的芦丁对照液，备用。

2.2 供试品溶液的制备

分别称取酸、甜石榴的石榴皮，隔膜，石榴籽，内种革皮质各5g，粉碎，加入10倍量蒸馏水，80℃提取1次，提取时间30min，过滤，滤液备用。

2.3 标准曲线的绘制［4］

分别精密吸取 0.0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL芦丁对照品溶液置于10mL容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4.0mL，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min。于510nm波长处以试剂为空白，测其吸收光度，结果见图1。

图1 芦丁标准曲线

2.4 石榴不同品种及不同部位中总黄酮含量测定

分别精密量取酸、甜石榴的石榴皮，隔膜，石榴籽，内种革皮质的提取液滤液各1mL于50mL容量瓶稀释，再从中取2mL至25mL容量瓶中，按标准曲线项下方法显色，测吸收度，从标准曲线方程计算总黄酮含量。酸石榴实验结果见表1、图2。甜石榴实验结果见表2、图3。

表1 酸石榴不同部位总黄酮含量

图2 酸石榴不同部位总黄酮含量

表2 甜石榴不同部位总黄酮含量

图3 甜石榴不同部位总黄酮含量

由表2、图3可以看出，甜石榴总黄酮含量最高的是石榴皮，最低的是石榴籽，它们的差异达0.00097mg／mL。

2.5 酸石榴与甜石榴中总黄酮含量比较

对酸石榴和甜石榴的不同部位进行比较分析，结果见表3、图4。

表3 不同品种不同部位总黄酮含量比较

图4 酸石榴和甜石榴不同部位总黄酮含量比较

由表3、图4可以看出，酸、甜石榴籽所含的总黄酮含量最低，分别为0.000063mg／mL，0.000032mg／mL。而石榴皮所含的总黄酮含量最高，酸石榴皮为0.001083mg／mL，甜石榴皮为0.001003mg／mL，其次是石榴内种皮革质，甜石榴内种皮革质所含的总黄酮含量为0.000647mg／mL，酸石榴内种皮革质含量为0.000857mg／mL。

3 结论

甜石榴和酸石榴所含的总黄酮含量在温度80℃，比例1∶10，提取次数为1次，提取时间为30min的条件下提取，酸石榴各部位的总黄酮含量均比甜石榴的高，酸石榴和甜石榴不同部位总黄酮含量的大小顺序为石榴皮﹥内种皮革质﹥隔膜﹥石榴籽。

4 讨论

本实验采用Folin－Ciocalteu法测定总黄酮，工作曲线线性良好，该方法操作简单，效率高，设备要求低，显色明显。

本研究所测定的总黄酮量较低，与许宗运［5］测定的新疆南部石榴的石榴皮总黄酮含量6.23mg／g有差距，这可能与提取方法有关。有文献显示，用热水浸提法提取，提取成本低，设备简单、安全，但黄酮得率也较低［6］。由于本研究是定性比较不同石榴品种及部位总黄酮含量，为日后研究石榴不同部位的开发利用提供理论指导基础与方向。

在制备原料的过程中，粉碎甜石榴原料时内种皮革质中含有多糖成分，机器运行散热时，容易粘在机器内壁，在操作时应注意。

在实验过程中甜石榴的提取液很难保存容易发霉，比酸石榴提取液稳定性差，所以要求样品存放于冰箱中，并且要快速测定。

我国石榴资源丰富，如能加大对石榴的开发利用，不但可提高经济效益，而且能更好地促进石榴在保健、药用方面的研究发展。建议加强以下几个领域的研究工作，一是对我国石榴种质资源进行全面系统的普查，比较研究不同产区石榴品种的有效物质如有机酸、脂肪酸、丹宁、多酚化合物、抗氧化剂等成分与含量，筛选出综合性状优良的石榴品种［7］；二是对石榴深加工产品进行系统研究，如石榴果汁、发酵石榴果汁、石榴果皮提取物及石榴籽油的研究与开发，筛选出保健功能显著的石榴加工品；三是对石榴加工产品或石榴提取物进行临床研究，探索其保健功能如抗癌、抗心血管疾病等的作用机理［8］。

［1］汪小飞，周耘峰，赵昌恒，等.36 个石榴（Punica granatum L.）品种的品质测定［M］.热带作物学报，2010（1）：31.

［2］苑兆和，尹燕雷，朱丽琴，等.石榴保健功能的研究进展［J］.山东林业科技，2008（1）：174.

［3］王如峰，向兰，杜力军，等.石榴的化学成分［J］.亚太传统医药，2006（3）：61－70.

［4］吴静，支金虎.石榴叶中总黄酮含量的测定［J］.河西学院学报，2009，22（2）：49.

［5］许宗运，蒋慧，吴静，等.石榴皮和石榴渣总黄酮的测定［J］.中国农业科学，2003，19：72－75.

［6］陈红梅.石榴皮黄酮类物质不同提取方法的比较［J］.安徽农学通报，2008（24）：17.

［7］汪小飞，向其柏，尤传楷，等.石榴品种分类研究 ［J］.南京林业大学学报：自然科学版，2006，30（4）：63.

［8］陈魏.石榴的化学成分与药理活性［J］.中国粮油学报，2009（4）：82.